RhD阴性献血者不规则抗体筛查及鉴定结果分析

于金涛　刘文国　郭长义　宋雪冬　宋任浩★

RhD阴性献血者不规则抗体筛查及鉴定结果分析

于金涛刘文国郭长义宋雪冬宋任浩★

目的 回顾分析RhD阴性献血者不规则抗体筛查及鉴定结果，探讨对RhD阴性献血者进行不规则抗体筛查的意义。方法 采用间接抗球蛋白试验对初筛RhD阴性献血者进行确认，采用抗体筛查细胞和谱细胞进行不规则抗体筛查及特异性鉴定，采用单克隆抗-C、抗-c、抗-E及抗-e试剂对含有不规则抗体的RhD阴性献血者进行Rh表型鉴定。结果 1205份 RhD阴性献血者标本共检出不规则抗体29份，检出率为2.41%。其中女性23例，男性6例；特异性抗体25例（包括抗-D、抗-M、抗-JKa、抗-P、抗-S）、非特异性抗体4例。抗体筛查阳性RhD阴性献血者表型分布比例依次为ccdee、Ccdee、CCdee、CcdEe、ccdEe和ccdEE。结论 RhD阴性的献血者不规则抗体检出率较高，对RhD阴性的献血者进行不规则抗体筛查具有重要意义。

RhD阴性血型 献血者 不规则抗体

Rh血型系统是最具多态性的红细胞血型系统，与临床输血密切相关的有D、C、c、 E、e等5种抗原，其中D抗原具有较强的免疫原性，RhD阴性个体经由输血、怀孕等接触D抗原后，产生抗体的几率明显大于其他血型抗原。对RhD阴性献血者不规则抗体的产生频率、种类及性质进行相关检测与分析是确保RhD阴性受血者输血安全而进行的质量管理的重要内容，目前在发达国家已经普遍实施［1］。本中心自2011年5月对初筛RhD阴性献血者在原有的RhD确证基础上增加了不规则抗体筛查及血清学表型鉴定试验，现将检测结果报道如下。

1　临床资料

1.1一般资料 选择2011年1月至2014年5月河北省血液中心间接抗人球蛋白试验确认为RhD阴性无亲缘关系献血者的血液标本1680份。

1.2主要试剂与仪器 RhD阴性初筛试剂：单克隆IgM抗-D（上海血液生物医药公司）；RhD阴性确认试剂：人源单克隆IgG抗-D（加拿大Dominion公司）、单克隆IgG抗-D（北京金豪制药公司）、单克隆IgG+IgM抗-D（德国Biotest公司、法国Diagast公司、上海血液生物医药公司）；单克隆抗-C、抗-c、抗-E、抗-e和抗球蛋白试剂（北京金豪制药有限公司）；抗体筛查细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）、谱细胞（上海血液生物公司）。2991型血细胞洗涤机（美国Gambro公司）、80-2 型离心沉淀器（上海手术机械厂）、TD4M血细胞洗涤离心机 （长沙平凡仪器仪表有限公司）、BHW 2型水浴箱（北京医疗设备厂）、奥林巴斯CX21BIM-SET5生物显微镜（上海皖宁精密科学仪器有限公司） 和QL-861漩涡混合器（常州杰博森仪器有限公司）。

1.3方法 （1）RhD阴性献血者的确认：操作方法参照《中国输血技术操作规程》［2］。单克隆IgM抗-D初筛为RhD阴性红细胞分别与不同来源的人源单克隆抗-D、单克隆IgG抗-D和3个不同厂家和批号的单克隆IgG+IgM抗-D进行间接抗人球蛋白试验，同时做阴阳对照。只要与1种试剂有凝集反应即判定为阳性，全部不凝集者判定为RhD阴性。（2）不规则抗体筛查及特异性鉴定：应用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体筛查细胞和自身细胞对RhD阴性献血者血浆标本进行不规则抗体筛查（凝聚胺法）。应用谱细胞对不规则抗体筛查阳性标本进行特异性鉴定，鉴定抗体的类型。按试剂盒使用说明书进行操作。（3）对含有不规则抗体的RhD阴性献血者进行Rh表型鉴定：含有不规则抗体的RhD阴性的3%～5%红细胞50μl分别加单克隆抗-C、抗-c、抗-E及抗-e试剂50μl，混匀，1000g离心15s，肉眼和镜下观察结果。凝集者为阳性，否则为阴性。

2　结果

2.1RhD阴性献血者不规则抗体筛查及鉴定结果 见表1。

表1　RhD阴性献血者不规则抗体检测结果

2.229例不规则抗体筛查阳性RhD阴性献血者表型分布情况 见表2。

表2　不规则抗体筛查阳性献血者表型分布情况（n）

3　讨论

不规则抗体是指不符合ABO血型系统Landsteiner法则的抗体，即抗A、抗B以外的红细胞血型抗体。不规则抗体的分布具有多态性和复杂性的特点，不规则抗体的发生频率和特异性分布在不同人群中有一定差别。Rh 血型系统是临床上最重要的血型系统之一，其重要性仅次于 ABO 血型系统。其中D抗原具有较强的免疫原性，RhD阴性献血者产生不规则抗体的几率明显大于RhD阳性献血者，因此对RhD阴性献血者进行不规则抗体检测和分析，是保证输血安全有效的重要措施。

目前我国大部分血站采用反定型O型红细胞在盐水介质中筛查不规则抗体，由于受检验方法的限制，易造成一部分免疫性抗体的漏检。而大部分有临床意义的不规则抗体多为免疫性IgG类抗体，只有借助于酶法、抗人球蛋白试验、凝聚胺法等才能检出。如果将含有不规则抗体的RhD阴性血输注给RhD阴性受血者，不仅可能影响输血效果，而且可能产生溶血性输血不良反应。本中心对初筛RhD阴性的献血者采用抗人球蛋白试验筛查不规则抗体，阳性检出率为2.41%，高于以往报道的0.29%～0.42%的检出率［3］，一方面可能与筛查方法有关，另一方面可能与献血人群的不同来源有关，还有待于大样本的进一步研究。本资料结果发现，不规则抗体筛查阳性RhD阴性献血者表型分布以ccdee和Ccdee多见，与有关调查相符［4，5］。不规则抗体筛查阳性RhD阴性献血者中，女性所占比例较高，有可能与女性除输血免疫等外又增加了妊娠免疫产生不规则抗体的机会有关。

1 郑小凡，祝宏，吴亚玲，等. 应用Olympus PK 7200血型仪筛查献血者意外抗体.中国输血杂志，2009，22（1）：48～49.

2 中华人民共和国卫生部.中国输血技术操作规程（血站部分）.第三版，天津： 天津科学技术出版社，1997.80～86.

3 任本春，池泉.献血者红细胞血型不规则抗体筛查必要性的探讨.中国输血杂志，2010，23（2）：126～127.

4 李健，周英，吕文彬，等.Rh（D）阴性献血者不规则抗体检测的结果分析.四川医学，2012，33 （2）：341～343.

5 陈荣仓，陈筱华，林碧，等. Rh（D）阴性献血者的表型和不规则抗体筛选结果分析.临床血液学杂志，2009，22（8）：429～430.

河北省医学科学研究重点课题计划（20130133）

054800 河北省清河县人民医院检验科（于金涛）065700 河北省廊坊市第四人民医院检验科（刘文国郭长义 宋雪冬）050071 河北省血液中心检验科（宋任浩）