趋化因子受体7联合CT诊断膀胱移行细胞癌淋巴结转移

谢文杰，祖雄兵，陈金波，崔宇，唐云华，李超，刘龙飞

（中南大学湘雅医院 泌尿外科，湖南 长沙 410008）

·临床论著·

趋化因子受体7联合CT诊断膀胱移行细胞癌淋巴结转移

谢文杰，祖雄兵，陈金波，崔宇，唐云华，李超，刘龙飞

（中南大学湘雅医院 泌尿外科，湖南 长沙 410008）

目的研究膀胱移行细胞癌（BTCC）中趋化因子受体7（CCR7）的表达，并联合CT诊断淋巴结转移。方法研究该院行根治性膀胱全切+盆腔淋巴结清扫的115例病例，术前行泌尿系及盆腔CT扫描，膀胱癌组织标本行CCR7免疫组织化学染色并记录盆腔淋巴结转移情况。运用统计学方法分析CCR7的表达与淋巴结转移的关系，并比较分析CCR7、CT及CCR7联合CT诊断膀胱癌淋巴结转移的敏感性、特异性和精确度。结果BTCC组织中的CCR7表达与淋巴结转移相关（P＜0.05）。多因素分析显示CCR7的表达是膀胱癌淋巴结转移的独立影响因子（P＜0.05）。采用CT诊断淋巴结转移的敏感性、特异性和精确度分别为52.4%、79.5%及69.6%，而CCR7联合CT诊断淋巴结转移的敏感性、特异性和精确度分别为92.3%、83.6%及70.0%。结论CCR7是膀胱癌淋巴结转移的独立影响因子，CCR7联合CT可提高CT诊断淋巴结转移的敏感性。

CCR7；膀胱癌；CT；淋巴结转移

膀胱移行细胞癌（bladder transitional cell carcinoma，BTCC）是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，是当前泌尿外科医师面临的一大难题［1］。研究表明，淋巴结转移是影响膀胱癌患者预后的重要因素之一［2］。临床上螺旋CT扫描广泛应用于膀胱癌淋巴结转移的诊断，但其敏感性并不令人满意［3］。研究表明，血管内皮生长因子C（VEGF-C）联合CT可提高诊断膀胱癌淋巴结转移的敏感性［4］。肿瘤趋化因子及其受体家族在肿瘤转移方面有重要作用。趋化因子受体7（CCR7）广泛表达于肺癌、胃癌、乳腺癌等组织中，并与淋巴结转移有重要关系［5］。本文通过免疫组织化学方法检测BTCC组织中CCR7的表达，探讨其是否能作为膀胱癌淋巴结转移的独立预测因子，并探讨CCR7联合CT诊断能否提高CT诊断淋巴结转移的敏感性。

1　资料与方法

1.1研究对象

选取中南大学湘雅医院2009年1月-2012年12月住院行膀胱癌根治+盆腔淋巴结清扫术的115例BTCC组织，均经病理证实。其中男62例，女53例；年龄40～78岁，平均61.5岁。所有患者术前均行泌尿系及盆腔CT扫描。膀胱肿瘤组织病理学分级采用WHO分级法：Ⅰ级14例，Ⅱ级42例，Ⅲ级59例。临床分期采用UICC-TNM分期法：T1期7例，T2期26例，T3期58例，T4期24例。

1.2方法

将收集的115例膀胱移行细胞癌组织石蜡标本采用免疫组织化学染色法检测CCR7的表达情况。分析术前CT判断淋巴结转移情况，并记录手术清扫的阳性淋巴结位置及数目。淋巴结清扫范围如下：78例标准盆腔淋巴结清扫（上界为双侧髂总动脉分叉，下界为Cooper韧带、股管人口处，外侧界至生殖股神经，内侧界达膀胱壁，包括双侧髂内、髂外以及闭孔淋巴结）。37例因术前和术中评估疑淋巴结转移可能，故行扩大淋巴结清扫（包括双侧盆腔髂血管周围淋巴结、双侧髂总血管周围淋巴结、骶前淋巴结、腹主动脉和下腔静脉周围淋巴结）。

免疫组织化学采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连结SP（中山金桥生物公司，编号SP-9000）一步法进行，兔抗人CCR7多克隆抗体（美国Abcam公司，编号ab32527）1∶200稀释作为一抗，PBS代替一抗作为阴性对照，已知乳腺癌组织切片染色作为阳性对照，按试剂盒说明书相关步骤操作，具体如下:①石蜡切片:收集的石蜡标本4μm连续切片，于65℃烤箱中烘烤30 min；②脱蜡水化:二甲苯I与二甲苯II依次脱蜡20 min，梯度酒精水化（100%乙醇5 min→95%乙醇5 min→80%乙醇5 min→70%乙醇5 min），PBS冲洗5 min×3次；③抗原热修复：将切片放入0.01 M枸椽酸缓冲液（pH 6.0）中95℃加热15 min，自然冷却至40℃，PBS冲洗5 min×3次；④灭活内源性过氧化物酶:加入适量的3%过氧化氢，室温孵育20 min，PBS冲洗5 min×3次；⑤加入正常山羊血清工作液封闭，室温孵育10 min，弃去多余液体；⑥滴加稀释后的兔抗人CCR7多克隆抗体，40℃孵育过夜，PBS冲洗5 min×3次；⑦滴加生物素标记羊抗兔IgG，室温孵育40 min，PBS冲洗5 min×3次；⑧滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，室温孵育40min，PBS冲洗5min×3次；⑨DAB显色，显微镜下控制反应时间，自来水洗终止显色过程；⑩苏木素复染，自来水冲洗，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片；11显微镜下观察。

