三黄巴布软膏贴剂对甘油果糖所致静脉炎动物消炎实验研究

王翠娟　封燕琴　骆彩琴　黄知音

三黄巴布软膏贴剂对甘油果糖所致静脉炎动物消炎实验研究

王翠娟封燕琴骆彩琴黄知音

目的 观察三黄巴布软膏贴剂对甘油果糖所致动物静脉炎模型中血清IL-6表达及相关病理镜检结果分析。方法 采用实验兔耳缘静脉注射甘油果糖，复制静脉炎模型，采用随机数字表法将18只模型兔分为对照组、三黄软膏组和三黄巴布软膏贴剂组，每组各6只，模型建立后进行采血送检及病理学检测。结果 三组动物模型IL-6含量之间变化差异有统计学意义（P＜0.05），此外，病理结果评分显示巴布剂组与其他两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 三黄巴布软膏贴剂可以通过降低血清中IL-6炎症细胞因子含量，并改善注射区域血管条件，达到治疗甘油果糖静脉注射引发实验兔耳静脉炎的效果，并较三黄软膏更具优势，值得临床实践应用。

静脉炎 甘油果糖 巴布软膏贴剂

静脉炎是由于输入强刺激性、高浓度药物或使用时间较长，损伤静脉内皮细胞而诱发［1］。甘油果糖作为一种高渗制剂，因其有效的脱水作用，被广泛应用于骨科领域，然而在临床应用中发现甘油果糖注射后，患者常会出现注射区域疼痛、肿胀等急性血管无菌性炎症病理变化，给患者带来痛苦，降低了治疗的依从性［2］。因此甘油果糖所致静脉炎问题临床亟待解决，三黄巴布软膏贴剂经动物实践研发完成，主要采用中药黄连、黄芪、黄柏等提炼加工为中药贴敷剂型。经实验发现，该剂型对防护甘油果糖所致静脉炎疗效良好，现报道如下。

1　材料与方法

1.1实验动物与药物 新西兰实验兔18只，体重2.5～3.0kg。三黄软膏：大黄、黄柏、黄芩各10g，粉碎，过筛，另取凡士林适量，烊化，调成膏状。三黄巴布软膏：取三黄软膏生药1剂（大黄、黄柏、黄芩各10g），大黄、黄芩采用6倍 60% 乙醇热回流提取1h，回收乙醇，浓缩至适量，得浓缩液A；取黄柏，与大黄、黄芩乙醇提取后药渣合并，加水6倍，煎煮3次，2 h/次，滤过，合并滤液，浓缩至适量，得浓缩液B。合并浓缩液，喷雾干燥，得三黄提取物；具体处方如下：三黄提取物100g，卡波姆90g，聚乙烯醇90g，聚丙烯酸钠120g，羧甲基纤维素钠105g，氮酮20g，甘油1500g，丙二醇适量，双蒸水适量。采用随机数字表法将动物分为对照组、三黄软膏组和三黄巴布软膏贴剂组三组，每组各6只。在清洁环境中单笼饲养，适应性喂养1周。

1.2静脉炎模型的建立 1周后在各实验组兔耳缘静脉距耳尖2cm处穿刺，甘油果糖氯化钠注射液按照1.0mg/kg剂量，并以生理盐水稀释至10ml，室温下静脉推注，待兔耳出现注射区域肿胀，以确定模型建立成功。

1.3干预措施 对照组不给予任何干预措施。三黄软膏组及三黄巴布软膏贴剂组分别予三黄软膏外涂和三黄巴布软膏贴剂外用，范围：从穿刺点前端0.5cm处沿静脉外涂（贴），长4cm宽2cm，三黄软膏涂抹厚度为3mm。每天采取同样药物、方法外敷，1次/d，连续3d。

1.4标本采集和处理 取造模前各组家兔耳缘静脉1ml血液，以确立对照组，造模成功72h后，于各组兔耳穿刺处采样1ml血液，进行冷冻送检。所有试剂使用前室温平衡，分别配置及设立标准孔、待测样品孔、空白孔。向各孔中加入100μl，酶标板加上覆膜，37℃温育2h，弃去液体后，每孔加检测工作液A（临用前配制）100μl，酶标板加上覆膜，37℃温育1h，再弃去液体，每孔用350μl的洗涤液洗涤，浸泡1～2min，甩去孔内液体，重复洗板3次。而后，每孔加检测工作液B（临用前配制）100μl，酶标板加上覆膜，37℃温育30min，弃去液体，甩干，再重复洗板5次，每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜，37℃避光温育15min。最后，每孔加终止液50μl，终止反应。在确保酶标板底物无水滴及孔内无气泡后，立即用酶标仪在450nm下测量各孔的吸光度并记录、分析。再取三组活组织样本静脉进行显微镜高倍镜下观察切片及周围组织病理损伤染色镜检，并从以下几项指标进行统计：血管内皮肿胀、血管周围水肿、炎性细胞浸润、内皮细胞增生、血管扩张、管腔充血、血管周围出血、纤维增生、血栓形成等9个项目，每个项目分为4个等级：正常（-）0 分、轻度（+）1 分、中度（++）2 分、重度（+++）3 分，由专业病理科医生盲法判断，累加所有分数，并计算出每组每只动物的均分，结果与对照组比较，进行统计分析。

1.5统计学方法 采用SPSS17.0统计软件包。计量资料以（±s）表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1药物对兔静脉炎模型血清中IL6含量的影响 见表1。

