高效液相色谱法测定复方磷酸萘酚喹片中青蒿素的溶出度

范亚刚 张利 李萍

摘要：目的采用高效液相色谱法测定复方磷酸萘酚喹片中青蒿素的溶出度。方法采用Kron.asil 100 -5C18（150 x4.6 mm）色谱柱，流动相为乙晴：水（55：45），柱温30℃，流速1.0mL- min-1，检测波长210 nm。结果复方磷酸萘酚喹片中青蒿素进样量在1.32-26.4μg· mL-1范围内线性关系良好（r=1），平均回收率为100. 83% ，RSD=1.76%（n=9）。结论本方法测定简便、快速，结果准确、可靠，重现性好，适用于复方磷酸萘酚喹片中青蒿素的溶出度的测定。

关键词：高效液相色谱；复方磷酸萘酚喹片；青蒿素；溶出度测定

中图分类号：R284

文献标志码：A

文章编号：1007-2349（2015） 03-0062-03

复方磷酸萘酚喹片是昆药集团与军事医学科学院微生物流行病所合作开发研究的磷酸萘酚喹与青蒿素以1：2.5的比例组成的复方抗疟口服制剂，临床上主要用于恶性疟、间日疟的治疗，能快速控制临床症状与杀虫速度迅速，不良反应轻微，恶性疟复燃率低等优点，具备了青蒿素的速效和萘酚喹杀虫彻底且持效的特点，具有高效、速效、长效作用，复燃率低，毒副反应小，使用方便的优点，且符合复方配伍原则，是一个非常安全、有效的、理想的创新复方抗疟药，属于我国基本药物。

复方磷酸萘酚喹片现行质量标准为国家食品药品监督管理局药品标准ws-772（X- 617）- 2001（规格为125mg）和YBH00312007（规格为250mg）。但现行标准中青蒿素溶出度的检验方法设定有差异，限度值也不一致，所采用的溶出介质不一样，造成溶出度结果精密度偏低（见表1）。

青蒿素溶出度采用碱水解30min后加酸中和用高效液相色谱法测定，操作繁琐、误差较大，液相色谱图中青蒿素分解为两个峰，不易分离，且样品不稳定，造成测定误差，对准确评价药品质量产生影响。复方磷酸萘酚喹片中的青蒿素为难溶性组份，难溶性口服固体制剂在体内的生物利用度是当前对药品质量关注的一个重点。基于上述原闲，笔者认为应统一并合理修订质量标准，减少操作误差，使测定结果更为准确，以便更为科学、合理的评价药品质量，故参照《中国药典》[1]现行标准[2-3]进行了溶出度新方法的研究。1 仪器与试药

Agilent technologies HP1200高效液相色谱仪；电子天平BP-211D； RCZ-8M自动取样溶出仪；ZKT-18M真空脱气仪。

十二烷基硫酸钠（国药集团化学试剂有限公司；批号：F20110804）；青蒿素对照品（中国药品生物制品鉴定所；批号：100202-201004；含量为98.8%）；乙腈（Merck KGaA批号：JA024730）为色谱纯；纯水；复方磷酸萘酚喹片（昆明制药集团股份有限公司，批号：12JK1、12DB、14FR1、131A2、14CD2、14FL）。2方法与结果2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil 100 - SC18（ 150×4.6 mmE82180）色谱柱；流动相：乙腈一水（55：45）；检测波长：210 nm，流速1.0mL.min-1，柱温30C，进样量：20μL。在该色谱条件下，青蒿素出峰结果见图l。2.2对照品贮备液的制备 精密称取青蒿素对照13.2 mg置于50 mL容量瓶中加流动相（乙腈：水=55：45）溶解并稀释至刻度摇匀即得对照品贮备液。2.3 方法学考察2.3.1 线性关系的考察取“2.2”项下对照品储备液适量，依次取5、10、20、50、100¨l注入液相色谱仪中，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，回归方程

为：y，= 899.84x - 2.9185（r=1.000），表明进样量在1.32-26.4μg之间线性关系良好。（见图2）2.3.2精密度试验取“2.2”项下对照品储备液进行检测，照液相色谱条件重复进样5次（n=5），RSD为0.09%，表明精密度良好。2.3.3稳定性试验取“2.2”项下对照品储备液进行检测，照液相色谱条件分别于0、2、6、12、24 h进行测定，RSD为0. 33%，表明青蒿素在2 h内基本稳定。2.3.4检测限和定量限测定精密量取“2.2”项下对照品溶液适量，加流动相定量稀释，照液相色谱条件测定，按信噪比S/N=3计算检测限为41.66 ng，S/N=10计算定量限为137ng2.3.5重复性试验 取复方磷酸萘酚喹片（批号：131A2规格为125 mg）按照溶出度测定法，于45 min取样测定，同法平行测定3次（n=18）；青蒿素溶出平均值为79. 31%，RSD%为1. 99%，表明本方法重现性良好。2.3.6耐用性试验取样品溶液，分别采用不同比例的流动相、不同规格的色谱柱、不同柱温进行测定，结果表明该方法耐用性良好。2.3.7 回收率试验按溶出度测定法，于45 min取样作为供试品贮备液；分别取一定量供试品贮备液，加入对照品溶液制成80%、l00%、120%的供试品溶液各3份，照液相测定方法测定，平均回收率为100. 83%，RSD%为1.74%，表明该方法的回收率良好。结果见表2。2.4.1溶出条件溶出方法浆法；溶出介质：为0. 5%十二烷基硫酸钠水溶液；转速：lOOr/min；温度：37℃2.4.2溶出曲线参考文献资料[4-6]和现行标准，我们采用4种不同pH值的溶出介质（pH值分别为1.2、4.0、6.8和水，分别添加表面活性剂），对样品进行了溶出曲线考察（规格为125 mg样品溶出介质为500 mL，规格为250 mg样品溶出介质为1000 mL），取样时间为5、10、30、45、60、90、120 min，以溶出时间为横坐标，以溶出量为纵坐标，绘制溶出曲线（见图2），确定了最终的溶出条件和限度。3讨论

1.经试验证明该法简便、快速、灵敏度高、结果准确，两种规格均可使用该方法测定，并且可以普遍用于青蒿索类复方制剂溶出度测定，6批样品的溶出量均在70%以上，故溶出限度应定为标示量的70%。

2.药物溶出度能区分同一制剂生物利用度的差异，是口前较能反应药物体内外相关性的体外测试项日，对于控制药物质量保证药物的有效性有重要意义。由于复方磷酸萘酚喹片为我国独创品种，尚未进行生物利用度方面的考察，无法获得与生物利用度相关的标准溶出曲线及参比制剂，我们采用参考文献中使用的4种不同pH值的溶出介质来进行溶出曲线考察，青蒿素组份在四种介质中溶出行为均符合难溶性药物的溶出规律，比较四种介质的溶出曲线，最后选择了溶出相对较快及区分力较好的0. 5%十二烷基硫酸钠水溶液作为最终的溶出介质。参考文献：[1]卫生部.中国药典[M].北京：化工出版社，2001.[2]国家食品药品监督管理局药品标准WS- 772（X- 617）- 2001.[3]国家食品药品监督管理局药品标准YBH00312007.[4]李慧义，闫研，等.HPLC法测定青蒿素哌喹片中青蒿素的溶出度殷果[J].药物分析杂志，2014.（2）：[5]张启明，谢沐风.采用多条溶出曲线评价口服固体制剂的内在质量[J].中国医药工业杂志，2009，40（12）.[6]日本医疗用医药品品质情报集（日本参比制剂目录、橙皮书）

（收稿日期：2014-12-15）