针刺列缺穴对过敏性鼻炎模型大鼠鼻黏膜病理学的影响*

丁然然杨帆刘洋李宁刘思娣

（1.安徽中医药大学，安徽合肥230038；2.安徽中医药大学针灸经络研究所，安徽合肥230038）

·研究报告·

针刺列缺穴对过敏性鼻炎模型大鼠鼻黏膜病理学的影响*

丁然然1杨帆2△刘洋1李宁1刘思娣1

（1.安徽中医药大学，安徽合肥230038；2.安徽中医药大学针灸经络研究所，安徽合肥230038）

目的观察针刺列缺穴对过敏性鼻炎大鼠行为学和鼻黏膜病理学的影响。方法卵白蛋白建造大鼠过敏性鼻炎模型。60只SD雄性健康大鼠随机分为空白组、对照组和针刺组每组各20只。观察针刺列缺穴对大鼠行为学和病理学的影响。结果实验前（第1日）3组行为学差别不大（P＞0.05）；第7日（模型复制局部激发结束后），与空白组比较，对照组、针刺组18只大鼠鼻痒、喷嚏和流涕等行为学总积分增加（P＜0.01）；第14日（干预后），针刺组行为学总积分与模型组比较明显降低（P＜0.05）。空白组大鼠鼻黏膜肉眼观无充血、无肿胀，颜色淡红；光镜下无嗜酸性粒细胞浸润；对照组大鼠鼻黏膜肉眼观苍白，可见多处溃疡，充血水肿，鼻甲肿胀，时有清稀分泌物，光镜下腺体增生，嗜酸性粒细胞浸润明显增多；针刺组鼻黏膜充血、水肿、溃疡较对照组明显好转，且嗜酸性粒细胞数目较对照组明显减少。结论针刺列缺可加快修复鼻黏膜上皮细胞，减少嗜酸性粒细胞等炎症细胞浸润而改善过敏症状。

过敏性鼻炎针刺列缺实验学

过敏性鼻炎（AR）是一种吸入刺激物而致的以鼻黏膜嗜酸性粒细胞等多种炎性细胞浸润，IgE介导的免疫细胞释放化学介质引起的I型变态反应炎症性疾病［1］。与中医学“鼻鼽”接近，其原因多为情志不遂，外感六邪，饮食不洁，劳逸失调致鼻道壅塞从而发鼻塞、鼻涕、喷嚏、鼻痒等临床症状。近年来由于全球自然环境恶化、城市污染加剧、生活节奏加快等等原因，过敏性鼻炎的患病率明显增加，严重影响患者工作、学习、生活，已成为全球性健康问题之一。针灸临床已经证实针刺列缺穴对过敏性鼻炎有一定的治疗作用［2］，但作用机制并不十分清楚。本实验通过建立卵白蛋白致大鼠过敏性鼻炎模型，观察针刺列缺对大鼠行为学和鼻黏膜病理学的改变，揭示针刺列缺通利鼻窍的可能机制。现报告如下。

1　材料与方法

1.1动物及分组选用健康SD雄性大鼠（购于苏州工业园区爱尔麦特科技有限公司），体质量（450±30）g。采用旷场实验法［3］作行为学评分，选择得分相近的60只SD大鼠，适应性喂养7 d后，再采用随机数字表法分为空白组、针刺组和对照组，每组各20只。实验过程中对动物的处置符合2006年国家科技部《关于善待实验动物的指导性意见》的规定［4］。

1.2试剂与仪器卵白蛋白（A5378：美国Sigma公司）。氢氧化铝（天津市光复精细化工研究所，产品标准号为津Q/HG NK 204-2000）。针灸针（天协牌，苏州，规格：0.25 mm×13 mm）。世泰粘附载玻片（规格为25 mm× 75 mm）；冷冻切片机（Leica CM1900）；HE染色常规试剂；旷场试验箱（自制80 cm×80 cm×40 cm，并将旷场等分为25小格）。腹腔注射基础致敏剂配制：佐剂卵白蛋白30 mg，氢氧化铝3 g，0.9%氯化钠溶液100 mL，配制后放冰箱冷藏备用。2%卵清蛋白滴鼻液配制：用卵清蛋白加入0.9%氯化钠溶液配制成浓度为2%的卵清蛋白滴鼻液冰箱冷藏备用。

