天麻熄风胶囊质量标准研究

辛爱玲，郭润琴

(1.洛阳市食品药品检验所，河南 洛阳 471023；2.广东省食品药品职业技术学校，广东 广州 510663)

·中药工业·

天麻熄风胶囊质量标准研究

辛爱玲1*，郭润琴2

(1.洛阳市食品药品检验所，河南 洛阳 471023；2.广东省食品药品职业技术学校，广东 广州 510663)

目的：建立天麻熄风胶囊的质量标准。方法：用显微鉴别法及TLC法对处方中各种药材进行定性鉴别，HPLC测定天麻素的含量。采用Thermo Hypersil ODS柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(3∶97)；流速为1 mL·min-1；检测波长为221 nm。结果：显微鉴别特征专属，薄层色谱斑点清晰，阴性对照无干扰；天麻素在10.48～94.32 μg·mL-1呈良好的线形关系(r=0.999 9，n=5)。结论：本方法专属性强、简便、准确，可用于天麻熄风胶囊的质量控制。

天麻熄风胶囊；显微鉴别；薄层色谱；高效液相色谱

天麻熄风胶囊由天麻、蔓荆子、莪术、半夏和甘草5种中药材组成，具有平肝、熄风、止痉、疏散风热、清利头目的功能。适用于筋脉牵掣、肢体麻木、头风眩晕、目暗不明、周身疼痛等症。天麻熄风胶囊现行的质量标准仅有性状及检查项，不能很好地控制质量，为进一步提高其质量标准，本试验对天麻熄风胶囊进行了显微鉴定，避开交叉，排除干扰，选取各药材具有鉴别价值的特征为鉴别要点。检出了方中天麻、蔓荆子、半夏及甘草，并对它们进行了TLC鉴别，与显微鉴定结果相呼应。采用HPLC建立了该方中君药天麻的主要成分—天麻素的含量测定方法。试验结果表明，该法专属性强、准确、简便，能够有效地控制该制剂的质量。

1 显微鉴别

1.1 仪器与试药

德国徕卡DM500型照相显微镜；天麻熄风胶囊(洛阳市第二中医院制剂室，批号分别为20130918，200130919，20131120)。

1.2 方法与结果

取天麻熄风胶囊内容物研磨均匀，制备粉末片子，置显微镜下观察各药味的鉴别特征，见图1。

1.2.1 天麻 用醋酸甘油水装片观察糊化多糖类的薄壁，细胞无色，有的细胞可见长卵形、长椭圆形或类圆形，遇碘液显棕色或淡棕紫色。

1.2.2 半夏 椭圆形细胞存在于粘液细胞中。

1.2.3 甘草 纤维成束，壁厚，微木化，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维。

1.2.4 蔓荆子 非腺毛2～3个细胞，顶端细胞基部稍粗，有疣突。

1.多糖类的薄壁细胞(天麻)；2.嵌晶纤维(甘草)；3.草酸钙针晶束(半夏)；4.非腺毛(蔓荆子)。图1 天麻熄风胶囊显微图

2 薄层色谱鉴别

2.1 仪器与材料

KQ2200B型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；GC-8AFF薄层数码成像系统(CAMAG公司)；Canon PowerShot G5数码照相机；天麻素对照品、莪术对照药材、蔓荆子对照药材、半夏对照药材(中国食品药品检定研究院，批号分别为807-200104，121304-200902，121277-200401，121272-200401)。

2.2 方法与结果

2.2.1 天麻 取天麻熄风胶囊粉末约1.5 g，加70%甲醇15 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL，使其溶解，作为供试品溶液。取天麻熄风胶囊缺天麻阴性样品按同法制备成阴性对照溶液。另取天麻素对照品，加甲醇制成质量浓度为1 mg·mL-1溶液，作为对照品溶液。照TLC法试验吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(8∶1∶3∶0.1)为展开剂，展开、取出、晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，斑点显色清晰，背景无干扰，Rf值适中，阴性对照无干扰。见图2。

