丹参多酚对重症急性胰腺炎大鼠胰腺微血管通透性的影响

李田阳，韩丽，贾宁，李雅静，田媛

（1. 河北大学临床医学院，河北 保定 071000；2. 河北大学附属医院消化内科，河北 保定 071000）

胰腺微循环紊乱学说是重症胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）重要的发病机制及病理生理表现，其中包括胰腺微血管通透性的改变。有研究者通过应用活体显微镜方法观察到了胰腺微血管早期通透性增加；并通过应用伊文氏蓝漏出之荧光法观察到血浆的成分渗出至胰腺组织的间隙中[1-2]。丹参多酚具有活血、化瘀、通脉等作用。临床主要用于冠心病患者，中医辨证为心血瘀阻证者，症见胸痛、胸闷、心悸者。但是它在SAP时，是否能对胰腺组织起到活血、化瘀、通脉，改善胰腺微循环，尤其是改善胰腺微血管通透性，从而达到减少胰腺腺叶组织向间质组织渗出，进而减轻胰腺组织水肿及胰液外渗，阻断胰腺病变进一步发展目前不清。本实验旨在探讨丹参多酚对重症急性胰腺炎大鼠胰腺微血管通透性的影响，为其临床应用提供实验依据及理论基础。

1 材料和方法

1.1 仪器设备

SP-100型静脉输液泵（日本JMS公司）、752C紫外可见光分光光度计（上海第三仪器分析厂）、160度电热干燥箱（上海玺恒实业有限公司）。

1.2 试剂药品

戊巴比妥、牛磺胆酸钠（美国Sigma公司）、伊文氏兰（美国Sigma公司）、甲酰胺、丹参多酚注射液（中国上海绿谷制药有限公司）。

1.3 SAP模型的制备

1.3.1 实验动物

雄性Wistar大鼠，清洁级，3～4个月龄，体质量300～350 g，北京维通利华动物实验中心提供，自由摄食及饮水。

1.3.2 动物分组

随机分为3小组，每组10只，分别为空白对照组、SAP模型组、丹参多酚组，所有大鼠均造模后6 h处死，进行检测。

1.3.3 SAP模型的制备

采用Aho等[3]的方法并加以改进，3%戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔内注射麻醉，成功后固定于手术板上，减去腹部毛发，消毒腹部皮肤，铺无菌巾。经上腹部正中切口3 cm入腹，找到十二指肠，于其内侧发现片状胰腺组织，找到胰胆管。于肝十二指肠韧带肝门侧以小号动脉夹夹住胆管，防止牛磺胆酸钠进入肝脏。将24G针头于胰胆管十二指肠开口处穿刺，进入胰胆管0.5 cm并暂时缝扎固定针头，连接微量输液泵，经胰胆管以0.2 mL/min速率，0.1 mL/kg逆行注入5%牛磺胆酸钠，5 min后可见胰腺充血水肿，撤去针线、动脉夹，无菌棉签压迫穿刺点5 min，并将腹腔脏器复位。造模前12 h禁食、4 h禁水；造模后立即背部皮下注入生理盐水5 mL，自由饮水，注意保暖。空白对照组以同样的方法逆行胰胆管注入生理盐水，余条件相同。

1.3.4 给药方式

造模前3 d，NS按0.3～0.5 mL/100 g溶药，丹参多酚按10 mg/d给药，连续3 d。给药方法：将大鼠装入棉线手套中，橡皮筋扎口，只暴露尾巴，然后用40～45 ℃温水浸泡半分钟，使其血管充血，擦干备用。选择5号注射针头，以30 °距尾尖2 cm进针，平行向前，见回血时注药。

1.4 大鼠胰腺微血管通透性的测定

采用Aho等[3]的方法并加以改进：大鼠造模后6 h从股静脉按2 mL/kg剂量注入1%伊文氏兰，30 min后取全部胰腺组织，称湿质量后剪取约150 mg放入5 mL试管，按照0.03 g/mL加入甲酰胺。24 h后取浸出液1 mL，用分光光度计测定伊文氏兰浓度，并计算伊文氏兰漏出量；其余组织剪碎后置于160 ℃电热干燥箱，24 h后称质量，以湿/干质量之比计算150 mg胰腺组织干质量；最后以伊文氏兰漏出量/胰腺组织干质量（μg/g）表示微血管通透性。

