蜱类唾液的采集方法

廖芷卉，唐　昊，程天印

（湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙 410128）

蜱类唾液的采集方法

廖芷卉，唐昊，程天印

（湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙 410128）

蜱是一类以吸血为生的体外寄生虫，对人和动物具有直接和间接双重危害，但迄今为止人们尚无安全、高效、环保的防蜱灭蜱措施。以Bm86抗原为基础的抗蜱疫苗的成功研制和商品化激发了蜱学工作者鉴定功能蛋白、筛选候选抗原的热情，且成效明显。蜱唾液中含有大量的功能蛋白，对蜱吸血活动至关重要，其中一些蛋白具有疫苗开发价值，是分离、鉴定蜱唾液功能蛋白的重要来源。由于蜱个体较小，采集比较困难，制约了很多科研人员的研究进程。近两年，笔者在实践过程中，积累了一些采集唾液的经验，现总结如下：

1　实验材料及其准备

1.1蜱根据需要选择适当种类、状态、性别或发育阶段的个体。本实验选用的是半饱血的雌成褐黄血蜱。用前放入ddH2O中洗去体表污物，尤其是假头部分需保持洁净，清洗完后用滤纸吸除残液。

1.2药品毛果芸香碱或多巴胺。5%的毛果芸香碱-甲醇溶液，0.2%多巴胺-PBS（磷酸盐缓冲液）。

1.3毛细管0.1×100mm微量采血吸管。将吸管中间处置于酒精灯火焰中心加热，待玻璃软化后轻轻用力拉扯，使之逐渐变细；移离火焰，冷却；根据蜱口器情况以医用砂轮片在适当口径切断；加热软化使切面光滑，以防割伤口器。

1.4湿盒在大小适中的有盖铝制或塑料盒底部平铺3～4层卫生纸，加水湿润。

体视显微镜、泥性橡皮、载玻片、双面胶、医用无纺布透气胶带等。

2　操作方法

笔者在参考前人经验基础上，经过探索，拟定了一套简单、易行、可靠的蜱唾液采集方法，操作步骤如下：

2.1蜱的固定：取洁净的载玻片，于中心处贴长约0.5cm的双面胶；将蜱背面朝下粘于其上；用胶布覆于蜱腹面后半部分，两头粘于蜱两侧的玻片上。

2.2取花生粒大小的泥性橡皮，捏成锥形，粘于蜱假头端前1.0cm左右处。

2.3将固定蜱的玻片放在体视显微镜载物台上，移动至视野中心；调节显微镜放大倍数，以便能看清蜱口下板；滴加5%毛果芸香碱或0.2%多巴胺5μL于蜱背部盾板处。

2.4唾液的收集：在体视显微镜下观察假头部分；取一毛细管，细端向蜱，中部置于泥橡皮锥顶部；缓缓前推毛细管直至其端口接近假头，拨开须肢，对准口器，向前推进使毛细管插入。以指腹轻压泥橡皮锥顶部的毛细管，使之固定牢实，见图1。

2.5将蜱轻轻地转移至湿盒中，盖上盒盖；放入37℃的恒温培养箱，4h后取出，收集玻璃毛细管中的唾液。收集到的唾液保存在-70℃的冰箱中，待下一步实验使用。

3　体会

3.1选用的泥性橡皮需软硬适中，可塑成任意形状；具有一定粘性，能很好的粘附玻片上和固定毛细管。

3.2毛细管插管时动作要轻柔，不要损伤蜱假头部分。

3.3根据笔者的经验，每只半饱血雌成镰形扇头蜱（R.Haemaphysaloides）或褐黄血蜱（H.Flava）可采唾液2～5μL。

3.4使用毛果芸香碱刺激的蜱唾液较无色、清亮，而以多巴胺催吐的蜱唾液颜色偏黄。

图1　褐黄血蜱唾液采集图

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10.3969/J.ISSN.1671-6027.2015.07.019