复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中磷酸氯喹的杂质定性分析

陈晓英

（福建生物工程职业技术学院食品与生物工程系，福建福州350002）

复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中磷酸氯喹的杂质定性分析

陈晓英

（福建生物工程职业技术学院食品与生物工程系，福建福州350002）

采用高效液相色谱法（HPLC）（紫外检测器UV和二级管阵列检测器DAD）和质谱法MS）对复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中磷酸氯喹所产生的杂质进行定性鉴别与归属.实验使用Luna C18色谱柱，以甲醇-2%醋酸（υ/υ 10∶90）为流动相，流速0.5 mL/min，柱温为室温，进样量为20μl，紫外检测波长为324 nm，DAD检测波长扫描范围为200～400 nm，进行高效液相色谱.质谱法则使用ESI电喷雾离子化源，雾化气压力为45 psi，干燥气流速为10 L/min，干燥气温度350℃，毛细管电压3.5 kV，扫描方式采用一级质谱全扫描，再对目标离子进行二级产物离子扫描，碰撞电压20 eV，采集范围100-1000 m/z.紫外检测复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中有与磷酸氯喹对照相似的杂质峰，且该杂质的DAD光谱图和氯喹的DAD光谱图相似，同时二级质谱扫描显示该杂质与氯喹有相似碎片.确证复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中磷酸氯喹所产生的杂质为N-去乙基氯喹.

复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊；磷酸氯喹；HPLC；HPLC-MS

复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊为复方降压药，其组成成分为：地巴唑、盐酸异丙嗪、磷酸氯喹、硫酸胍生、维生素B6、氯化钾、利血平、氯氮、氢氯噻嗪、乳酸钙、维生素B1、三硅酸镁.国内文献多见其各主成份或重金属含量测定［1-7］，文献［8］对复方中盐酸异丙嗪和氯氮的有关物质分析，未见对其组分磷酸氯喹产生的有关物质分析的文献.本实验对本品中组分磷酸氯喹的有关物质进行初步研究，采用HPLCMS/MS中Scan模式测定该杂质，得到一级质谱中分子离子峰，然后采用Product模式对分子离子峰进行二级质谱扫描，得到相应的碎片离子，根据分析结果进行结构推断，推测组分磷酸氯喹产生的主要杂质为N-去乙基氯喹.

1　仪器和试药

仪器：美国Agilent1260HPLC-DAD、Agilent1200 HPL-C、6410 triple quadLC-MS.

试药：市售复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊（福建延年药业有限公司，批号20111204），磷酸氯喹对照（中国食品药品检定研究院），甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯.

2　实验方法

2.1液相色谱条件

色谱柱：Luna C18（250×4.6mm，5μm）；流动相：以甲醇-2%醋酸（V/V 10∶90）；流速：0.5 ml/min；柱温：室温；进样量：20 μl.

紫外检测器：检测波长为324nm，DAD波长扫描范围为200～400nm；

2.2质谱条件

ESI电喷雾离子化源，雾化气压力为45 psi，干燥气流速为10 L/min，干燥气温度350℃，毛细管电压3.5 kV.负离子检测模式，扫描方式采用一级质谱全扫描，再对目标离子进行二级产物离子扫描，不同的碰撞电压20 eV，采集范围100-1000 m/z.

3　结果与讨论

3.1HPLC-UV分析

抽取9种不同厂家的复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊样品，在研究过程中发现，按照探索研究中有关物质项下方法处理后，测定有关物质含量，样品的HPLCUV色谱图中磷酸氯喹色谱峰相邻有一个较明显的小峰，经专属性试验排除了样品中其他组分的干扰，而且同法对磷酸氯喹原料药及对照品分别测定，发现在相同位置均出现明显的色谱峰.典型的色谱图见图1和图2.

3.2HPLC-DAD分析

为了分析HPLC-UV色谱图中杂质的来源，对所有样品进行测定，发现该杂质与盐酸氯喹原料中的杂质保留时间和DAD光谱图基本一致，因此怀疑该杂质为盐酸氯喹原料带来的.中国药典中磷酸氯喹有关物质检查用的是薄层色谱自身对照法，并未阐明有哪些杂质，陈祝康［9］只用HPLC检测了磷酸氯喹杂质的量但也未阐明是哪些杂质.据方文仅［10］报道，磷酸氯喹的杂质峰有2～3个，测定的样品中仅有一个相邻主峰的杂质峰较为明显，根据HPLC-DAD光谱图情况并结合HPLC-UV色谱图情况，初步推测该杂质为N-去乙基氯喹.典型的光谱图见图3和图4.

