HPLC测定冠心丹参胶囊中主成分的含量

汤杰，宋冰娜，郑盼*，丁梅

(1.国药集团致君(深圳)制药有限公司，广东 深圳 518118；2.国药集团致君(深圳)坪山制药有限公司，广东 深圳 518118)

·中药工业·

HPLC测定冠心丹参胶囊中主成分的含量

汤杰1，宋冰娜2，郑盼1*，丁梅1

(1.国药集团致君(深圳)制药有限公司，广东 深圳 518118；2.国药集团致君(深圳)坪山制药有限公司，广东 深圳 518118)

目的：测定冠心丹参胶囊中丹参素、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA以及人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量。方法：采用高效液相色谱法，以C18柱为色谱柱；流动相为乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脱；流速为0.8 mL·min-1；检测波长为270、203 nm。结果：丹参素钠和丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA以及人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1分别在7.1～113.6、11.7～187.2、6.6～105.0、6.9～110.2、7.3～116.0、31.2～499.4、27.1～433.7 μg·mL-1呈良好线性关系，平均加样回收率分别是99.51%(RSD=0.91%)、97.73%(RSD=1.35%)、97.20%(RSD=0.78%)、98.47%(RSD=0.69%)、99.12%(RSD=0.31%)、96.64%(RSD=0.86 %)和97.98%(RSD=1.02%)。结论：本方法简便、准确、重复性好，可作为冠心丹参胶囊中主成分的含量测定方法。

冠心丹参胶囊；高效液相色谱；含量测定

冠心丹参胶囊是由丹参、三七和降香油3味中药组成的复方制剂，具有活血化瘀、理气止痛之功能。用于气滞血瘀所致的胸痹，症见胸闷刺痛、心悸气短，是治疗冠心病心绞痛的常用药物。该制剂临床应用时间长，单用或联合用药疗效确切[1-2]。以降香油代替冰片入药降低了不良反应[3]，得到医生和患者的认可。随着中药地位日益提高，中药制剂的质量标准也越来越受到重视，《中华人民共和国药典》2010版规定以丹参酮ⅡA作为冠心丹参胶囊的质量控制指标[4]。然而中药制剂的有效成分复杂，单一质控指标不尽合理，本研究采用HPLC建立冠心丹参胶囊中丹参水溶性成分(丹参素钠、丹酚酸B)、脂溶性成分(隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA)和三七主成分(人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1)的含量测定方法，为冠心丹参胶囊质量标准的完善提供参考。

1 仪器和试药

1.1 仪器

E2695-2486型高效液相色谱仪(美国Waters公司)；SPD-20A二极管阵列检测器(美国waters公司)；超声清洗器(频率为40 KHz，功率为300 W)；AL204型万分之一电子天平、XP6型十万分之一电子天平(美国Metteler-Toledo公司)。

1.2 试药

丹酚酸B对照品、丹参素钠、隐丹参酮对照品、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1(中国食品药品检定研究院，批号分别为111562-201313，110855-201412，110852-200806，11086-200406，110766-200619，110703-201128，110704-201424)；冠心丹参胶囊[国药集团致君(深圳)坪山制药有限公司，批号分别为PC-130101，PC-140603，PC-140702]；乙腈和甲醇均为色谱纯；磷酸为分析纯；水为纯化水。

2 方法和结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取丹参素钠、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA以及人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1对照品适量，采用70%甲醇配制成质量浓度分别为113.6、187.2、105.0、110.2、386.0、499.4、433.7 μg·mL-1的对照品储备液。

2.2 供试品溶液的制备

精密称取研磨均匀的冠心丹参胶囊0.3 g，加入20 mL 70 %甲醇，密塞，称定重量，超声提取30 min，放冷，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，8000 r·min-1离心滤过，取续滤液，以0.45 μm的微孔滤膜过滤，即得。

2.3 色谱条件

以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸为流动相B，按表1所示进行梯度洗脱；检测波长分别为270 nm(检测丹参成分)、203 nm(检测三七成分)；柱温为30 ℃；流速为0.8 mL·min-1；进样量为10 μL。

