H7N9禽流感患者外周血T淋巴细胞亚群的分析及临床意义

黄燕　罗二平　朱义玲　阚延婷　甘建和*

H7N9禽流感患者外周血T淋巴细胞亚群的分析及临床意义

黄燕罗二平朱义玲阚延婷甘建和*

目的 探讨H7N9禽流感患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及临床意义。方法 将23例H7N9禽流感患者（感染组）根据临床治疗预后分为好转组15例和死亡组8例，另选择体检健康者20例为正常对照组。采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群CD3+CD4+T淋巴细胞、CD3+CD8+T淋巴细胞、Treg、Th17、CD3+CD8-IFN-γ+（Th1细胞）、CD3+CD8-IL-4+（Th2细胞）百分率的变化。结果 感染组治疗前外周血CD3+CD4+T淋巴细胞百分率、CD3+CD8+T淋巴细胞百分率明显低于正常对照组（P＜0.05），而Th17百分率、Th2细胞百分率较正常对照组明显增高（P＜0.05）；好转组治疗后外周血CD3+CD4+T淋巴细胞、Treg、CD3+CD8+T淋巴细胞百分率较治疗前明显增高，差异有统计学意义（P＜0.05），治疗后外周血Th17细胞百分率、Th1细胞百分率较治疗前明显下降（P＜0.05）；死亡组治疗前、后上述指标间差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 H7N9禽流感患者存在严重的T淋巴细胞失衡，监测H7N9禽流感患者T淋巴细胞指标变化，对评估临床预后具有重要的参考价值。

H7N9禽流感病毒 T淋巴细胞亚群 Th17 Treg

人感染H7N9禽流感是有H7N9禽流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其重症肺炎患者常快速进展为急性呼吸窘迫综合征（ARDS）、脓毒症、感染性休克甚至多脏器功能衰竭，目前研究认为H7N9禽流感病毒感染人体诱发的细胞因子免疫调节失衡是导致一系列危重并发症的主要原因，同时机体免疫功能状况也是决定禽流感病情发展和预后的重要因素。作者通过监测近2年本院收治的H7N9禽流感患者的外周血T淋巴细胞亚群并分析其变化，探讨H7N9禽流感的免疫学发病机制，了解免疫功能变化对疾病预后的影响。

1　临床资料

1.1一般资料 2013年4月至2015年4月本院救治的H7N9禽流感患者23例（感染组），其中男17例，女6例，年龄20～83岁。根据患者临床治疗预后分为好转组15例，其中男12例，女3例；年龄20 ～ 75岁。死亡组8例，其中男5例，女3例；年龄28 ～ 83岁。诊断依据参照《人感染H7N9禽流感诊疗方案》（2014年版）［1］。另选择同期本院体检健康者20例为正常对照组，其中男14例，女6例；年龄23～75岁。

1.2检查方法 T淋巴细胞亚群检测：所有患者均于住院第2天空腹抽静脉血4ml，采用肝素钠抗凝。治疗后所测数据均为患者最后1次空腹抽血检测。检测采用美国贝克曼库尔特XL-100流式细胞仪，所用试剂均由贝克曼提供，并通过CXP软件进行荧光信号参数获取和分析，获得外周血CD3+CD4+T淋巴细胞、CD3+CD8+T淋巴细胞、Treg、Th17、CD3+CD8-IFN-γ+（Th1细胞）、CD3+CD8-IL-4+（Th2细胞）的百分率。

1.3统计学方法 采用SPSS统计软件。计数资料用（x±s）表示，两组间比较应用两独立样本t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组患者T淋巴细胞亚群百分率比较 见表1。

表1　两组患者T淋巴细胞亚群百分率比较（%）

2.2好转组与死亡组治疗前后T淋巴细胞亚群百分率比较 见表2。

表2　好转组与死亡组治疗前后T淋巴细胞亚群百分率比较（%）

3　讨论

T淋巴细胞是机体维持免疫稳定，发挥免疫防御、免疫监视功能的重要细胞之一，根据其在免疫应答中的功能不同，分为辅助性T细胞、效应性T细胞、抑制性T细胞、细胞毒性T细胞等，一旦这些细胞在数量上或功能上发生变化，机体免疫平衡被打破，由此出现的免疫紊乱将导致临床发病或病情恶化。因近年来流感病毒如H1N1、H1N5、H7N9在我国流行，严重威胁人民健康，目前也越来越重视T淋巴细胞在流感患者中的研究。

