E－cadherin和Snail表达水平与乳腺癌新辅助化疗疗效的关系分析

董佳寒 苏静 陈航航

(郑州大学第一附属医院乳腺外科 河南郑州 450052)

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，新辅助化疗已作为局部晚期乳腺癌的标准治疗方案。Kaufmann M等发现新辅助化疗获得完全缓解的患者无病生存率(disease free survival，DFS)及总生存率(overall survival，OS)明显改善［1］，但并不是每个乳腺癌患者均能从新辅助化疗中获益，反而带来治疗的延迟或疾病进展。近些年，E－cadherin和Snail在肿瘤浸润和转移中的作用成为研究的热点。本研究利用活检获得化疗前的乳腺癌组织，通过免疫组化SP法检测E－cadherin和Snail的表达，探讨二者联合检测对新辅助化疗的疗效及预后的意义。

1 材料与方法

1.1 资料收集 2008年1月至2012年6月郑州大学第一附属医院乳腺外科确诊的原发性Ⅱ～Ⅲ期，按国际抗癌联盟标准进行分期，无其他恶性肿瘤病史乳腺癌患者169例，新辅助化疗前经活检证实病理类型均为浸润性乳腺癌。患者均为女性，年龄26～76岁，平均年龄45.8岁，一般情况良好，初诊时肿块均可扪及，中位随访是50个月。所有患者在就诊前均未接受过任何治疗，在首次治疗均证实无远处转移及无化疗禁忌证。活检确诊后所有患者均行TAC方案化疗4个周期后手术。活检标本均行常规石蜡切片及免疫组化。

1.2 治疗方案及疗效评估 所有患者均行TAC方案:吡柔比星 50 mg/m2，d1，环磷酰胺 500 mg/m2，d1，多西他赛75 mg/m2，d1，静脉滴注。21 d为1个周期。4个周期后，行临床体检及影像学检查，评估疗效，并根据临床评估决定手术方式。

新辅助化疗前行卡尺及彩超测量肿块的最大径及垂直径，同一患者在化疗前后采用同一种测量手段，每周期复查1次。临床疗效评估根据WHO实体瘤疗效评价标准分为:完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)、疾病进展(PD)。CR+PR为有效，SD+PD为无效。

1.3 乳腺癌标本收集及处理 标本取自活检获得的乳腺癌组织，用10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，行4 μm连续切片，进行HE染色和E－cadherin、Snail免疫组化染色。

1.4 实验材料 鼠抗人Snail(H－130)抗体购自美国Biotechnology公司，即用型鼠抗人E－cadherin抗体为福州生物技术中心，免疫组化试剂盒、DAB显色试剂购于北京中杉金桥生物公司，用已知阳性片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.5 免疫组化结果判定 阳性切片E－cadherin免疫组化位于细胞膜或细胞质，Snail免疫组化位于细胞核，均为淡黄色或棕黄色颗粒，免疫组化强度参照Formwitz评分方法，根据阳性细胞的百分率(每片随机观察5个40×10倍视野，对其中的阳性细胞计数)及显色情况分级，根据二者的乘积，将染色情况分为4级:0分为(－)，1～4分为(+)，5～8分为(++)，9～12分为(+++)。－～+为低表达，++～+++分为高表达。随访信息通过电话随访或门诊随访获得。

1.6 统计学方法 应用SPSS 17.0软件分析，采用χ2检验及Spearman等级相关分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 E－cadherin和Snail在乳腺癌组织中的表达水平与临床病理特征的关系 在169例乳腺癌组织中，其中E－cadherin高表达82例，低表达87例;Snail高表达99例，低表达70例(图1);E－cadherin表达均与临床分期、组织学分级、淋巴结转移相关(P＜0.05);与年龄、月经状况、肿瘤大小以及ER和PR状态无关。Snail表达均与临床分期、淋巴结转移相关(P＜0.05);与年龄、月经状况、组织分级、肿瘤大小以及ER和PR状态无关。见表1。