1.3模型制备模型制备采用目前常用的“基础致敏与局部攻击法”［5-7］，具体方法为对照组和针刺组用腹腔注射基础致敏剂腹腔注射，每次1 mL，隔日1次，共7次。用2%卵清蛋白滴鼻液每侧50 μL滴鼻做局部激发，每日1次，共7次，2种致敏方法同时进行。空白组大鼠隔日用0.9%氯化钠溶液1 mL腹腔注射，共7次，每日50 μL 0.9%氯化钠溶液每侧滴鼻，共7次。模型评判标准主要是通过1998年Nabe等［8］症状学的观察：依据致敏后30 min鼻痒、喷嚏、流涕等症状记录并计分。第7日，各症状计分叠加，总分＞5分者为模型成功［9］。模型成功情况：模型复制第7日时，对照组大鼠在腹腔注射过程中死亡1只，行为学总积分＞5分有18只，针刺组大鼠行为学总积分＞5分有19只。每组存留18只模型成功大鼠进行下一步实验。

1.4针刺治疗针刺组大鼠放到大鼠治疗台上，选用天协牌25 mm×75 mm针灸针，参照林文注主编的全国协编教材《实验针灸学》取穴，在大鼠安静状态下，针刺大鼠双侧前腿的“列缺”穴，进针约2～3 mm，行平补平泻手法，留针20 min。空白组与对照组：每日放上治疗架20 min固定而不针刺。各组于第8～14日，每日9∶00进行。

1.5观察指标1）行为学积分。对所有实验大鼠在实验进行的第1日（开始实验前）、第7日（模型复制局部激发结束后）、第14日（针刺干预后）进行行为学观察并计分。每日建造模型后30 min，用电子摄像机记录大鼠鼻痒、喷嚏、流涕等行为并叠加计分（鼻痒程度：挠鼻，计1分；挠鼻不止，计2分。喷嚏：1～3个为1分，4～10个为2分，11个以上为3分。流涕：流至鼻前孔为1分，超过鼻前孔为2分，流涕满面为3分）。2）鼻黏膜取材及观察。所有动物实验结束后，对3组大鼠行心脏空气针处死，游离出上颌骨，取出鼻中隔前中段组织。10%甲醛固定，蔗糖脱水，冷冻机切片，常规HE染色，光学显微镜（×200倍镜）下观察病理改变。

1.6统计学处理采用SPSS17.0统计软件。计量资料以（±s）表示。组间比较若满足正态性者，使用单因素方差分析，不满足正态性资料用秩和检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1各组大鼠行为学积分比较见表1。实验前（第1日）3组行为学差别不大（P＞0.05）；第7日（模型复制局部激发结束后），与空白组比较，对照组、针刺组18只大鼠鼻痒、喷嚏和流涕等行为学总积分增加（P＜0.01）；第14日（干预后），针刺组针刺列缺后，行为学总积分与模型组比较有明显降低（P＜0.05）。

表1　各组大鼠行为学积分比较（分，±s）

表1　各组大鼠行为学积分比较（分，±s）

与空白组比较，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05。

组别第7日第14日n第1日空白组0.28±0.460.33±0.49对照组6.28±1.22**4.72±1.77 180.28±0.57 180.44±0.61针刺组6.00±1.08**3.00±1.81△180.33±0.59

2.2各组大鼠鼻黏膜病理组织的观察见图1～图3。各组大鼠鼻黏膜10×20倍镜下病理组织切片观察发现，空白组大鼠鼻黏膜肉眼观无充血、无肿胀，颜色淡红；光镜下无嗜酸性粒细胞浸润；对照组大鼠鼻黏膜肉眼观苍白，可见多处溃疡，充血水肿，鼻甲肿胀，时有清稀分泌物，光镜下腺体增生，嗜酸性粒细胞浸润明显增多；针刺组大鼠针刺列缺后，肉眼观，光镜下，上述病理学特征得到明显改善，说明针刺列缺可改善过敏性鼻炎症状，进一步证实了针刺列缺通利鼻窍的治疗可行性。