2.4 阴性对照溶液的制备

参照冠心丹参胶囊的处方工艺过程制备缺丹参或三七的阴性样品，照2.2项下的供试品制备方法处理，制成缺丹参或三七的阴性样品溶液。

表1 流动相梯度洗脱表

2.5 专属性试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，注入色谱仪，按照2.3项下色谱条件进行检测，记录色谱图。在与丹参素钠、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA以及人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1对照品相应的保留时间处没有色谱峰，说明阴性对照溶液无干扰，见图1。

2.6 线性关系考察

精密量取按2.1项制备的丹参素钠、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA以及人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的对照品储备液适量，质量浓度分别为丹参素钠：7.1、14.2、28.4、56.8、113.6 μg·mL-1；丹酚酸B：11.7、23.4、46.8、93.6、187.2 μg·mL-1；隐丹参酮：6.6、13.1、26.3、52.5、105.0 μg·mL-1；丹参酮Ⅰ：6.9、13.8、27.6、55.1、110.2 μg·mL-1；丹参酮ⅡA：7.3、14.5、29.0、58.0、116.0 μg·mL-1；人参皂苷Rg1：31.2、62.4、124.9、249.7、499.4 μg·mL-1；人参皂苷Rb1：27.1、54.2、108.4、216.9、433.7 μg·mL-1，经0.45 μm的微孔滤膜过滤后，按2.3项下色谱条件进样，记录色谱峰面积，以浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线，对其进行线性回归，得回归方程。结果见表2。

表2 线性关系试验结果

注：A.丹参主成分混合对照品(270 nm)；B.供试品(270 nm)；C.缺丹参阴性对照品(270 nm)；D.三七主成分混合对照品(203 nm)；E.供试品(203 nm)；F.缺三七阴性对照品(203 nm)；1.丹参素钠；2.丹酚酸B；3.隐丹参酮；4.丹参酮Ⅰ；5.丹参酮ⅡA；6.人参皂苷Rg1；7.人参皂苷Rb1。图1 冠心丹参胶囊中主成分的HPLC图

2.7 精密度试验

按2.1项下方法制备对照品溶液，在2.3项下色谱条件下连续进样6次。丹参素钠、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA以及人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1峰面积的RSD分别为0.23%、0.27%、0.37%、0.42%、0.13%、0.10%、0.57%，表明仪器精密度良好。

2.8 重复性试验

取同一批号样品，按2.2项方法制备6份供试品溶液，进行含量测定。丹参素钠、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA以及人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1峰面积的RSD分别为0.87%、1.1%、0.69%、0.99%、1.73%、2.1%、1.65%、1.42%，表明测定方法的重复性良好。

2.9 稳定性试验

取同一批号的供试品溶液，分别于配制后0、2、4、8、12 h进样测定，结果丹参素钠、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA以及人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1峰面积的RSD分别为0.15%、0.33%、0.21%、0.44%、0.37%、0.46%、0.29%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.10 加样回收率试验

精密称取6份已知含量的同一批次供试品约0.3 g，精密加入1 mL浓度分别为1.369 1、2.673 0、0.178 5、0.256 3、0.400 5、6.176 8、3.017 3 mg·mL-1的丹参素钠、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA以及人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1对照品溶液，按2.3项下色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表3。

表3 加样回收率试验结果

2.11 样品含量测定

取生产批号为PC-130101、PC-140603、PC-140702的冠心丹参胶囊的内容物，混匀，分别按2.2项下方法制备3个批次供试品溶液，按2.3项下色谱条件测定，结果见表4。

表4 样品测定结果

3 讨论

3.1 检测波长的选择

冠心丹参胶囊成分复杂，各成分的色谱行为及仪器的响应值也有差异。本研究采用二极管阵列检测器对样品进行190～400 nm全波长扫描。结果显示，检测波长为203、270 nm时，分离度、峰形、柱效及出峰的稳定性较为满意，结合已发表文献[5-7]，选择270 nm作为丹参成分检测波长，203 nm作为三七成分检测波长。