1.样品20130918；2.样品20130919；3.样品20131120；4.天麻素对照品；5.缺天麻阴性对照样品。图2 天麻TLC鉴别色谱图

2.2.2 蔓荆子 取天麻熄风胶囊10 g，加石油醚(60～90 ℃)50 mL，加热回流2 h，滤过，弃去石油醚，药渣挥干，加丙酮80 mL，加热回流1.5 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL，使其溶解，作为供试品溶液。取天麻熄风胶囊缺蔓荆子阴性样品按同法制备成阴性对照溶液。另取蔓荆子对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照TLC法试验吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇(3∶2∶0.2)为展开剂，展开、取出、晾干，喷以10%三氯化铝乙醇液。在日光及紫外灯(365 nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，斑点显色清晰，背景无干扰，Rf值适中，阴性对照无干扰。见图3。

A.日光下检视图；B.紫外灯下检视图1.样品20130918；2.样品20130919；3.样品20131120；4.蔓荆子对照药材；5.缺蔓荆子阴性对照样品。图3 蔓荆子TLC鉴别色谱图

2.2.3 半夏 取天麻熄风胶囊10 g，加乙醇50 mL，加热回流30 m，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL，使其溶解，作为供试品溶液。取天麻熄风胶囊缺半夏阴性样品按同法制备成阴性对照溶液。另取半夏对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照TLC法试验吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(30∶6∶4∶0.5)为展开剂，展开、取出、晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液。在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，斑点显色清晰，背景无干扰，Rf值适中，阴性对照无干扰。见图4。

1.样品20130918；2.样品20130919；3.样品20131120；4.半夏对照药材；5.缺半夏阴性对照样品。图4 半夏TLC鉴别色谱图

2.2.4 莪术 取天麻熄风胶囊1.5 g，加乙醚20 mL，放置2 h，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1 mL，使其溶解，作为供试品溶液。取天麻熄风胶囊缺莪术阴性样品按同法制备成阴性对照溶液。另取莪术对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照TLC法试验吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(93∶7)为展开剂，展开、取出、晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液。在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，斑点显色清晰，背景无干扰，Rf值适中，阴性对照无干扰。见图5。

1.样品20130918；2.样品20130919；3.样品20131120；4.莪术对照药材；5.缺莪术阴性对照样品。图5 莪术TLC鉴别色谱图

3 天麻熄风胶囊中天麻素的含量测定

3.1 仪器与材料

高效液相色谱仪(Waters 2695)；二极管阵列检测器2996；DF-160A电子分析天平(常熟市衡器厂)；天麻素对照品(中国食品药品检定研究院，批号：807-200104)；乙腈为色谱纯，蒸馏水经微孔滤膜(0.45 μm)过滤，其他试剂均为分析纯。

3.2 方法与结果

3.2.1 色谱条件 Thermo Hypersil ODS柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温为40 ℃；流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(3∶97)；流速为1 mL·min-1；检测波长为221 nm。理论板数按天麻素峰计算应不低于2500。

3.2.2 对照品溶液的制备 精密称取天麻素对照品适量，加流动相溶解制成质量浓度为1.048 mg·mL-1的溶液，作为对照品储备溶液。

3.2.3 供试品溶液的制备 取天麻熄风胶囊内容物5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，称定重量，加热回流3 h，放置至室温，称重，用稀乙醇补足失去的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密吸取续滤液10 mL，浓缩至近干，残渣加乙腈-水(3∶97)混合溶液溶解，转移至25 mL量瓶中。用乙腈-水(3∶97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.2.4 阴性对照溶液的制备 天麻熄风胶囊原方去天麻，按制剂工艺制备成空白制剂。取空白制剂5 g，按3.2.3样品处理方法，制得阴性样品溶液。按3.2.1色谱分析方法操作进样，结果表明，阴性对照无干扰。见图6。

A.天麻素对照品；B.天麻息风胶囊样品；C.缺天麻阴性对照品。图6 天麻素HPLC色谱图

3.2.5 线性范围的考察 分别精密量取对照品储备溶液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 mL置10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μL注入色谱仪，测定峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算得回归方程为Y=171.014 8X-0.474 95，r=0.999 9，表明天麻素在10.48～94.32 μg·mL-1线性关系良好。

