化学法、单克隆抗体法和联合免疫法检测便隐血的临床比较

杨芳

化学法、单克隆抗体法和联合免疫法检测便隐血的临床比较

杨芳

目的 对比化学法、单克隆抗体法和联合免疫法检测便隐血的临床效果。方法 选取大便标本90例，采用化学法、单克隆抗体法和联合免疫法3种试验方法，对其进行便隐血检测。结果 化学法、单克隆抗体法和联合免疫法3种方式检测出血红蛋白的最低检出率分别为2、0.2、0.2mg/ L；化学法对人和动物的血红蛋白可发生反应，联合免疫法和单克隆抗体仅和人的血红蛋白发生反应；维生素C浓度超过10g/L可引起化学法的阴性结果，而对联合免疫法和单克隆抗体的检测无影响。化学法、单克隆抗体法和联合免疫法3种不同的检测方法检测上消化道出血组的阳性率分别为95.2%、72.1%、91.2%，检测下消化道出血组的阳性率分别为75.6%、96.8%、100%；检测正常组的阳性率分别为10.5%、3.2%、6.8%。结论 化学法、单克隆抗体法和联合免疫法3种检测方法相互结合、相互补充，有助于提高消化道出血性疾病的检出率，为临床提供更加精确的结果。

化学法；单克隆抗体法；联合免疫法；便隐血

临床上，便隐血主要是检测消化道出血的常规诊断指标，同时也是消化道恶性肿瘤早期诊断的重要筛查指标。随着医疗技术的快速发展，化学法、单克隆抗体法和联合免疫法检测便隐血具有显著的临床效果。其中，化学法以匹拉米洞法为主要检测方法，但极易受到食物和药物的影响，发生阳性反应。而单克隆抗体法虽不受食物影响，但血红蛋白极易产生变性，发生假阴性反应[1]。联合免疫法则不受食物和药物影响，对便隐血的检测拥有良好的应用价值。对此，为了对比分析化学法、单克隆抗体法和联合免疫法检测便隐血的临床效果，现选取大便标本90例作为研究对象。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取河南省商丘市第一人民医院2013年5月～2014年5月收治的大便标本90例作为研究对象，其中，以50例大便标本未诊断出任何消化道疾病，将其设为对照组，22例诊断为上消化道出血，记为上消化道出血组，18例诊断为下消化道出血，记为下消化道出血组；血红蛋白由正常人血液制成，以猪、鸡、鸭等动物血液制成浓度不同的血红蛋白和维生素C。其中，前者用于灵敏性试验，后者用于干扰性试验。

1.2 方法 采用化学法、单克隆抗体法和联合免疫法3种试验方法，分别对90例大便标本其进行便隐血检测。

1.2.1 检验方法 化学法主要以匹拉米洞为主，采用BASO公司生产的试剂进行检测，一旦发生阳性反应，则会呈现紫红色。单克隆抗体法则采用宜百康生物科技股份有限公司提供的便隐血单克隆抗体试剂盒，根据说明书的步骤进行检测，5min后，若出现2条紫红色条带，则为阳性，如果出现1条则为阴性。联合免疫法则采用宜百康生物科技股份有限公司提供联合免疫法诊断试纸，其操作同样严格按照说明书进行。

1.2.2 实验方法

（1）灵敏度实验方法。取正常人血液制成血红蛋白，利用蒸馏水，将其稀释成为血红蛋白2000、1000、500μg/mL等不同浓度的血红蛋白混合液，分别利用化学法、单克隆抗体法和联合免疫法3种检测方法进行检测，

（2）干扰性实验方法。取鸡、鸭、猪等集中动物全血，将其制成1000、200、20mg/L等浓度的血红蛋白混合液，分别将50、25、20、10、7.5mg/L等不同浓度的维生素C加入血红蛋白2000、1000、500mg/L等浓度混合液中，利用化学法、单克隆抗体法和联合免疫法3种检测方法进行检测，

1.3 统计学方法 数据均采用统计学软件SPSS18.0处理。正态计量资料采用“x±s”表示；计数资料用例数（n）表示，组间率（%）的比较采用χ2检验；以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3种检测方法检测人体血红蛋白灵敏性比较 联合免疫法灵敏度高0.2mg/L；在250～500mg/L内应比较强；而当浓度大于2000mg/L，反应为阴性。单克隆抗体灵敏度较高时为0.2mg/L；当在250～500mg/L内应比较强；一旦超过2000 mg/L，反应为阴性；而化学法灵敏度为2mg/L，它不受高浓度的影响。因此，免疫法免疫法对微量出血更有诊断价值，但浓度太高可能会引起假阴性，此时，应采取有效措施，对样本进行稀释再进行检测。见表1。

表1 3种检测方法检测人体血红蛋白灵敏性比较

2.2 不同浓度的维生素C浓度对3种检测方法干扰结果对比 当血红蛋白浓度为1g/L，维生素C浓度大于7.5g/L，化学法检测结果为阴性；当血红蛋白浓度为0.5g/L，维生素C浓度大于5g/L，化学法检测结果为阴性；而任何浓度的维生素C对联合免疫法和单克隆抗体法均没有任何干扰性。见表2。

