茶多酚对酒精性肝损伤大鼠的抗炎抗氧化保护作用

冯亮，汪燕，潘小玲

（1.南方医科大学第三附属医院药剂科，广东广州510500；2.南方医科大学南方医院药剂科，广东广州510500）

茶多酚对酒精性肝损伤大鼠的抗炎抗氧化保护作用

冯亮1，汪燕1，潘小玲2

（1.南方医科大学第三附属医院药剂科，广东广州510500；2.南方医科大学南方医院药剂科，广东广州510500）

目的观察茶多酚对酒精性肝损伤大鼠肝脏的抗炎与抗氧化作用。方法将36只SD大鼠适应性喂养1周后，随机分为对照组、模型组及治疗组，各12只。对照组大鼠每日用生理盐水按8 g/kg灌胃，模型组大鼠给予同剂量酒精灌胃，治疗组大鼠在灌胃同时按0.25 g/kg剂量灌胃给予茶多酚。经过8周后，检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬门氨酸氨基转移酶（AST）、谷胱甘肽巯基转移酶（GST）活性及肝脏中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）含量，以及肝脏中炎症相关因子白细胞介素（IL）-6、IL-1β、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达。结果长期酒精灌胃喂养可明显使大鼠诱发酒精性肝损伤，服用茶多酚后可明显降低酒精性肝损伤大鼠增高的血清中ALT等活性，并能减少肝组织中MDA含量，升高SOD与GSH-Px的活性，并降低IL-6和IL-1β等的表达。结论茶多酚对大鼠酒精性肝损伤具有抗炎和抗氧化的保护作用。

茶多酚；酒精性肝损伤；抗炎；抗氧化

酒精性肝损伤往往与活性氧和脂质过氧化损伤作用、脂质代谢受阻、细胞因子的相关损害作用、炎性反应等密切相关［1］。茶多酚是从天然茶叶中分离提取出来的多酚类化合物的复合体，具有抗菌、抗病毒作用，以及保护心血管系统、抗衰老、抗过敏等，在抗氧化及免疫应答和肝脏保护中作用更显著［2］。本研究中主要从氧化应激和炎性反应两方面，通过分光光度计、酶联免疫吸附测定（ELISA）法及荧光定量PCR（QRT-PCR）的方法，体外探究茶多酚对慢性大鼠肝损伤模型中大鼠肝脏氧化应激和炎性反应的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物、材料与试剂

36只SPF级健康雄性SD大鼠（体重170～220 g），由南方医科大学动物中心提供，动物合格证号SCXK（粤）2012-0004。茶多酚（纯度98%，江西绿康天然产物有限公司，批号为F111D21），红星牌56%（体积分数）白酒（北京酿酒总厂）；丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒（上海纪宁实业有限公司）；天冬门氨酸氨基转移酶（AST）测定试剂盒（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）；谷胱甘肽巯基转移酶（GST）测试盒、超氧化物歧化酶（SOD）测试盒、丙二醛（MDA）测试盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）测试盒（南京建成生物工程研究所）。

1.2 方法

模型构建：将清洁级SD大鼠36只随机分成对照组、模型组和治疗组，各12只。对照组大鼠用等量生理盐水每日早上按8 g/kg灌胃，模型组大鼠给予同剂量酒精灌胃，治疗组大鼠在灌胃同时按0.25 g/kg剂量灌胃给予茶多酚。