3.2.6 精密度试验 精密吸取3.2.5项下对照品溶液10 μL，重复进样5次，测定峰面积，RSD=0.78%，表明该方法精密度良好。

3.2.7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液(批号：20130918)10 μL，于0、2、4、6、8、12 h进样，测定峰面积，RSD=1.08%(n=6)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

3.2.8 重复性试验 取同批样品5份(批号：20130918)如3.2.3法提取，按照3.2.1项下的色谱条件进行分析，结果RSD=0.94%，表明该方法重复性良好。

3.2.9 加样回收率试验 精密称取已知含量同批样品9份，分别精密加入天麻素对照品溶液，如3.2.3法制备成加标样品溶液，按照3.2.1项下的色谱条件进行分析，计算加样回收率。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

3.2.10 样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液与样品溶液各10 μL，注入色谱仪，以外标法按面积计算，测得3批样品含量，结果见表2。

表2 样品测定结果

4 讨论

4.1本方共有5种药材组成，其中天麻为君药，故本试验对方中天麻分别进行了显微鉴定及薄层鉴定，并对其主要成分天麻素进行了含量测定，有效控制了方中君药的真伪及优劣。对方中臣药及佐药(莪术、蔓荆子、半夏)进行了鉴定，其中莪术与蔓荆子显微特征均含有油细胞，在片子上不易区分，故对莪术进行了薄层鉴别。蔓荆子具有特定的非腺毛特征，半夏具有草酸钙针晶束存在于粘液细胞中的独特特征，故对蔓荆子及半夏分别进行了显微鉴定和薄层鉴定，鉴定结果相呼应。甘草在方中仅作为使药，且用量较少，故在本试验中仅做了显微鉴定，以确定其真伪。

4.2在对蔓荆子的薄层色谱鉴别中，根据有关资料[1-2]，笔者先后用了石油醚和甲醇提取，结果莪术成分对其干扰严重，最后用石油醚去脂、丙酮提取的办法，取得满意结果。

4.3在对半夏的薄层色谱鉴别中，参考相关资料[1，3]，多半采用检测半夏中的氨基酸类成分来进行鉴别，专属性不强，干扰明显，不能作为鉴别依据，故选择了以半夏药材来进行比较鉴别。

4.4本试验中，参考有关文献[4-10]，笔者曾对流动相的选择、供试品的取样量、提取溶剂、提取方法等多种因素进行了考察，最后确定以下条件为最佳方案：柱温为40 ℃；流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(3∶97)；流速为1 mL·min-1；供试品取样量为5 g，用稀乙醇进行提取，经过中间步骤的处理，最后以乙腈-水(3∶97)溶解定容。取天麻素对照品溶液用紫外进行全波长扫描测定，结果在221 nm处有最大吸收，故选择221 nm作为检测波长。

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[3] 傅佳，潘林梅，郭立玮.半夏泻心颗粒的质量标准研究[J].中国中医药信息杂志，2006，13(9)：51-52.

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Study on Quality Standard of Tianmaxifeng Capsules

XIN Ailing1*，GUO Runqin2

(1.Institute for Food and Drug Control，Henan Luoyang 471023，China；2.Guangdong Food and Drug Vocational Technical School，Guangdong Guangzhou 510663，China)

Objective：To establish the quality standard for Tianmaxifeng Capsules.Methods：Microscopical identification and TLC method were used to qualitative identification of all materia medica in prescription，and the content of gastrodin was determined by HPLC with Thermo Hypersil ODS column(4.6 mm×250 mm，5 μm)，the mobile phase was composed of acetonitrile and 0.05% phosphoric acid(3∶97)，the flow rate was 1 mL·min-1and the detection wavelength was set at 221 nm.Results：Microscopic identification features were exclusive，the TLC sports developed were fairly clear，and the blank test showed no interference.The line of the content of gastrodin in Tianmaxifeng Capsules was nearly straight between 10.48-94.32 μg·mL(r=0.999 9，n=5).Conlcusion：The methods are specific，accurate and quick to operate，and can be used for the quality control of Tianmaxifeng Capsules.

Tianmaxifeng capsules；microscorpic identification；TLC；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.2.016

2014-05-22)

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辛爱玲，主管药师，研究方向：中成药质量标准；Tel：(0379)63937083，E-mail：xinling0609@163.com