P27和P53蛋白在乳腺癌组织中的表达分析及临床意义

张亮等

【摘要】目的：探讨P27和P53蛋白在乳腺癌组织中的表达水平和临床意义。方法：选取在我院手术治疗的浸润性导管癌患者，术中留取癌组织和癌旁组织标本，采用免疫组化实验检测其中P27和P53的表达水平。结果：在50例患者的标本中，癌旁正常乳腺组织中P27的阳性率为78.0%，而P53的阳性率为4.0%；而在癌旁组织中，P27的阳性率明显下降，仅为36.0%，而P53的阳性率显著升高，为52.0%；P27和P53与乳腺癌的淋巴结转移均有相关性，其中P27在有淋巴结转移的组织中呈低表达，而P53在有淋巴结转移的组织中呈高表达；且P27和ER有一定的相关性，ER阳性患者的P27呈高表达，差异均由统计学意义。结论：P27、p53蛋白对乳腺癌发生和发展起重要作用，具有较高的临床参考价值。

【关键词】P27；P53；乳腺癌；免疫组化

【中图分类号】R737.9 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）02-0171-01

乳腺癌是全球女性高发的恶性肿瘤之一，据调查，2013年美国女性患乳腺癌者新增人数占美国女性患癌症人数的30%[1]。乳腺癌的发病机制复杂，收到基因水平和蛋白水平上多种信号的共同调控。P27和P53分别是起着抑癌和促癌作用的蛋白，参与到包括乳腺癌在内的多种肿瘤的发生、发展中。本研究采用免疫组合实验来分析P27和P53蛋白在乳腺癌中的表达量，并探讨其临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

選取2014年1月～2015年1月来我院接受手术治疗的乳腺癌患者50例为研究对象，患者年龄26～60岁，平均年龄40.5±3.5岁。所有患者均行乳腺癌根治术或改良根治术，行术中快速冰冻病理检查及其他常规病理检查确诊。本研究所选用的50例患者均为确诊的浸润性导管癌患者，且手术治疗前未接受放化疗治疗。其中有淋巴结转移患者23例，未转移患者27例；有雌激素受体（ER）阳性患者30例，阴性20例；有孕激素受体（PR）阳性28例，阴性22例。在术中留取乳腺癌病灶组织及远离癌灶边缘>2cm的癌旁正常乳腺组织。

1.2 研究方法

本研究采用免疫组化（SP法）判断癌组织及癌旁正常乳腺组织中P27和P53的表达量。其中P27和P53抗体均购买自Proteintech中国分公司 ，二抗S-P试剂盒及DAB显色试剂盒均购自碧云天生物技术研究所，其他试剂及耗材有本院病理科技术室提供。本研究所有标本均使用4%单聚甲醛固定，并包埋与石蜡中，切片厚度为4μm，抗原采用高温高压法修复。本研究中阳性对照采用确诊的阳性乳腺癌切片，阴性对照用磷酸盐缓冲液代替一抗进行操作。

免疫组化（SP法）具体操作如下：一 免疫组化（ LP 法）操作步骤：1、切片后脱蜡至水，并高压高温高压修复抗原；2、缓冲液洗3次，每次5min；3、切片放在Hydrogen Peroxide Block中孵育10-15min，以降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色；4、缓冲液洗3次，每次5min；5、滴加 Ultra V Block ，在室温下孵育5-10分钟封闭；但不要超过10min，以免导致特异性染色效果降低；6. 缓冲液洗2次，每次5min；7、滴加一抗工作液37 ℃孵育2小时；8、缓冲液洗3次，每次5min；9、滴加 Primary Antibody Enhancer（增强子） ，在室温下孵育20min；10、缓冲液洗3次，每次5min； 11、滴加 HRP Polymer（ 酶标二抗 ） ，在室温下孵育30min；此步骤需要避光； 12、缓冲液洗3次，每次5min；13、1ml DAB Plus Substrate中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen （或 AEC Plus Chromogen ），混匀后滴加到切片上，孵育10min；14、自来水充分冲洗、复染、脱水、透明、封片。

