益气化瘀方干预子宫复旧不全大鼠激素水平的研究

曾晶，谈珍瑜*，汤洁，付水冰（湖南中医药大学第一附属医院，湖南长沙410007）

益气化瘀方干预子宫复旧不全大鼠激素水平的研究

曾晶，谈珍瑜*，汤洁，付水冰
（湖南中医药大学第一附属医院，湖南长沙410007）

目的研究益气化瘀方对产后子宫复旧不全大鼠血清中催乳素（PRL）、雌二醇（E2）、孕酮（P）的影响，探讨其部分作用机制。方法选取50只SD级妊娠后雌性大鼠，抽取10只为空白组，其余40只给予大肠杆菌阴道内注射制备子宫复旧不全模型，造模成功后随机分为模型组、新生化组、益气化瘀方低剂量组（下称益气低组）和高剂量组（下称益气高组）。各组分别给药7 d，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定大鼠血清中E2、P、PRL的含量。结果与模型组比较，益气低组、益气高组和新生化组能明显升高E2、P水平（P＜0.01或P＜0.05），益气高组与新生化组差异无统计学意义（P＞0.05），益气低组低于新生化组（P＜0.01）；益气低组、益气高组和新生化组均能提高PRL水平（P＜0.01），且益气高组优于新生化组（P＜0.01）。结论益气化瘀方能调节血清E2、P同步增长，促进子宫内膜增生修复；升高PRL水平，抑制产后不良情绪产生，加强子宫收缩，促进产后子宫复旧，并且益气高组疗效显著。

子宫复旧不全；益气化瘀方；催乳素；雌二醇；孕酮

〔Abstract〕Objective To study of Yiqi Huayu Prescription on PRL，E2and P in subinvolution of uterus rat models rats and to explore the pathological mechanisms.Methods 50 SD female rats after pregnancy were selected.10 rats were as the blank group and other 40 rats were injected Escherichia coli into vagina to build subinvolution of uterus rat models. After modeling，the rats were randomly divided into model group，Xinshenghua group and low-dose of Yiqi Huayu group （LYQHY group）and high-dose of Yiqi Huayu group（HYQHY group）.Every group was given drugs for 7 days，the contents of E2，P and PRL were respectively detected by ELISA.Results Compared with model group，the contents of E2and P significantly increased in LYQHY group，HYQHY group and Xinshenghua group（P＜0.01 or P＜0.05），there was no statistical significance between HYQHY group and Xinshenghua group（P＞0.05），LYQHY group was lower than Xinshenghua group（P＜0.01）；LYQHY，HYQHY and Xinshenghua groups could also elevate levels of PRL（P＜0.01），and the HYQHY group better than the Xinshenghua group（P＜0.01）.Conclusion The Yiqi Huayu Prescription could regulate the serum E2and P to promote the repair of endometrial hyperplasia；increase the level of PRL to inhibit the postnatal negative emotions，enhance uterine contraction and promote the involution of uterus.The HYQHY group showed a more significant curative effect.

〔Keywords〕subinvolution of uterus；Yiqi Huayu Prescription；prolactin；estradiol；progesterone

产后子宫复旧是内膜修复和血管再生的过程，受甾体激素及其受体、细胞凋亡、血管活性因子等诸多因素共同调控。根据产后出血、腹痛的病证特点，中医认为其病机为气虚血瘀。本研究通过构建子宫复旧不全大鼠动物模型，检测益气化瘀方干预后的大鼠血清中雌二醇（estradiol，E2）、孕酮（progesterone，P）、催乳素（prolactin，PRL）水平，挖掘其在产后子宫复旧中的可能作用机制，现报道如下。

1　实验材料及方法

1.1实验材料

1.1.1研究对象清洁级SD雌性大鼠50只，雄性大鼠20只（湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK（湘）2011-0003，体质量（200±8）g，鼠龄小于3月，饲养于SPF实验室。

1.1.2实验药物益气化瘀方（党参、蒲黄、黄芪、马鞭草、茜草、鹿衔草、狗脊、续断、乌药、甘草），成人临床日用量为：52 g/d。大鼠按照体表面积计算：低剂量组相当于临床用量（52×0.018/0.2=4.68 g/kg），高剂量组（9.36 g/kg）用量相当于临床用量2倍。湖南中医药大学第一附属医院药剂科提供。新生化颗粒：云南白药集团股份有限公司生产，临床用量24 g/d，相当于大鼠用量（24×0.018/0.2=2.16 g/kg）。生产批号：ZLB1304。

1.1.3主要仪器MK3型酶标仪，热电（上海）仪器有限公司；LEICA DMLB2型双目显微镜，德国LEICA公司；Shandon325型石蜡切片机，英国Shandon公司；MIAS医学图像分析系统，北航公司。