指标检测：通过试剂盒检测大鼠血清ALT，AST，GST活性及肝脏组织中SOD，MDA，GSH-Px含量。

RT-PCR方法：肝脏中RNA采用Trizol（invitrogen）抽提，按试剂盒说明书进行，测定RNA纯度和浓度随后进行反转录反应，再用反转录试剂盒（takara）反转录成cDNA，最后使用定量PCR反应检测肝脏中炎性相关因子IL-6，IL-1β，MCP-1，TNF-α表达。引物合成情况，IL-6上游引物5′-TCTCGAGCCCACCAGGAAC-3′，下游引物5′-AGGGAAGGCAGTGGCTGTC-3′；IL-1β上游引物5′-GAGCCCGTCCTCTGTGACTCG-3′，下游引物5′-GGCCCAAGGCCACAGGGA-3′；MCP-1上游引物5′-TCAGCCAGATGCAGTTAACGC-3′，下游引物5′-TCTGGACCCATTCCTTCTTGG-3′；TNF-α上游引物5′-TGTTCATCCATTCTCTACCC-3′，下游引物5′-CACTGTCCCAGCATCTG-3′；GAPDH上游引物5′-TCAAGAAGGTGGTGAAGCAG-3′，下游引物5′-AGGTGGAAGAATGGGAGTTG-3′。

1.3 统计学处理

采用SPSS 12.0统计软件分析，各组间比较采用两样本均数t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况

36只SD大鼠共死亡5只，死亡率为13.89%，其中模型组3只，治疗组2只。死亡大鼠解剖见肺出血、气管分泌物增多，分析原因主要由于白酒灌胃误呛入肺导致。其他存活大鼠经过8周酒精灌胃后，对照组大鼠活动能力良好，体重增加，相比模型组大鼠大多出现精神萎靡、食欲减退等症状，治疗组大鼠相比生存状况较良好。

2.2 对肝功能的影响

给予酒精喂养8周后，相比对照组，模型组血清ALT，AST，GST活性明显升高（P＜0.01），而在茶多酚治疗组中，血清中升高的ALT等活性均降低，见表1。

表1 茶多酚对模型大鼠血清ALT，AST，GST活性的影响（±s）

表1 茶多酚对模型大鼠血清ALT，AST，GST活性的影响（±s）

注：与对照组比较，*P＜0.05，△P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05。

组别对照组（n=12）模型组（n=9）治疗组（n=10）ALT（U/L）39.2±8.4 58.3±8.3*44.0±7.5#AST（U/L）123.5±30.6 190.3±36.5△153.8±32.4#GST（U/mL）10.2±2.1 19.7±3.3△14.6±2.9#

2.3 对抗氧化功能的影响

模型组相比对照组，大鼠肝匀浆组织中MDA水平升高，SOD与GSH-Px活性下降，而治疗组中通过茶多酚治疗大鼠肝匀浆中水平较高的MDA水平则降低，GSH-Px和SOD活性则上升，见表2。

表2 茶多酚对模型大鼠肝组织中MDA，SOD与GSH-Px水平的影响（±s）

表2 茶多酚对模型大鼠肝组织中MDA，SOD与GSH-Px水平的影响（±s）

注：与对照组比较，*P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，▲P＜0.01。

组别对照组（n=12）模型组（n=9）治疗组（n=10）MDA（μmol/g）8.9±1.2 13.2±2.8*9.1±1.9▲SOD（kU/g）117.5±13.5 78.4±12.3*101.8±11.7▲GSH-Px（kU/g）70.6±10.4 49.8±6.7*58.6±8.4#

2.4 对肝脏炎性因子的影响

模型组相比对照组，大鼠肝脏组织中肝脏炎症细胞因子白细胞介素（IL）-6，IL-1β，单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1），肿瘤坏死因子-α（TNF-α）明显升高，而治疗组中通过茶多酚治疗大鼠上述炎症因子mRNA表达均被降低，见表3和图1。

表3 各组大鼠肝脏炎性因子mRNA水平比较（±s）

表3 各组大鼠肝脏炎性因子mRNA水平比较（±s）

注：与模型组比较，#P＜0.05，*P＜0.01。

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3 讨论

近年来有研究报道，通过模仿多数酒精性肝炎患者的饮酒方式而建立了一种慢性酒精灌胃小鼠的模型（称为Gao-Binge model），这些被模仿的患者本身有多年慢性饮酒背景，该模型可导致小鼠脂肪变性肝脏损伤和炎性反应［3-4］，现今国内外许多实验室主要使用稍加修正的这种动物模型。