1.3 P27和P53的阳性判断

p27蛋白阳性染色呈黄色、棕黄色颗粒，出现与细胞核中，阳性细胞超过10%则认为阳性，为超过10%则为阴性结果。P53蛋白阳性着色主要定位于细胞核，呈黄色-棕黄色颗粒，阳性细胞超过10%则认为阳性，为超过10%则为阴性结果。

1.4 统计学分析

所有数据均采用SPSS17.0统计学软件处理，计量资料均以平均值±标准差（ ），计数资料采用χ2检验，如有理论T值<5则使用校正χ2检验，计量资料采用t检验，以P<0.05表示有统计学差异。

2 结果

2.1 正常乳腺组织和乳腺癌组织中P27及P53表达量

在50例患者的标本中，癌旁正常乳腺组织中P27的阳性率为78.0%，而P53的阳性率为4.0%；而在癌旁组织中，P27的阳性率明显下降，仅为36.0%，而P53的阳性率显著升高，为52.0%，差异有统计学意义，见表1和图1。

3 讨论

P27基因定位于染色体12p13.1-13.2上，是一种细胞周期依赖性蛋白激酶抑制物，可通过与细胞周期蛋白依赖激酶活化激酶（CDK）及cyclin-CDK复合物结合而抑制CDK的活性，阻止细胞周期中Gl/S期转换，进而抑制细胞周期的进展，减缓肿瘤细胞的分裂、增殖，起到抑癌作用[2]。同时，P27还可以通过影响Rb蛋白的磷酸化，是乳腺癌细胞周期阻滞与G1期。在苑光辉[3]的研究中，P27蛋白在癌组织中的表达率明显低于正常乳腺组织，且不受到病理分型的影响。

P53基因定位于染色体17p13，有11个外显子和10个内含子构成，可参与细胞周期的调控，对于肿瘤细胞的分裂、增殖过程中起到重要作用。P53是已知的有两种类型，即野生型和突变型[4]。在正常细胞中野生型P53含量较低，但当其收到一定刺激后可转化为突变型，突变后的P53可作为转录子对下游大量靶基因进行调控，影响细胞周期、凋亡、分化，丧失对损伤DNA的修复，起到癌基因的作用。有研究显示[5]，P53表达水平的上调与乳腺癌的发生、发展及预后有关，其机制可能与野生型P53基因的突变有关。

本研究发现，P27在乳腺癌组织中表达量明显下调，且和乳腺癌淋巴结转移负相关，和ER阳性正相关，而P53蛋白在乳腺癌组织中显著上调，且和淋巴结专业呈正相关。综上所述，P27、p53蛋白对乳腺癌发生和发展起重要作用，具有较高的临床参考价值。

参考文献

[1] Arora H， Qureshi R， Park W-Y， miR-506 Regulates Epithelial Mesenchymal Transition in Breast Cancer Cell Lines [J]. PLoS ONE ， 2013， 8（5）：64273-64273.

[2] Sclvaduray KR， Radhakrishnan AK， Kutty MK， et al. Palm to cohricnols decrease levels of pro-angiogenic markers in human umbilical vein endcthclial cells （HUVEC） and murinc mammary cancer cells [J]. Genes Nutr， 2012， 7（12）： 53-61.

[3] 苑光辉. 乳腺癌组织中P27蛋白和血管内皮生长因子的表达及意义[J]. 中国肿瘤临床与康复， 2014， 21（8）： 931-933.

[4] 周道平， 王彬， 邢晓皖. K i-67、p53蛋白在乳腺癌组织的表达及临床意义[J]. 实用肿瘤杂志， 2009， 24（2）： 136-139.

[5] 于占江， 张伟， 师岩. Smad4与P53在乳腺癌中的表达与其病理特征的相关性研究[J].