1.1.4主要试剂大鼠雌二醇ELISA试剂盒（DRE20698）、大鼠孕酮ELISA试剂盒（DRE20697）、大鼠催乳素ELISA试剂盒（DRE20788）均购于武汉贝茵莱生物科技有限公司，批号为：201405。

1.1.5细菌菌种致病性大肠杆菌（X25922），临床分离菌，由湖南中医药大学微生物研究室提供。

1.2实验方法

1.2.1模型建立大鼠常规喂养1周后，晚20∶00将雌、雄鼠以2∶1的比例合笼，第2日清晨阴道口找阴道栓。如发现阴道栓确定妊娠第1天。若未见阴道栓，则取阴道冲洗液涂片，显微镜下找精子，明确看到精子确认为妊娠第1天。妊娠后，大鼠分笼饲养待其自然分娩。分娩后第1天，将培养后的大肠杆菌稀释成1.0×107个/mL后，进行宫腔内接种，每只大鼠接种量为0.2 mL［1］。接种后大鼠子宫HE染色结果示：模型大鼠有炎性细胞浸润，间质疏松水肿，部分上皮细胞坏死脱落，内膜连续性部分中断，内膜下小血管扩张、充血、出血，提示造模成功。

1.2.2分组及给药除10只雌鼠分为空白组，其余40只造模成功后大鼠随机分为模型组、新生化组（2.16 g/kg）、益气化瘀方低剂量组（4.68 g/kg，下称益气低组）、益气化瘀方高剂量组（9.36 g/kg，下称益气高组），每组10只。造模后第1天开始各组每天分别灌胃给药1次，灌胃体积为8 mL/（kg·d），连续7 d。模型组和空白组灌胃白开水8 mL/（kg·d）。

1.3指标检测

1.3.1HE染色观察子宫内膜形态各组动物于末次灌胃后2 h用20%乌拉坦腹腔注射麻醉，腹主动脉采血后，大鼠死亡。取出单侧子宫长约2 cm，福尔马林（4%）固定24 h，乙醇依次脱水，二甲苯透明，软蜡中浸泡，石蜡包埋，冷冻12 h后，连续冠状切片（4 mm），常规HE染色，封片，光镜下观察子宫形态学变化，照相。

1.3.2ELISA法检测血清中E2、P、PRL的含量腹主动脉采血，室温下静置60 min，离心10 min，留取上层血清，在湖南中医药大学病理实验室采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定E2、P、PRL。

1.4统计学分析

2　结果

2.1各组大鼠子宫内膜形态

空白组大鼠子宫内膜上皮细胞轻度脱落，偶见内膜连续性部分中断，腺体数目少；模型组与空白组对照，有炎性细胞浸润，间质疏松水肿，部分上皮细胞坏死脱落，内膜连续性部分中断，内膜下小血管扩张、充血、出血；新生化组及益气高组内膜上皮损伤较轻，少见炎细胞，内膜连续性好，腺体数目多，血管未见明显扩张，间质较致密，宫腔中渗液不明显；益气低组上皮损伤介于模型组与益气化瘀高剂量组之间。具体见图1（72页彩图）。

2.2各组大鼠血清中E2、P、PRL含量的比较

模型组产后子宫复旧不全大鼠血清中E2、P、PRL含量与空白组比较均降低，差异有显著统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较：益气低组、益气高组和新生化组能明显升高E2、P水平（P＜0.01或P＜0.05），益气高组与新生化组差异无统计学意义（P＞0.05），益气低组低于新生化组（P＜0.01）；益气低组、益气高组和新生化组均能提高PRL水平（P＜0.01），且益气低组与新生化组差异无统计学意义（P＞0.05），益气高组优于新生化组（P＜0.01）。见表1。