1.3结果判定

免疫组织化学结果由2位独立的病理医生（无相关样本临床资料的信息）分析，出现结果不一致时重新判片，直至达成一致意见。在高倍镜下随机观察3个视野，计数细胞总数，观察结果采用二维半定量方法进行，即综合考虑肿瘤细胞的染色阳性率和染色强度。染色阳性率的评分标准为:0分，无染色阳性细胞；1分，＜10%染色阳性细胞；2分，10% ～50%染色阳性细胞；3分，＞50%染色阳性细胞。染色强度评分标准:0分，无着色；1分，轻度着色（略强于阴性对照）；2分，中度着色（1～3分）；3分，重度着色（相当于或强于阳性对照）。将两者评分相加后作为评定标准:0～1为Ⅰ，2为Ⅱ，3～4为Ⅲ，4～6为Ⅳ。

所有患者术前均行泌尿系及盆腔64位多层螺旋CT（德国西门子Somatom）扫描。扫描层厚为5mm。115例患者的CT片均通过电子系统调阅，并由2位独立的泌尿外科医师和放射科医生完成，阅片评估前均不知晓患者淋巴结的病理结果。盆腔淋巴结＞10 mm作为阳性转移淋巴结的评判标准。

1.4统计学方法

采用SPSS 13.0统计软件进行数据处理，计数资料用χ2检验，等级资料用秩和检验（Mann-Whitney U test），单因素分析用四格表计数分析，多因素分析用二分类Logistic回归分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1BTCC组织中CCR7的表达与淋巴结转移的关系

115例BTCC患者中，术后病理证实淋巴结癌转移阳性者为42例，淋巴结阴性者为73例。淋巴结阳性组中，CCR7的表达Ⅰ级0例，Ⅱ级5例，Ⅲ级14例，Ⅳ级23例。而淋巴结阴性组中，CCR7的表达Ⅰ级15例，Ⅱ级36例，Ⅲ级22例，IV级为0例。两组间差异有统计学意义（P＜0.05），CCR7的表达与淋巴结转移相关。见表1。

表1　BTCC组织中CCR7的表达与淋巴结转移的关系

2.2BTCC组织中CCR7的表达是淋巴结转移的独立影响因子

单因素分析显示，在115例BTCC患者中，年龄、性别、肿瘤分期、分级、肿瘤大小、发病次数等6个临床参数，仅肿瘤分期、分级与CCR7蛋白表达的阳性率之间差异有统计学意义（P＜0.05），其他3项临床参数与CCR7蛋白的表达并未发现明显的相关性（P＞0.05）。多因素分析显示，仅CCR7蛋白表达为淋巴结转移发生的独立影响因子（P＜0.001，＾OR= 2.93），CCR7蛋白高表达组发生淋巴结转移的风险约为低表达组的3倍。见表2。

表2　淋巴结转移与各临床参数的单因素和多因素分析

2.3CCR7联合CT诊断BTCC淋巴结转移可提高CT诊断的敏感性

将CCR7的表达分为2组，Ⅰ、Ⅱ为低表达组阴性（-），Ⅲ、Ⅳ为高表达组阳性（+）。CCR7和淋巴结转移均（+）的有37例，CCR7（+）而淋巴结转移（-）的有22例，CCR7（-）和淋巴结转移均（-）的有51例，CCR7（-）而淋巴结转移（+）的有5例。CCR7单独评估淋巴结转移的敏感性、特异性和精确度分别为88.1%、69.9%及76.5%。115例患者中，CT诊断淋巴结阳性的有37例，阳性率为32.2%（37/115）。其中，CT评估与淋巴结均（+）的有22例，CT（+）而淋巴结转移（-）的有15例，CT与淋巴结均（-）的有58例，CT（-）而淋巴结转移（+）的有20例。CT单独评估淋巴结转移的敏感性、特异性和精确度分别为52.4%、79.5%及69.6%。当CCR7联合CT诊断淋巴结转移时，敏感性、特异性和精确度分别为92.3%、83.6%及70.0%（100/115），见表3。

表3　CCR7、CT及CCR7联合CT诊断淋巴结转移的敏感性、特异性和精确度

3　讨论

膀胱癌是最见的泌尿系统肿瘤，其发病率和死亡率均较高。据统计，2012年美国新发膀胱癌患者73 510例，病死人数达14 880例［6］。膀胱癌具有反复复发、局部浸润以及远处转移的生物学特征，如何监测以及抑制膀胱癌转移，是目前膀胱癌研究的重点之一。研究表明，淋巴结转移是影响膀胱癌预后的重要因素，出现淋巴结转移的膀胱癌患者往往预后不佳［7］。

