晚期糖基化代谢产物受体在子痫前期孕妇胎盘组织的表达及其意义

方　姗　孙建琦　葛加美

晚期糖基化代谢产物受体在子痫前期孕妇胎盘组织的表达及其意义

方姗孙建琦葛加美

目的 探讨晚期糖基化代谢产物（RAGE）在子痫前期孕妇胎盘组织的表达及其作用。方法 选取2012年10月至2013年9月20例正常孕妇、20例轻度子痫前期孕妇及20例重度子痫前期孕妇。运用蛋白质印迹法检测三组中孕妇胎盘组织中RAGE蛋白表达水平，采用RTPCR法检测胎盘组织内RAGE mRNA表达水平。对数据进行统计分析。结果 三组胎盘组织RAGE蛋白表达水平：对照组（0.418±0.0270）、轻度子痫组（0.732±0.038）、重度子痫组（1.045±0.041），子痫患者胎盘组织中RAGE蛋白表达水平均明显高于对照组（P＜0.01），且重度子痫组表达水平显著高于轻度子痫组（P＜0.01）。三组胎盘组织中RAGE mRNA水平分别为：对照组（0.276±0.031）、轻度子痫组（0.518±0.047）、重度子痫组（0.903±0.054）。子痫胎盘组织RAGE mRNA表达水平均较对照组明显升高（P＜0.01），且重度子痫组表达水平高于轻度子痫组（P＜0.01）。结论 胎盘组织中RAGE表达升高可能与子痫前期的发生及病情严重程度存在关联。

晚期糖基化终末产物受体 子痫前期 胎盘组织

子痫前期（PE）是妊娠期高血压病的一种，是常见严重危害母婴健康的并发症之一［1］。近年来，随着对子痫前期的进一步了解，其治疗方法及母婴预后均明显改善，但目前对其病因及发病机制仍未完全阐明。炎症在子痫前期中的作用越来越受到国内外学者的重视，晚期糖基化代谢产物（RAGE）属于IG超家族，可通过多条信号通路参与炎症过程。本资料通过检测正常孕妇、轻度子痫前期孕妇、重度子痫前期孕妇胎盘组织中RAGE蛋白及其mRNA的表达水平，探讨RAGE在子痫前期孕妇胎盘组织中的表达情况及其意义。

1　临床资料

1.1一般资料 选取2012年10月至2013年9月期间在嘉兴市妇幼保健院产科住院患者作为观察对象，轻度子痫前期孕妇20例，重度子痫前期孕妇20例，诊断标准按照乐杰主编《妇产科学》［2］。对照组选取正常健康足月妊娠孕妇20例。所选取对象均为单胎妊娠，排除糖尿病、高血压及免疫性疾病，无其他妊娠合并症，分娩方式均选取剖宫产。观察对象一般临床资料比较见表1，各组间差异无统计学意义（P＞0.05）。本项目通过本院伦理委员会批准，标本提供孕妇均知情并签署同意书。

表1　各组一般临床资料比较（±s）

表1　各组一般临床资料比较（±s）

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1.2方法 （1）标本的采集与处理：孕妇胎盘娩出后，立即于母体面中央处（避开出血及钙化区）取1.0cm×1.0cm×1.0cm大小胎盘组织，生理盐水冲洗3遍，干燥后装入无菌EP管中，置于液氮中保存备用。（2）胎盘组织中RAGE蛋白的表达：采用蛋白质印迹法检测。胎盘组织200mg剪碎，加入PIRA细胞裂解液，4℃，12000r/min离心30 min，收集上清液，使用BCA法进行蛋白定量，调整各标本浓度至相同，用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶分离出蛋白带，并转移至硝酸纤维膜上，4℃封闭过夜，加入兔抗人的RAGE单克隆抗体（美国bioworld公司，稀释比1：1000）室温下免疫沉淀2 h，Tris 缓冲盐溶液吐温20（TBST）摇洗3次后加入辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG（美国Earthox公司，稀释比1：3000），室温下放置2 h。TBST摇洗，加入增强化学发光试剂均匀混合，充分浸膜，取膜，暗室中压胶片，显影。以GAPDH为对照，以RAGE与GAPDH灰度值比值表示RA GE的表达。（3）胎盘组织中RAGE mRNA的表达：采用RT-PCR法检测。Trizol法提取100mg胎盘组织中的总RNA。按照逆转录试剂盒（北京全式金生物科技公司）说明进行操作，引物由上海康为世纪公司设计合成。扩增条件为： 94℃ 5min，94℃30s，59℃ 30s，72℃ 1min，35个循环，72℃ 10min。扩增结束后取PCR产物5μl于20g/L琼脂糖凝胶中电泳。RAGE mRNA的表达以其与GAPDH的灰度值比值表示。