图1　复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊有关物质典型HPLC-UV色谱图Fig.1The typical HPLC-UV chromatogram of the related substances in Compound Bendazol andHydrochlorothiazide Capsules sample

图2　盐酸氯喹原料有关物质典型HPLC-UV色谱图Fig.2The typical HPLC-UV chromatogram of the related substances in Chloroquine Phosphate raw material

3.3HPLC-MS分析

为了确证以上杂质峰，采用HPLC-MS对该杂质峰进行结构的进一步分析.采用HPLC-MS/MS中Scan模式测定该杂质，得到杂质的DAD紫外光谱图和一级质谱中分子离子峰，然后采用Product模式对分子离子峰进行二级质谱扫描，得到相应的碎片离子，再进行结构推断.该杂质（疑似N-去乙基氯喹）及氯喹的质谱信息见表1和图5、图6.

3.4讨论

从上述的质谱碎片和紫外光谱图可以看到，杂质与氯喹有相似的质谱碎片和紫外光谱图，因此应该和氯喹有相似的结构.综合文献［10］和氯喹的裂解规律，结合各杂质相应的质谱碎片确定该杂质为N-去乙基氯喹.该杂质可能的质谱裂解途径详见图7.

图3　疑似N-去乙基氯喹的DAD光谱图Fig.3Suspected DAD spectrogram of N-deethylation chloroquine

图4　氯喹的DAD光谱图Fig.4DAD spectrogram of Chloroquine Phosphate

表1　疑似N-去甲基氯喹和氯喹质谱信息表Tab.1Mass information of suspected N-deethylation chloroquine and Chloroquine Phosphate

图5　疑似N-去乙基氯喹的二级质谱图Fig.5Mass spectrogram of suspected N-deethylation chloroquine

图6　氯喹的二级质谱图Fig.6Mass spectrogram of Chloroquine Phosphate

图7　N-去乙基氯喹可能的质谱裂解途径Fig.7Possible mass spectrum cleavage pathway of N-deethylation chloroquine

［1］郭福团，庄波阳，郭仙忠，等.9个企业复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊壳中8种金属元素的含量分析［J］.中国药房，2015，26（1）：121-123.

［2］陈炳.ICP-MS法测定复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中7种有害金属的含量［J］.海峡药学，2014，26（2）：55-57.

［3］修虹.HPLC法测定复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中利血平的含量［J］.海峡药学，2012，23（12）：63-65.

［4］陈秀琳.HPLC法测定复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中六种组分的含量［J］.海峡药学，2011，23（12）：55-57.

［5］陈秀琳.HPLC法测定复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中硫酸胍生、磷酸氯喹、维生素B1和维生素B6的含量［J］.中国药品标准，2010，11（6）：453-456.

［6］田宝勇，刘英华，杨晓华，等.火焰原子吸收法测定复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中氯化钾含量［J］.河北科技大学学报，2010，31（5）：406-408.

［7］邓富良，饶均明，周平，等.HPLC测定复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中五种成分的含量［J］.中国药科大学学报，2004，35（5）：446-448.

［8］陈晓英.复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中盐酸异丙嗪和氯氮的有关物质分析［J］.中国药房，2014，25（41）：3911-3913.

［9］陈祝康，吴伟.磷酸氯喹有关物质的HPLC测定［J］.中国医药工业杂志，2007，38（5）：372-373.

［10］方文仅，陈日南，陈隽，等.磷酸氯喹中有关杂质的分析［J］.中国医药工业杂志，1997，28（12）：548-550.

责任编辑：刘红

The Qualitative Analysis of Impurities by Chloroquine Phosphate in Compound Bendazol and Hydrochlorothiazide Capsules

CHEN Xiaoying
（Department of Food and Biological Engineering，Fujian Vocational College of Bio-engineering，Fuzhou 350002，China）

The impurities of chloroquine phosphate in Compound bendazol and hydrochlorothiazide capsules，were identi⁃fied using high performance liquid chromatography（UV detector and two diode array detector）and mass spectrometry.Us⁃ing Luna C18 column with the mobile phase of methanol and acetic acid-2%，（υ/υ 10∶90），with flow rate of 0.5 ml/min，col⁃umn temperature at room temperature，the injection volume was 20μl，the UV detection wavelength was 324nm and the DAD detection wavelength range was 200～400nm，by high performance liquid chromatography.In mass spectrometry，ESI electro⁃spray ionization was used，atomization gas pressure was 45 psi，with drying air flow rate 10 L/min and temperature 350℃and capillary voltage 3.5 kV，scaning MS.And then the second scan was carried out to the first target ion with voltage 20eV and collection range of 100-1000 m/z.UV detection results showed that the impurity peak in Compound bendazol and hydro⁃chlorothiazide capsules was similar to that in chloroquine phosphate.And the DAD detection result of the impuritie was simi⁃lar to chloroquine.The second mass scan result showed that the molecular fragments were similar to chloroquine.The impuri⁃ties generated by chloroquine phosphate in Compound bendazol and hydrochlorothiazide capsules is N-deethylation chloro⁃quine.

compound bendazol and hydrochlorothiazide capsules；chloroquine phosphate；HPLC；HPLC-MS

R 917

A

1674-4942（2015）04-0414-04

2015-11-10