Treg细胞在喉癌及喉癌前病变中的变化

刘天洋　王世飞

【摘要】 通過研究喉癌、癌旁组织、喉癌前病变及正常喉组织中Treg细胞/CD4+T细胞比例逐渐变化的关系，探讨以下内容：1.明确Treg细胞的作用 ；2.获得预测喉癌前病变是否恶变的指标。（随访2年）3.获得有效的免疫切缘（immune margin ）指标，指导手术切缘判定。

【关键词】喉癌、Treg细胞、CD4+T细胞、手术切缘

【中图分类号】R739.65 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）02-0785-01

肿瘤的发生是多因素、多步骤的复杂过程，其中抑癌基因失活是导致肿瘤发生的重要的基因层面因素。Treg细胞是肿瘤微环境中重要的免疫抑制细胞，肿瘤微环境中Treg细胞的浸润性在基因异常的患者具有协同促发肿瘤的作用。实验目的：本项目检测喉癌、癌旁组织、喉癌前病变及正常喉组织Treg 细胞及CD4+细胞的比例，并且通过术后临床随访2年，进行喉癌及喉癌前病变临床Treg细胞的相关性分析，Treg细胞在喉癌前病变及喉癌的发生、发展、浸润中的作用，获得喉癌前病变恶变的危险指标，并探讨Treg细胞免疫切缘预测手术切缘足够与否的价值。Treg细胞在喉癌前病变及喉癌的发生、发展、浸润中的作用，获得喉癌前病变恶变的危险指标。

一、实验方法：

1.选取喉癌患者20例，术前制定合理的手术方案，完整切除肿物（癌旁组织经病理检查，排除肿瘤细胞浸润），排除手术因素对实验标本及及疗效的影响；保证检测相关指标情况的准确性及可比性。

2.喉癌组患者经行彻底的手术切除，术中分别距肿瘤0.2cm、0.5cm、1.0cm的组织做为喉癌旁组织组；并分为癌旁0.2cm、癌旁0.5cm、癌旁1.0cm 3个亚组。

根据各组设立的要求，术中选取相应的实验标本：①喉癌组：选取喉癌组织标本作为标本；②喉癌旁组织组：切除喉癌后，选取喉癌旁组织（距离肿物0.2cm、0.5cm、1.0cm）作为标本；③喉癌前病变组：选取切除的喉癌前病变肿物作为标本；④喉正常组织组：选取切除的喉良性肿瘤周围的正常粘膜作为标本。⑤所有标本取得以后，编号后分成三部分，分别按照流式分析、双重酶标免疫组化实验方法要求保存、制备。

1）实验检测指标

（1）双重酶标免疫组化及流式分析检测四种组织中Treg 细胞及CD4+细胞，计算Treg细胞/CD4+细胞比例。

（2）随访2年，确定喉癌患者术后有无复发，与术前癌组织及癌旁组织中Treg细胞/CD4+细胞比例进行相关性分析，与临床结局进行相关性分析。

（3）随访2年，确定喉癌前病变患者术后有无恶变，与术前Treg细胞/CD4+细胞比例进行相关性分析，与临床结局进行相关性分析。

二、拟解决的关键问题：

1.术前制定合理的手术方案，完整切除肿物（癌旁组织经病理检查，排除肿瘤细胞浸润），排除手术因素对实验标本及及疗效的影响；保证检测相关指标情况的准确性及可比性。

2.建立四组组织（包括各组亚组）中Treg细胞/CD4+T细胞比例的梯度关系。

3.实验所选取标本应无污染，低温保存，标本尽快检查，避免细菌等其他因素造成淋巴细胞激活，影响检测结果的准确性。

三、本项目的特色与创新之处：

1.本课题检测Treg细胞在喉癌及喉癌前病变中的表达，并且分梯度取喉癌旁0.2cm、0.5cm、1.0cm组织，检测Treg细胞水平变化，来探讨喉癌发生、浸润以及在喉癌前病变恶化中的机制，国内外未见文献报道。

2.本课题对喉癌及喉癌前病变患者进行术后随访，进行组织中Treg细胞表达情况与有无局部复发进行相关性分析，从分子切缘角度探讨手术切缘的足够与否，并且首次提出“免疫切缘”的概念，在国内外尚无报道。

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