1.3统计学方法 采用SPSS 19.0统计软件。计量资料以（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析或t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1胎盘组织中RAGE蛋白的表达 与对照组比较，轻度子痫前期组及重度子痫前期组RAGE蛋白表达水平均明显升高（P＜0.01），且重度子痫组升高更显著（P＜0.01），见图1，表2。

表2　各组胎盘组织中RAGE蛋白表达水平比较［RAGE/GAPDH，（±s）］

表2　各组胎盘组织中RAGE蛋白表达水平比较［RAGE/GAPDH，（±s）］

注：与对照组比较，*P＜0.01；与轻度子痫比较，#P＜0.01

组别样本数RAGE轻度子痫前期 200.732±0.038*重度子痫前期201.045±0.041*#对照组200.418±0.027 F值44.182 P值0.000

2.2胎盘组织中RAGE mRNA的表达 与对照组比较，轻度子痫组和重度子痫组RAGE mRNA表达水平均显著增高（P＜0.01），且重度子痫组升高较轻度子痫组更显著（P＜0.01），见表3。

表3　各组胎盘组织中RAGE mRNA水平比较表达［RAGE/GAPDH，（±s）］

表3　各组胎盘组织中RAGE mRNA水平比较表达［RAGE/GAPDH，（±s）］

注：与对照组比较，*P＜0.01；与轻度子痫比较，#P＜0.01

组别样本数RAGE mRNA轻度子痫前期 200.518±0.047*重度子痫前期200.903±0.054*#对照组200.276±0.031 F值23.482 P值0.000

3　讨论

子痫前期是妊娠妇女特有的疾病，发病机制仍未阐明。有研究认为妊娠本身就是一种轻度的炎症反应，但这种炎症反应不会引起母体的任何症状，但在子痫前期患者中，这种炎症被过度放大，进而引起一系列的症状。Hung等发现子痫前期孕妇血中白细胞大量激活［3］，Medzhitov等发现子痫前期孕妇外周血炎性细胞因子水平升高［3］均支持这一观点，子痫前期孕妇血清中CRP、IL-6、IL-8、MCP-1等炎性损伤标志物水平较正常孕妇显著升高。

RAGE是一种跨膜蛋白，最初在牛肺内皮细胞中发现，属于免疫球蛋白超家族，正常生理状态下，RAGE的蛋白及mRNA含量均低表达，但在病理状态下，局部RAGE配体堆积，可通过受体依赖的方式上调RAGE的表达，继而通过受体与配体的结合，从而活化细胞，放大配体的生物学作用，最终引起细胞及组织的损伤［4］。

在本资料中，轻度子痫组和重度子痫组胎盘组织中RAGE蛋白均较正常胎盘组织中表达增高，RTPCR结果显示轻度子痫组和重度子痫组RAGE mRNA表达水平同样比对照组显著升高，与高琳等实验结果一致［5］。表明RAGE可能在子痫前期的疾病发生过程中起到重要的作用。同时在实验中发现重度子痫前期RAGE蛋白及RAGE mRNA表达均较轻度子痫组升高，表明RAGE与疾病发生及病情严重程度可能存在关联，其机制有待进一步研究。

1 Schmidt AM， Hori O， Cao R， et al. RAGE， a novel cellular receptor for advanced glycation end products. Diabetes， 1996， 45（Suppl 3）： S77080.

2 乐杰（主编）. 妇产科学. 第七版. 人民卫生出版社. 2008.8.

3 Hung TH， Charnock-jones DS， Skepper JN， et al. Secretion of tumor necrosis factor-α from human placental tissues induced by hypoxiareoxygenation causes endothelial cell activation in vitro ： a potential mediator of the inflammatory response in preeclampsia. Am J Pathol，2004， 164（3）： 1049.

4 Schmidt AM， Yao SD， Yan SF， et al. The multiligand receptor RAGE as a progression factor amplifying immune and inflammatory response. J Clin Invest， 2001， 108（7）：945～955.

5 高琳，刘文辉，栾南南，等.高迁移率族蛋白1及其受体晚期糖基化终末产物的表达与子痫前期发病的关系.中华妇产科杂志，2008，43（10）：746～750.

314000 嘉兴学院附属嘉兴市妇幼保健院（方姗 葛加美）

314000 浙江省嘉兴市秀洲区妇幼保健院（孙建琦）