耧斗菜提取物的抗衰老作用

敖恩宝力格 乌达巴拉 张园园 (内蒙古师范大学生命科学与技术学院，内蒙古 呼和浩特 010022)

果蝇生命周期短、繁殖快、饲养方便，因此与其他生物相比更有利于衰老实验的研究〔1，2〕。耧斗菜属毛茛科耧斗菜属植物，是蒙古族药用及食用野生植物，具有通经活血、催产、下胎衣、愈伤、止痛等功效，主要活性成分是生物碱〔3，4〕。本实验旨在探讨耧斗菜提取物对黑腹果蝇的抗衰老作用。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器 耧斗菜采自呼和浩特市大青山。采摘后自然晾干，取全草粉碎过100目的筛子后保存于阴凉干燥处。黑腹果蝇由内蒙古师范大学生命科学与技术学院遗传实验室提供。基本培养基原料为琼脂粉(天津市英德生化试剂有限公司)、丙酸(北京百利化学品开发中心)、乙醚(天津市津东天正精细化学试剂)、玉米粉、红糖、酵母粉。其他化学试剂均为国产分析纯试剂。实验用水为二次石英亚沸蒸馏水。主要仪器有MGC-350BP-2光照培养箱(上海一恒科技有限公司)，DC-2006型超级数控恒温水槽(上海天平仪器技术有限公司)，UV-2000紫外-可见分光光度计(北京莱伯泰科有限公司)，XMT数控超级恒温槽(上海长丰计量仪器仪表厂)和HVE-50全自动高压灭菌锅(HIRA YAMA制造公司)等。

1.2 提取方法 准确称取耧斗菜粉末1.00 g于100 ml锥形瓶中，加入80%浓度的乙醇15 ml，浸泡6 h，超声辅助提取(12 kHz，10 min)，过滤，滤液用冷冻干燥仪干燥，称重，然后用为10%二甲基亚砜(DMSO)溶液使其溶解并用蒸馏水稀释至一定体积。

1.3 果蝇寿命的测定 培养果蝇的基本培养基原料为琼脂粉、丙酸、乙醚、玉米粉、红糖和酵母粉。收集8 h内孵出的雌雄果蝇各600只，相同性别的果蝇以100只为单位随机分为6个小组，雌雄同步分瓶培养。将其中一组接于基础培养基作为对照组，其余两组分别培养在耧斗菜提取物(0.06 mg/100 g和0.12 mg/100 g)培养基上作为实验组。各组均放在(25±1)℃的培养箱中培养，每3 d更换1次培养基。自接种次日开始观察和记录各饲养瓶内果蝇死亡数，直至全部死亡。以每组存活天数的总和除以该组果蝇数目作为平均寿命，每组中最后死亡的10只果蝇寿命的平均数为最高寿命。

1.4 果蝇性活力测定 连续喂养15 d后做性活力测定。雌雄果蝇1∶1配对，记录40 min内交配的果蝇对数、交配潜伏期、交配时长。如果40 min后交尾果蝇没有分开，则等其自然分开并记录交尾时长。

1.5 果蝇繁殖力测定 对上述果蝇进行性活力测定之后，将同一小组中的雌雄果蝇以1∶1比例置于培养管内进行交配。3管/组、每管30对果蝇。置于(25±1)℃的培养箱内孵育，第7天清除亲本。第13天开始统计子代成虫，连续统计5 d，记录每管果蝇数目。

1.6 统计学处理 采用SPSS10.0软件行t检验、单因素方差分析。

2 结果

2.1 耧斗菜提取物对果蝇寿命的影响 实验组平均寿命均高于对照组(P＜0.05)。0.06 mg/100 g剂量组雌雄果蝇的寿命分别延长了10 d和3 d;0.12 mg/100 g剂量组分别延长了11 d和4 d。对于雌雄果蝇，实验组最高寿命均高于对照组，但无显著性差异(P＞0.05)。雌果蝇平均寿命差异极显著(P＜0.01)，雄果蝇平均寿命差异显著(P＜0.05)。0.06 mg/100 g剂量组的雌雄果蝇间平均寿命差异显著(P＜0.05)，而0.12 mg/100 g实验组的雌雄果蝇之间有极显著的差异(P＜0.01)。见表1。

2.2 耧斗菜提取物对果蝇性活力的影响 实验组交配对数明显多于对照组(P＜0.05)，交配率提高7.8% ～18.9%，交配潜伏期相对短，交配时间明显延长(P＜0.01)。见表2。