王会军等［2］发现，H7N9禽流感患者外周血CD3+、CD8+、CD4+T细胞绝对数均低于正常对照组，治愈患者治疗后上述指标绝对数较治疗前明显升高，死亡组治疗前后上述指标之间差异无统计学意义，这与本资料结果大致相仿，提示在H7N9病毒感染患者中均存在比较严重的T淋巴细胞亚群失衡，其免疫功能紊乱导致机体发病甚至病情进展恶化。除绝对数上的差异，本资料还发现，好转组治疗后患者外周血CD3+CD4+T淋巴细胞百分率、CD3+CD8+T淋巴细胞百分率高于治疗前，且与正常对照组比较差异无统计学意义，这与王会军等［2］的研究结果也类似，提示经过治疗后患者机体免疫紊乱状态得以纠正，免疫平衡的恢复促进机体康复。有研究证明，H7N9感染与SARS及H5N1一样存在突发的细胞因子免疫调节失衡［3］，机体的免疫平衡状态被打破，表现为免疫抑制作用弱而炎症反应强的相对过激或亢进状态，因此，作者还监测具有免疫抑制或免疫无能作用的Treg细胞，以及能招募中性粒细胞等多种炎性反应细胞，且可分泌众多炎性反应因子明显促进炎症反应的Th17细胞，结果发现，好转组治疗前Treg较正常对照组明显下调，Th17百分率较正常明显升高，而治疗后好转组患者外周血Treg较前表达上调且与对照组比较差异无统计学意义，而好转组治疗后Th17虽较正常仍高，较治疗前却有明显下降，这样的变化趋势亦提示经治疗后症状改善的患者体内具有抑制性作用的调节性T细胞的比例明显增多，其抑制其他免疫效应细胞的激活和增殖的作用亦明显增强，可以有效阻止免疫过激反应，表现为Th17细胞的百分率下调。徐娟等［4］研究发现甲型H1N1流感危重患者外周血调节性T细胞比例较正常显著降低，机体免疫抑制相对不足，细胞免疫异常在此类疾病的发病机制中起重要作用。然而，方木通等［5］研究认为Th17淋巴细胞在甲型H1N1流感患者中的比例较健康人群显著下降，虽然均为甲型流感病毒感染，但结果与本资料H7N9禽流感中明显有差异，可能H7N9病情进展快，大多早期即进展为重症肺炎、呼吸衰竭、ARDS甚至多脏器功能衰竭，合并细菌感染甚至真菌感染几率高有关，而H1N1流感轻症患者多，相对炎症反应弱；同时使用的检测方法不尽相同，病例数不多等因素影响。

本资料显示H7N9禽流感患者外周血CD3+CD4+T淋巴细胞、CD3+CD8+T淋巴细胞、Treg细胞、Th17细胞、Th1细胞百分率在好转组患者治疗前后差异显著，但在死亡组差异无统计学意义，表明细胞免疫异常在此类病毒性流感的发病机制中作用显著，治疗后若患者免疫失衡状态得以改善，可能代表较好的临床预后，因此，监测H7N9禽流感患者细胞免疫指标，对评估患者临床预后具有重要的参考价值。

1中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会. 人感染H7N9禽流感诊疗方案（2014年版）. 传染病信息，2014，27（1）：Ⅰ～Ⅳ.

2毛会军，陈戴红，邱建萍，等.H7N9禽流感患者外周血T淋巴细胞亚群的分析及意义. 检验医学，2013，28（9）：758～761.

3Chen Y， Liang W， Yang S，et al.Human infections with the emerging avian influenza A H7N9 virus from wet market poultry： clinical analysis and characterisation of viral genome. Lancet，2013，381：1916～1925.

4徐娟，颜学兵，周培培，等.甲型H1N1流感危重症患者淋巴细胞亚群和CD4+CD25+调节性T细胞的检测及其意义.中华实验和临床感染病杂志（电子版），2011，5（1）：18～22.

5方木通，崇雨田，杨桂林，等.Th17淋巴细胞对甲型H1N1流行性感冒病毒清除作用的探讨. 中华传染病杂志，2010，28（10）：593～596.

Objective To investigate the changes and clinical significance of peripheral blood T lymphocyte subsets in influenza A （H7N9）virus infection patients. Methods According to the prognosis，23 patients with avian influenza A （H7N9） virus infection （infection group） were classified into 15 cases of improvement group and 8 cases of dead group. There were 20 cases healthy subjects as the control group，the T lymphocyte subsets in peripheral blood were detected by flow cytomery. Results Compared with the control group，before the treatment，the percentage of CD3+CD4+T cell，CD3+CD8+T cell of the infection group decreased significantly （P＜0.05），and the percentage of Th17、Th2 of the infection group increased significantly （P＜0.05）. In the improvement group，the percentage of CD3+CD4+T cell、Treg、CD3+CD8+T cell were significantly higher than those before the treatment（P＜0.05）after the treatment，but the percentage of Th17、Th1 cell were significantly lower than those before the treatment（P＜0.05）after the treatment. In dead group，there was no statistical significance for all parameters before and after the treatment（P＞0.05）. Conlusions There is imbalance of T lymphocyte subsets in influenza A （H7N9） virus infection patients，to monitor the changes of the T lymphocyte subsets in influenza A （H7N9） virus infection patients has important reference value.

Avian influenza A（H7N9）virus T lymphocyte subsets Th17 Treg

国家“十二五”科技重大专项（2012ZX10002004）

215000 苏州大学附属第一医院感染病科