图1 mRNA表达水平

酒精性肝病发病机制包括，乙醇及其衍生物进行代谢反应的产物毒性作用、代谢过程中诱导的炎性反应及氧自由基形成、抗氧化物质的耗竭、肠源性内毒素等多种因素共同作用的结果［5-7］。酒精的代谢产物之一乙醛对肝组织细胞有明显的毒性作用，会持续损伤肝细胞器的结构功能，削弱超氧化物歧化酶等的抗氧化功能，抑制生物合成谷胱甘肽，同时大量产生丙二醛等氧化物［8］；同时可激活免疫应答，并诱导产生IL-6及IL-1β等炎性细胞因子，并参与肝脏细胞的坏死和凋亡［9］。

近年来，我国许多学者尝试通过中药治疗酒精性肝病并取得了较好疗效［10-11］。茶多酚又称茶鞣质，是从茶叶中提取的有效成分，是含多酚类化合物的混合物，且具有抗肿瘤、抗氧化等药理作用，有关茶多酚的研究目前已成为药学领域的研究热点。本研究结果显示，茶多酚可显著降低大鼠血清ALT，AST，GST活性，改善肝功能，同时还可升高SOD与GSH-Px活性并降低MDA含量，说明茶多酚在一定程度上可增强大鼠机体肝细胞清除自由基能力，降低肝脏自由基对细胞的损害，不过对人类肝细胞损伤是否有同样的抗氧化作用，仍需在临床试验中进一步加以证实。此外，茶多酚还可降低TNF-α含量，从而减轻多种炎性因子介导的免疫激活效应，抑制炎症发生；同时可降低IL-6表达，抑制分泌肝细胞胶原以抑制酒精性肝损伤。不过，至于茶多酚通过何种作用机制抑制炎性细胞因子的表达需要更深入地研究。

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［11］阎纳新.空心莲子草醇提物对小鼠急性酒精性肝损伤的防护作用［J］.中国药业，2015，24（14）：26-27.

Anti-Inflammatory and Anti-Oxidative Protection Effect of Tea Polyphenols on Alcoholic Liver Injury Rats

Feng Liang1，Wang Yan1，Pan Xiaoling2
（1.Department of Pharmacy，The Third Affiliated Hospital of Southern Medical University，Guangzhou，Guangdong，China 510500；2.Department of
Pharmacy，Nanfang Hospital of Southern Medical University，Guangzhou，Guangdong，China 510500）

Objective To observe the anti-inflammatory and anti-oxidative protection effect of tea polyphenols on the alcoholic liver injury rats.Methods 36 SD rats feed adaptive after 1 week，then randomly divided into the normal control group，model group and treatment group，12 cases in each group.Rats in normal group infused with normal saline once a day with a dose of 8 g/kg body weight，the model group infused with the same dose of alcohol，the treatment infused with the alcohol and tea polyphenols with a dose of 0.25 g/kg body weight.After 8 weeks，the ALT，AST and GST levels in serum and SOD，MDA and GSH-Px levels in liver tissue and the expression of IL-6，IL-1β，MCP-1 and TNF-αof rats were detected.Results Long-term gastric feeding method by alcohol can obviously make alcohol induced liver injury in rats.After treating with tea polyphenols，the higher serum ALT，AST and GST activity obviously down-regulated in alcoholic liver injury rats，and the MDA level was reduced，the SOD activity increased，the expression of IL-6，IL-1β，TNF-αand MCP-1 were decreased.Conclusion Tea polyphenols has anti-inflammatory and anti-oxidant protection on alcoholic liver injury rats.

tea polyphenols；alcoholic liver injury；anti-inflammatory；anti-oxidant

R285.5；R282.71

A

1006-4931（2015）22-0037-03

冯亮（1986-）男，大学本科，药师，研究方向为药学临床试验研究，（电话）020-62784815。

2015-07-28；

2015-08-22）