图1　各组鼻黏膜病理组织观察（HE，×200）

3　讨论

鼻炎治疗西医多采用免疫疗法和药物治疗。免疫疗法过敏原较难确定而且标准难统一，起效慢，疗程长，患者依从性差。药物治疗以抗组胺药、糖皮质激素等为主，虽然改善症状明显，但毒副作用大［10］，治疗效果往往不令人满意。

近年来治疗鼻炎的中医疗法，如中药、针灸、推拿等具有毒副作用小、效果明显等自然资源优势，受到人们的广泛重视［11］。列缺出自《灵枢·经脉》，属手太阴肺经络穴，四总穴之一。鼻的通气和嗅觉功能必须依赖肺气的宣发运动［12］，故列缺可宣通肺气，通利鼻窍；《四总穴歌》谓“头项寻列缺”，因此列缺穴可用作治疗头面鼻腔的远取穴。大量的临床实践中发现，对于治疗急、慢鼻炎，选取列缺穴，往往可以得到良好效果［13-15］。

过敏性鼻炎模型的建立，以陈忠［16］为代表的多数学者采用卵白蛋白对大鼠行全身致敏和局部攻击的方式，采用豚草花粉［17］、蛔虫变应原［18］方式致敏等。研究表明卵白蛋白致敏可行性高，动物存活率高，有效率高。本实验采用此模型复制方法复制过敏性鼻炎模型，成功率较高。本实验结果示，针刺列缺穴对过敏性鼻炎模型大鼠行为学及病理学的改变具有一定的研究意义，针刺组针刺后，行为学总积分较对照组明显下降，鼻黏膜病理切片嗜酸性粒细胞数目明显减少，表明针刺列缺穴一定程度上可加快鼻黏膜上皮的自我修复，抑制炎症细胞，特别是嗜酸性细胞在浸润而改善过敏症状。

针刺对过敏性鼻炎的作用机制目前尚无定论，赖新生［19］认为针刺可影响患者总IgE和特异性IgE水平；娄述［20］认为取“碟愕神经节”为主穴可刺激鼻腔内植物神经而达到治疗目的；周小宁［21］、冯建国［22］认为与“低皮质醇水平”有关，针刺后血浆皮质醇含量升高。而针刺列缺对过敏性鼻炎模型大鼠鼻黏膜病理学的影响研究未见文献报道，本实验揭示了针刺列缺通利鼻窍的部分实验原理，为进一步探讨针刺对过敏性鼻炎大鼠的作用机理提供了一定依据。

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Exprimental Research on the Effect of Acupuncturing at Lieque on the Nasal Mucosa Pathology Changes of Model Rats with Allergic Rhinitis

DING Ranran，YANG Fan，LIU Yang，et al.
Anhui University of TCM，Anhui，Hefei 230038，China

Objective：To observate the AR rat′s ethology and nasal mucosa pathology changes after acupuncturing at Lieque.Methods：60 SD healthy male rats were randomly divided into the blank group，the model group and the acupuncture group，built with the model of allergic rhinitis.Results：Bofore experiment，there were no significant behavioral differences in the three groups（P＞0.05）.On the 7th day，compared with the blank group，18 rats in the control group and the acupuncture group had an increasing general behavior score，such as nasal itching，sneezing and runny nose（P＜0.01）.On the 14th day，after acupuncturing at Lieque，compared with the model group，the general behavior score of the acupuncture group had an obvious reduce（P＜0.05）.In the blank group，there was no obvious congestion and swelling in nasal mucosa with pink color and no eosinophilic infiltration under mircoscope.In the control group，there were obvious pale nasal mucosa，ulcers，congestion，swelling，Turbinate swelling，sometimes clear dilute secretion，gland hyperplasia under microscope，and an increase of eosinophilic infiltration.In the acupuncture group，nasal mucosa congestion，edema and ulcers were improved obviously，and the number of EOS was significantly reduced.Conclusion：Acupuncturing at Lieque can speed up the repair of nasal mucosa，decrease EOS and improve the symptoms of allergy.

Acupuncture；Lieque；AR；Expriment

R245.3

A

1004-745X（2015）10-1743-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.10.017

2015-05-02）

安徽省大学生创新创业训练项目（AH201410369201）

（电子邮箱：811375706@qq.com）