2.2 乳腺癌组织中E－cadherin和Snail的表达与临床获益率的关系 E－cadherin低表达组的临床总有效率高于高表达组，而在化疗抵抗(SD+PD)方面，E－cadherin高表达组明显多于低表达组。这表明E－cadherin低表达与新辅助化疗获益率高相关。Snail低表达组的临床总有效率高于Snail高表达组，化疗抵抗(SD+PD)Snail高表达组高于低表达组。这表明Snail低表达与新辅助化疗获益率低相关。见表2。

2.3 乳腺癌中E－cadherin和Snail表达的相关性两者在乳腺癌组织中的表达存在负相关(r=－0.241，P=0.002)。见表3。

3 讨论

图1 E－cadherin和Snail在乳腺癌中的表达(SP×400)

表1 乳腺癌组织中E－cadherin和Snail的表达与临床病理特征的关系(n)

表2 化疗前E－cadherin和Snail的表达与乳腺癌新辅助化疗疗效的关系(n)

表3 乳腺癌中E－cadherin和Snail表达的相关性(n)

乳腺癌新辅助化疗作为局部晚期乳腺癌的标准治疗方案已经获得国内外高度认可。但是临床研究发现还有约25%的患者并不能从新辅助化疗中获益，所以在新辅助化疗前评估化疗疗效显得尤为重要。研究显示，上皮－间质转化(EMT)与肿瘤侵袭和转移有关［2］。其细胞机制为上皮标记基因的表达与细胞间黏附力的丧失，间质标记基因、细胞迁移与运动力的获得和细胞形态的改变［3］。EMT和癌细胞脱离原发部位在浸润转移过程中起重要作用［4］。E－cadherin和Snail在ETM中发挥重要作用。E－cadheri参与和维持细胞间连接，其表达的缺失或者细胞与细胞间连接的功能减弱是EMT过程中重要的一步。E－cadherin表达减少或缺失是肿瘤侵袭和转移的重要促进因素［5］。E－cadherin在同时伴有侵袭和转移行为的多种不同类型的肿瘤细胞中的表达通常是下调的［6－7］，其表达下调与预后不良有关［8］。既往也发现人体恶性肿瘤细胞中E－cadherin的低表达，肿瘤浸润能力强、淋巴结转移和远处转移率高，生存率低。研究发现，约70%的原发性乳腺癌中存在E－cadherin的表达减少或缺失。本研究结果与上述文献研究结果一致，E－cadherin的表达与组织学分级、临床TNM分期，以及淋巴结转移有统计学差异(P＜0.05)。E－cadherin呈低表达组的临床总缓解率高于高表达组，这提示E－cadherin低表达与新辅助化化疗获益率高相关。

Snail属于转录抑制因子，具有阻遏抑癌基因CDH1编码的因子，而基因CDH1编码了关键黏附蛋白E－cadherin，从而导致E－cadherin的转录抑制，进而导致EMT的发生并提高细胞侵袭转移的能力［9］。在人类多种恶性肿瘤，Snail的表达上调与肿瘤的侵袭、转移及较差的预后密切相关［10］。本研究结果Snail的表达与肿瘤大小、临床TNM分期，以及淋巴结转移差异有统计学意义(P＜0.05)，表明Snail的表达与乳腺癌的浸润和转移密切相关。Snail呈低表达组的临床总缓解率高于高表达组，这提示Snail高表达与新辅助化化疗获益率低相关;研究发现，Snail表达上调，E－cadherin表达下降，二者表达呈逆反关系［11］。本研究结果显示，E－cadherin低表达与新辅助化化疗获益率高相关，Snail高表达与新辅助化化疗获益率低相关。E－cadherin和Snail的表达经Spearman秩相关分析，两者在乳腺癌中的表达存在负相关(r=－0.241，P=0.002)，与大多文献报道一致。因此，联合检测E－cadherin与Snail可为评估乳腺癌新辅助化疗疗效提供参考指标。

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