表1　药物对兔静脉炎模型血清中IL6含量的影响［pg/ml，（x±s）］

2.2病理结果 显微镜下显示：三黄软膏组耳缘静脉周围可见中度炎症，炎症细胞以中性粒细胞为主，同时可见淋巴细胞、巨噬细胞等，多数可见内皮细胞增生（中度或重度），静脉周围可见轻度或中度水肿现象，1只管腔充血，3只静脉周围出血，3只静脉周围成纤维细胞增生；对照组6只实验兔均可见中度或重度炎症、水肿，3只可见不同程度内皮增生、轻度内皮肿胀，1只可见小血栓形成；三黄巴布软膏贴剂组炎症程度较三黄软膏组减轻，内皮细胞增生以轻度和中度为主，2只出现轻度水肿，无血管扩张、血栓形成。见图1。

图1　镜下三组病理结果

2.3动物对兔静脉炎模型血清病理检测结果评分 见表2。

表2　动物对兔静脉炎模型血清病理检测结果评分（±s）

表2　动物对兔静脉炎模型血清病理检测结果评分（±s）

注：与三黄软膏组、对照组比较，*P＜0.05

组别n评分结果巴布剂组64.667±1.506*三黄软膏组66.833±1.602对照组610.167±4.215

3　讨论

化学性静脉炎是输注高渗性药物常见的并发症之一。甘油果糖因高渗性易引起静脉管壁通透性增加，造成血管内皮细胞脱水，甚至萎缩坏死，引起无菌性静脉炎［3］。而IL-6具有致炎和抗炎的双向功能，其作用与组织中的含量有关，正常水平对机体有利，产生过多会引起一系列炎性损害，此外，IL-6水平的变化可以反映炎症程度［4］。研究认为在炎症、感染或某些肿瘤等情况下，血清IL-6水平会不同程度地升高［5］。因此控制血清中IL-6水平过度增高，可有效抑制炎症的浸润和组织的损伤。

由实验结果分析，对照组实验动物造模后IL-6表达与造模前比较存在较大差异（P＜0.05），由此可见，甘油果糖致家兔耳缘静脉炎造模成功；三黄软膏组及三黄巴布软膏贴剂组IL-6含量较对照组明显减低（P＜0.05），说明两组药物在治疗甘油果糖所致的家兔耳缘静脉炎时均有效果。经比较，三黄软膏组的IL-6水平较三黄巴布软膏贴剂略高，可能与三黄软膏易变硬脱落、影响药物的有效吸收有关。在本资料结果中亦显示三黄巴布软膏贴剂组IL-6含量较其他两组低，可以证实三黄巴布软膏贴剂更具临床推广价值，但由于本实验样本量较小，期待有进一步的研究报道。

此外，对于病理观察发现三黄巴布软膏贴剂组炎症程度较其他两组明显减轻，内皮细胞增生以轻度和中度为主，仅2只出现轻度水肿，且在三黄巴布软膏贴剂组中6只模型兔均未出现血管扩张、血栓形成。与此同时，在三组病理结果评分上可以发现，三黄巴布软膏贴剂组显著低于其他两组。由此可见，三黄巴布软膏贴剂中含有黄连、黄柏等解热类凉性药物成分在预防甘油果糖所致静脉炎并发症上具有优势［6］，但对于三黄巴布软膏贴剂是否具有抑制血管扩张及预防血栓形成的作用还需进一步的实验观察。

原三黄软膏剂型防护甘油果糖所致静脉炎疗效确切［7～9］，但尚存在易脱落、污染衣物、患者依从性欠佳等缺陷［10］。中药巴布软膏贴剂是指以水溶性高分子化合物或亲水性物质作基质，与中药提取物制成的中药贴敷剂。中药巴布软膏贴剂系具有载药量大、透气性与保湿性好、无皮肤刺激性与致敏性、可反复揭贴、应用方便、不污染衣物等优点［11］。近年来中药巴布软膏贴剂制作工艺日益完善，临床应用日益广泛［12］，将已广泛运用于临床的三黄软膏进行改良，制成现有的三黄巴布软膏贴剂，不仅保留了原有药物的有效性，于此同时，更利于临床有效、方便使用等优点［13］。

综上所述，三黄巴布软膏贴剂可以通过降低血清中炎性细胞因子IL-6含量，并改善注射区域血管条件，达到治疗甘油果糖所致实验兔耳静脉炎的效果，并且较原先制剂更趋优势，该实验结果可为进一步推行三黄巴布软膏贴剂的临床使用提供依据。

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Objective To observe the effect on the serum level of IL-6 of San huang babu ointment patch on the animal model of phlebitis caused by glycerin fructose and related pathology change. Methods Glycerol fructose were injected into the experimental rabbit ear margin vein to copy phlebitis model，random number method was applied to pick divide 18 rabbits into three groups with 6 model rabbits in each， control group，san huang ointment and San huang babu ointment patch group，blood sample were collected and pathological examinationwere applied. Results The serum IL-6 levels varied signifi cantly（P＜0.05）.Three groups of animal model of，in addition，the pathological results scores showed san huang babu ointment patch group had statistical differences compared with the other two groups （P＜0.05）. Conclusion San huang babu ointment patch can reduce serum IL-6 infl ammatory cytokine levels，and improve the injection area vascular conditions，therefore can treat the experimental rabbit ear vein infl ammation triggered by glycerin fructose intravenous injection.，the effect is better than san huang ointment.

Phlebitis Glycerol fructose san huang babu ointment patch

浙江省护理科学研究项目（2012-A002）

310007杭州市中医院骨伤科