1.5 统计方法

统计采用SPSS13.0软件包，胰腺微血管通透性各项结果以“”表示，组间比较用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

伊文氏兰漏出量/胰腺组织干质量（μg/g）表示微血管通透性。与空白对照组比较，SAP模型组造模后6 h后，胰腺微血管通透性明显增强，由（72.27±11.61）μg/g急速上升至（676.42±98.75）μg/g，组间差异有统计学意义（P<0.01）。与SAP模型组比较，丹参多酚组胰腺微血管通透性明显降低，由（676.42±98.75）μg/g，下降至（465.21±76.83）μg/g，组间差异有显著性意义（P<0.01）。见表1。

表1 各组大鼠胰腺微血管通透性检测结果（，n=10）

表1 各组大鼠胰腺微血管通透性检测结果（，n=10）

与空白对照组比较，aP<0.01。

组别 伊文氏兰漏出量/μg 胰腺干质量/g 微血管通透性/（μg/g）空白对照组 18.18±4.23 0.24±0.07 72.27±11.61 SAP 模型组 195.47±34.77 0.25±0.05 676.42±98.75丹参多酚组 117.28±26.5 0.26±0.07 465.21±76.83a F 122.566 0.244 178.606 P＜0.001 ＞0.05 ＜0.001

3 讨论

SAP时毛细血管渗漏同其他危重疾病具有相似性，即全身多种炎性介质的激发及瀑布样反应，胰腺组织炎症迅速从腹部病变蔓延成为全身病变，引起进行性全身及胰腺组织局部水肿，胰腺及全身重要脏器缺血缺氧，导致全身多脏器功能障碍（MODS）[3-10]。

不同药物诱发的SAP模型均具有同样的表现。如以雨蛙素诱导SAP模型，采用指示剂探讨胰腺的微血管通透性的变化，发现SAP时微血管壁对多种物质如异硫氰酸荧光素所标记白蛋白的通透性有所升高；电镜检查则发现，SAP毛细血管壁的内皮细胞，胞质内的大量空泡形成，线粒体发生肿胀，提示内皮细胞的通透性有所升高。而通过牛磺胆酸钠而诱发的SAP大鼠，发现6 h后胰腺组织血管的通透性已明显增加[11-13]。其具体表现主要为毛细血管内皮损伤，血管内皮细胞收缩，细胞连接分离，出现裂缝，毛细血管内皮孔隙增大，大量体液及蛋白分子外流，引致迅速出现胰腺组织及周围的水肿渗出，病情迅速恶化。SAP高病死率与毛细血管渗漏综合征密切相关，改善毛细血管渗漏也是SAP治疗的一项关键措施[14-19]。

丹参多酚是从中药丹参中提取的以丹参乙酸镁为主要成分的丹参多酚盐类化合物。可通过多个作用靶点改善实验动物的血液黏、浓、聚、滞状态，保护血管内皮细胞功能，改善微循环[11]。此外，丹参多酚通过多个途径、多个机制发挥抗凝、促血管生成的作用，还具有钙拮抗作用，通过其钙拮抗作用减轻血管内皮损伤[20-22]。

本实验证实SAP时，大鼠胰腺微血管伊文氏兰漏出量已明显增加，表明微血管通透性明显增强，其增加的幅度及进展速度非常快，将会明显加重胰腺水肿、渗出，对病情发展十分不利。使用丹参多酚处理后，胰腺微血管通透性明显降低，说明其能明显改善胰腺微循环血管通透性，这对于改善SAP时胰腺的水肿及周围的渗出，乃至全身病情的发展将至关重要。其原因可能与丹参多酚活血化瘀，保护毛细血管内皮有关。

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