3　讨论

产后子宫复旧是个多因素调控的过程，大约需要6周时间，子宫收缩、内膜增生，血管修复贯穿始终，甾体激素及其受体、血管活性物质、炎症因子等共同调控这一过程。子宫肌层的收缩受多种因素调控，如卵巢激素、金属钙离子、前列腺素、催乳素、降钙素基因相关肽、松弛素等，其中以雌激素、孕激素最为明显［2-4］。临床研究发现，阴道分娩、健康教育、母乳喂养、产后恢复治疗可促进产后子宫复旧［5］。田敏等［6］研究发现产后抑郁症与血清E2、P、PRL水平变化的相关性，发现产后体内激素水平的急剧变化容易导致产后抑郁症的发生，产后情绪变化可能影响产后子宫复旧。分娩后，体内雌激素、孕激素水平迅速下降，子宫内膜需要通过增生得以修复，进而达到止血的目的。阴道分娩时孕妇处于应激状态，体内一种能产生愉悦情绪的神经递质5-羟色胺分泌增多，刺激PRL和催产素分泌。增多的催产素进一步刺激PRL的释放，同时与子宫受体结合，前列腺素水平升高，进而诱发子宫收缩和乳汁分泌，促进产后子宫复旧［7］。妇女在妊娠晚期E2水平最高，整个孕期P处于高水平。分娩后，E2、P水平急速下降。迅速下降的雌激素刺激脑内多巴胺D2受体呈超敏状态，提高多巴胺转运蛋白表达，导致抑郁等负面情绪的产生和行为异常改变。孕激素水平的下降，抑制兴奋性神经递质，影响高级神经中枢活动，最终导致抑郁症的发生。产后PRL的变化可能是产后抑郁的病因之一［8］。PRL促进乳腺发育生长，引起并维持泌乳，在子宫复旧中对PRL的研究较少，因而，我们研究的目的是探讨在子宫内膜炎导致产后子宫复旧不全大鼠模型中，益气化瘀方是否通过调节E2、P、PRL的水平达到促进子宫复旧的目的，推测其可能的调节机制。

表1　各组大鼠血清中E2、P、PRL含量的比较（n=10，±s）

表1　各组大鼠血清中E2、P、PRL含量的比较（n=10，±s）

注：与空白组比较**P＜0.01；与模型组比较★P＜0.05，★★P＜0.01；与新生化组比较●●P＜0.01。

组别空白组模型组新生化组益气低组益气高组给药剂量（g/kg）——2.16 4.68 9.36 E2（ng/L）48.80±4.79 34.65±3.58** 46.72±6.46★★38.22±3.32★●●49.45±3.55★★P（pmol/L）1 370.20±76.69 806.40±73.52** 1 349.85±157.95★★1 069.88±87.88★★●●1 387.83±111.15★★PRL（pg/mL）674.73±48.68 398.25±48.22** 587.39±53.96★★615.52±80.59★★699.87±61.19★★●●

产后子宫复旧不全主要是因产耗损和产后失摄，病机主要是气虚失摄，瘀阻冲任、血不循经，治疗应补气摄血，佐以化瘀止血。益气化瘀方以生化汤方为基础加减而成，此方益气和化瘀并重。益气可促进内膜修复而扶正，化瘀促进胶原降解、细胞凋亡而祛邪。方中以党参补中益气，生津和胃、蒲黄活血化瘀止血为君。蒲黄为妇科止血化瘀良药，有止血而不留瘀的特点，用于产后恶露不绝。二药配伍，补中有行，行中有止。方中以黄芪、马鞭草、茜草为臣。黄芪大补元气，与党参相须配对，一走一守，补气之力倍增。马鞭草，活血散瘀，破血通经，茜草既能凉血止血，又能活血行血，祛瘀血生新。马鞭草、茜草与蒲黄为伍，相辅相成，相得益彰，于出血而兼瘀阻者尤宜。三药合用益气化瘀止血。方中以狗脊、鹿衔草、续断、台乌药为佐。产后损伤胞宫脉络，伤及肝肾。狗脊能补肝肾，强腰膝，祛风湿，温补固摄。鹿街草补肝肾、强筋骨，能收敛止血，为止血之良药。续断能补肝肾，强筋骨，续折伤，止崩漏。三药合用，既能补肝肾强筋骨，又能收续伤止血。台乌药通理上下诸气，治疗少腹血海疼痛。四药合用能达到抗菌止血镇痛的作用。方中以甘草和中调药为使。

本研究证实：益气化瘀方可能通过调节雌孕激素同步发展，促进内膜迅速增生，修复剥脱的子宫内膜创面止血。同时，益气化瘀方还能增加催乳素分泌，抑制产后抑郁情绪的产生，促进产妇情志的调畅，加强子宫收缩，促进产后子宫复旧，为临床研究提供了部分实验依据。

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（本文编辑匡静之）

Effect of Yiqi Huayu Prescription on Hormone Levels in Subinvolution of Uterus Rat Models

ZENG Jing，TAN Genyu*，TANG Jie，FU Shuibing
（The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，Hunan 410007，China）

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-070X.2015.02.004.011.03

2014-11-21

国家自然科学青年基金项目资助（81202848）；湖南省自然科学基金项目资助（14JJ3121）。

曾晶，女，主治医师，主要从事中西医结合妇产科疾病研究工作。

*谈珍瑜，女，教授，硕士研究生导师，E-mial：2350591364@qq.com。