2.3 耧斗菜提取物对果蝇繁殖力的影响 各实验组子代果蝇数较对照组均有所增加，增值率达48.3% ～65.2%，0.12 mg/100 g剂量组子代雄果蝇数目与对照组比较差异显著(P＜0.01)。见表3。

表1 耧斗菜提取物对果蝇寿命的影响(n=200)

与对照组比较:1)P＜0.01，2)P＜0.05;与雌性比较:3)P＜0.05，4)P＜0.01下表同

表2 耧斗菜提取物对果蝇性活力的影响

表3 耧斗菜提取物对果蝇繁殖力的影响(±s)

表3 耧斗菜提取物对果蝇繁殖力的影响(±s)

组别 代果蝇数雌蝇(只) 雄蝇(只) n 增殖率(%F1)21.25±6.0120.86±6.122010 0.06 mg/100 g组 29.08±8.8532.34±5.5529848.30.12 mg/100 g组 33.12±7.2937.69±7.5841)对照组33265.2

3 讨论

寿命是评价受试生物抗衰老作用的重要指标，田金强等〔5〕研究发现，阿魏菇多糖能够明显延长果蝇寿命。李连德等〔6〕研究表明，不同来源的虫草多糖对果蝇均有不同程度的延寿作用。虞磊等〔7〕研究发现蜜环菌菌索多糖可显著延长果蝇寿命。陈葆荃等〔8〕研究证实，枸杞子提取物能够延长雌果蝇平均寿命和半数成活期。本研究结果表明耧斗菜提取物具有显著延长雌果蝇寿命、增强果蝇性活力及繁殖能力的作用。

性活力和繁殖能力可从生理角度反映受试生物的抗衰老作用。阿娃汉等〔9〕研究发现，黑果枸杞色素能够延长果蝇寿命，但对提高果蝇性活力无效。李春红等〔10〕研究发现，南沙参具有明显增强小鼠和果蝇性活力的作用，并指出其作用与清除自由基有关。杨冬梅等〔11〕的研究表明，冻干胡蜂蜂蛹可显著延长果蝇寿命，并增强果蝇繁殖力。王沂等〔12〕研究发现，厚朴酚具有延缓衰老、促进果蝇繁殖力及提高生育能力的作用。仪慧兰等〔13〕表明，灵芝浸提液具有加速果蝇幼虫的生长发育、增加子代数、延长果蝇寿命。本实验研究结果推测适量的耧斗菜提取物能使果蝇受精卵生存力提高。

1 王塔娜，邰丽华，富新年.藻蓝蛋白(Phycocyanin)对果蝇寿命的影响〔J〕.国际遗传学杂志，2010;33(4):215-7.

2 王塔娜，邰丽华，图雅嘎日拉，等.节旋藻藻胆蛋白对果蝇性活力及繁殖能力的影响〔J〕.内蒙古师范大学学报(自然科学版)，2010;39(6):608-11.

3 林 镕，陈艺林.中国植物志〔M〕.北京:科学出版社，1985:43.

4 陈四宝，王立为.耧斗菜族药用植物化学成分及资源利用概况〔J〕.中药学，2001;32(11):3-5.

5 田金强，朱克瑞，李新明，等.阿魏菇多糖的抗氧化功能及其对果蝇寿命的影响〔J〕.食品科学，2006;27(4):223-6.

6 李连德，樊美珍，李增智.14种虫草多糖对果蝇成虫寿命影响的试验〔J〕.微生物学通报，2000;27(6):427-8.

7 虞 磊，沈业寿，吴建民.蜜环菌菌索多糖抗衰老作用研究〔J〕.中成药，2006;28(7):994-6.

8 陈葆荃，谢梅林，钱曾年.枸杞子提取物对小鼠免疫功能和果蝇寿命的影响〔J〕.中国野生植物资源，1995;2(8):5-7.

9 阿娃汉，陈 瑛，陶大勇.黑果枸杞色素对果蝇性活力及寿命影响的研究〔J〕.塔里木法大学学报，2007;19(3):19-20.

10 李春红，李 泱，李新芳.南沙参多糖对小鼠和果蝇性活力的影响〔J〕.生殖医学杂志，2002;11(4):213-7.

11 杨冬梅，李俊年，张 丽.冻干胡蜂蜂蛹对果蝇寿命和繁殖性能的影响〔J〕.天然产物研究与开发，2005;17(4):450-2.

12 王 沂，吴 翔，翁新楚.厚朴酚对果蝇寿命和繁殖力的影响〔J〕.四川动物，2006;25(4):700-2.

13 仪慧兰，高翠莲.灵芝浸提液对果蝇生物学特性的影响〔J〕.山西大学学报，2000;23(3):146-9