趋化因子及其受体家族在肿瘤的发生、发展和转移中起着重要作用。趋化因子受体7既往认为是孤儿受体，近期研究发现其配体为CCL12和CCL19。目前发现在许多癌组织中，如乳腺癌、食道癌、胃癌、胰腺癌等均有较高表达［8］。并且高表达的CCR7是影响这些肿瘤淋巴结转移的一项独立影响因素［9］。YATES等［10］发现膀胱癌细胞中的CCR7表达促进癌细胞的增殖和侵袭的信号转导通路。国内学者侯恺林等［11］也发现，CCR7蛋白高表达与膀胱移行细胞癌的恶性程度及预后相关。本研究发现，淋巴结阳性组与阴性组的CCR7表达差异存在统计学意义（P＜0.05），证实CCR7的表达与盆腔淋巴结转移相关。对淋巴结转移的单因素分析显示，肿瘤病理分级、临床分期及CCR7蛋白表达是淋巴结转移的影响因素。进一步多因素回归分析显示，CCR7的表达是膀胱癌淋巴结转移的一项独立影响因子（P＜0.05，＾OR= 2.93），CCR7蛋白高表达组发生淋巴结转移的风险约为低表达组的3倍。由此推测可能是CCR7蛋白的高表达对肿瘤的分期与分级产生一定的影响，从而进一步影响淋巴结的阳性率。

CT扫描是诊断膀胱癌和评估分期的重要手段，然而其敏感性并不令人满意。FICARRA等［12］研究发现，45例淋巴结阳性的膀胱癌患者，术前CT只诊断出了19例，敏感性为42.25%。一般认为CT显示，直径至少＞0.5 cm的淋巴结才考虑是阳性转移淋巴结可能。本研究中，CT单独评估淋巴结转移的敏感性、特异性和精确度分别为52.4%、79.5%及69.6%，说明CT诊断淋巴结转移的局限性，如何提高其诊断的敏感性尤为重要。CCR7单独诊断淋巴结转移时，敏感性、特异性和精确度分别为88.1%、69.9%及76.5%。CCR7诊断的敏感性高于CT，但特异性偏低。当CCR7联合CT诊断淋巴结转移时，敏感性、特异性和精确度分别为92.3%、83.6%及70.0%。因此，CCR7联合CT诊断膀胱癌淋巴结转移可提高其敏感性，弥补CT的不足。

CCR7是膀胱癌淋巴结转移的独立影响因子，是预测淋巴结转移的可靠指标。CCR7联合CT诊断淋巴结转移能提高CT诊断的敏感性，则可对盆腔淋巴结的清扫范围提供更详细的评估，同时对患者术后的化疗也可能有一定的参考价值。

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［12］FICARRA V，DALPIAZ O，ALRABI N，et al.Correlation between clinical and pathological staging in a series of radical cystectomies for bladder carcinoma［J］.BJU Int，2005，95（6）:786 -790.

（张西倩 编辑）

Chemokine receptor CCR7 as a predictive biomarker associated with computed tomography in diagnosing lymph node metastasis of bladder carcinoma

Wen-jie XIE，Xiong-bing ZU，Jin-bo CHEN，Yu CUI，Yun-hua TANG，Chao LI，Long-fei LIU
（Department of Urology，Xiangya Hospital，Central South University，Changsha，Hunan 410008，P.R.China）

【Objective】To determine whether chemokine receptor CCR7 expression combined with computed tomography（CT）has a relationship with lymph node metastasis in bladder transitional cell carcinoma （BTCC）.【Methods】Totally 115 BTCC cases were studied in our department.Preoperative CT scans of abdomen and pelvis，CCR7 immunohistochemical expression in tumor specimens and pathological findings for lymph node metastasis were assessed.The sensitivity，specificity and accuracy of CCR7，CT and their combination in diagnosis of lymph node metastasis of BTCC were evaluated.【Results】The CCR7 expression in BTCC was correlated with lymph node metastasis（P＜0.05）.Multivariate analysis indicated that CCR7 expression was an independent predictor for lymph node metastasis in BTCC（P＜0.05）.The sensitivity，specificity and accuracy of CCR7 combined with CT scan in the diagnosis of lymph node metastasis of BTCC were 92.3%，83.6%and 70.0%，respectively；those of CT alone were 52.4%，79.5%and 69.6%，respectively. 【Conclusions】CCR7 is an independent indicator for lymph node metastasis of BTCC.CCR7 combined with CT can improve the sensitivity of CT in diagnosing lymph node metastasis in BTCC.

CCR7；bladder carcinoma；computed tomography；lymph node metastasis

R737.14

A

1005-8982（2015）33-0032-04

2015-05-24

祖雄兵，E-mail：whzuxb@163.com