3.2 流动相的选择

本研究考察了乙腈-0.1%磷酸、乙腈-甲醇-1.7%甲酸、甲醇-0.1%磷酸，乙腈-水等不同流动相，结果以乙腈-0.1%磷酸为流动相时色谱图的基线较稳定，且在本研究所采用梯度下分离效果最好。

3.3冠心丹参胶囊是治疗冠心病心绞痛的常用药物，药效确切，安全性好，受到广大医生和患者的认可。其成分众多，包括丹参水溶性成分如丹参素和丹酚酸B等，脂溶性成分如隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA等，三七成分如人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1等。本研究建立了冠心丹参胶囊中丹参和三七的7种主成分含量的综合测定方法，为提高该制剂的质量标准，更好地对其生产过程进行质控提供参考。

根据本研究结果，除了质控标准丹参酮ⅡA等丹参脂溶性成分以外，冠心丹参胶囊中丹参水溶性成分丹参素和丹酚酸B、三七成分人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1均较高。丹参水溶性成分具有扩张血管、保护内皮细胞和心肌细胞等作用[8-9]，人参皂苷类成分对心血管系统也具有保护作用[10]，建议增加丹参水溶性成分以及三七成分作为冠心丹参胶囊的质控指标。

与冠心丹参胶囊处方相同的制剂中，冠心丹参滴丸以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1为质量控制标准[10]。与冠心丹参胶囊处方相近的制剂中，复方丹参滴丸以丹参素钠为质量控制标准[11]。复方丹参片则以丹酚酸B、丹参酮IIA以及三七总皂苷为质量控制标准[4]。不同的中药制剂的质量控制标准各不相同，然而对于处方相同或相近的制剂，应建立多个共同质控指标，以提高同类制剂的质量，以确保临床安全有效。

[1] 王晓霞，张炎.冠心丹参胶囊治疗冠心病心绞痛49例疗效观察[J].包头医学院学报，2002，18(1)：25-26.

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DeterminationofMainComponentsinGuanxinDanshenCapsulesbyHPLC

TANGJie1，SONGBingna2，ZHEGNPan1*，DINGMei1

(1.SinopharmZhijun(Shenzhen)PharmaceuticalCo.,Ltd.Shenzhen，Guangdong518118，China; 2.SinopharmZhijun(Shenzhen)PingshanPharmaceuticalCo.,Ltd.Shenzhen，Guangdong518118，China)

Objective：To determine the content of the tanshinol natrium，salvianolic acid B，cryptotanshinone，tanshinoneⅠ，tanshinoneⅡA，ginsenoside Rg1and ginsenoside Rb1in Guanxin Danshen Capsules.Methods：HPLC was performed on C18column using acetonitrile-0.1% phosphoric acid (gradient elution) as the mobile phase at a flow rate of 0.8 mL·min-1.The detection wavelengths were set at 270 nm and 203 nm.The column temperature was 30 ℃.Results：Tanshinol natrium，salvianolic acid B，cryptotanshinone，tanshinoneⅠ，tanshinoneⅡA，ginsenoside Rg1and ginsenoside Rb1showed good linearity in the concentration range of 7.1-113.6，11.7-187.2，6.6-105.0，6.9-110.2，7.3-116.0，31.2-499.4 and 27.1-433.7 μg·mL-1，respectively.And their average recovery rates were 99.51% (RSD=0.91%)，97.73% (RSD=1.35%)，97.20% (RSD=0.78%)，98.47% (RSD=0.69%)，99.12% (RSD=0.31%)，96.64% (RSD=0.86%) and 97.98% (RSD=1.02%)，respectively.Conclusion：The method is simple and accurate with good reproducibility.It can be used for the determination of the main components in Guanxin Danshen Capsules.

Guanxin Danshen Capsules；HPLC；content determination

2015-06-26)

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郑盼，硕士，研究方向：药理学；TEL：(0755)29528333-8203,E-mail:zhengpan@szzhijun.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.10.020