表2 不同浓度的维生素C浓度对3种检测方法干扰结果对比

2.3 3种不同检测方法检测阳性率比较 22例上消化道出血组利用化学法、单克隆抗体法和联合免疫法检测阳性率分别为95.2%、72.1%、91.2%，其中联合免疫法和单克隆抗体法差异有统计学意义（χ2=4.317,P<0.05）。化学法和单克隆抗体法差异有统计学意义（χ2=7.413,P<0.05）；而18例下消化道出血利用化学法、单克隆抗体法和联合免疫法检测阳性率分别为75.6%、96.8%、100%，化学法和单克隆抗体法、化学法与联合免疫法之间差异有统计学意义（χ2=8.043,P<0.05）。而化学法检测正常组的阳性率分别为10.5%，单克隆抗体法3.2%，联合免疫法6.8%。化学法与单克隆抗体差异有统计学意义（χ2=4.888,P<0.05）。

3 讨论

粪便隐血试验作为临床消化道出血常规筛查试验，对慢性消化道出血和消化道肿瘤的诊断，预后观察具有重要价值。尤其在临床上可借助粪便隐血试验，从自然人群中筛查出早期癌或癌前病变[2]。与传统的检测方法相比，其具有诸多便利之处，由于传统的检测方法虽然具有较多的优势，如费用比较低廉、反应比较快速、结果容易判断等[3]，这种方法虽然得到不少医院长期应用，但很容易引起多种因素的干扰，出现假阳性的缺点。随着临床医学的快速发展以及医疗水平的不断进步，联合免疫法与单克隆抗体法成为检测粪便隐血新型方法，得到诸多医院的广泛应用。基于此，化学法、联合免疫法与单克隆抗体法正以其先进且方便快捷的方式逐渐代替了传统的检测方法，为临床医学的发展开辟了新的方向。

通常情况下，单克隆抗体和联合免疫法两种检测便隐血的方法，主要为了检测人体血红蛋白抗原，而联合免疫法除了检测人体血红蛋白抗原外，还检测人转铁蛋白，具有较强的特异性和灵敏性，不会受到食物和药物等因素的影响，基于这种优势，单克隆抗体和联合免疫法两种检测方法均被广泛应用于各个医院中。但也有不足之处，由于免疫学方法具有高度敏感性，当患者正常生理失血时，很容易产生假阳性结果，而单克隆抗体法极易因血红蛋白变性产生假阴性结果。而化学法的基本原理是：血红蛋白中的含铁血黄素部分有催化过氧化物分解的作用，能催化试剂中的过氧化氢，分解释放新生态的氧，氧化上述色原物质而呈色，呈色的深浅反应了血红蛋白的多少。但是化学法的影响因素太多，缺乏准确性和特异性，如食物中含有血红蛋白、肌红蛋白、其血红素的作用均可使结果为阳性，大量生食蔬菜中含有的活性植物过氧化物也可催化过氧化氢分解，结果也为阳性[4]；当抗原抗体比例不当易出现假阴性结果；联合免疫法是检测粪便中人血红蛋白及转铁蛋白的常规方法。转铁蛋白检测消化道出血具有高特异性和不易被细菌分解的特点，克服了血红蛋白因变性产生假阴性的缺点，为检测消化道出血的良好指标。因此，化学法多以匹拉米洞组为代表，其灵敏度比较低[5]。其中，联合免疫法与单克隆抗体法均不受饮食、其他动物血红蛋白、药物、还原性物质的干扰，具有较强的灵敏性和特异度，但由于抗原抗体受许多因素影响导致假阴性结果，又加之它的价格相对较高等多方面因素的影响，因而联合免疫法与单克隆抗体法并不能完全检测取代匹拉米洞法。所以，在实际检测便隐血是否存在的过程中，应根据实际情况，充分结合化学法、单克隆抗体法和联合免疫法3种检测方法，使其相互补充，从而为便隐血的检测提供便利，进而有助于提高消化道出血性疾病的检出率。

本研究结果表明，22例上消化道出血组利用化学法、单克隆抗体法和联合免疫法检测阳性率分别为95.2%、72.1%、91.2%，其中联合免疫法和单克隆抗体法差异有统计学意义（P<0.05）。化学法和单克隆抗体法差异有统计学意义（P<0.05）；而18例下消化道出血利用化学法、单克隆抗体法和联合免疫法检测阳性率分别为75.6%、96.8%、100%，化学法和单克隆抗体法、化学法与联合免疫法之间差异有统计学意义（P<0.05）。而化学法检测正常组的阳性率分别为10.5%，单克隆抗体法3.2%，联合免疫法6.8%。化学法与单克隆抗体差异有统计学意义（P<0.05）。由此可见，3种检测方法各有其独自的适用性[6]，化学法是利用血红蛋白中亚铁血红素有类似过氧化酶的活性，能催化过氧化氢，放出新生态氧，将受体邻甲联苯胺氧化成邻甲偶氮苯而显蓝色。蓝色深浅反映出血最的多少。因此，影响因素很多，基于此，化学法常用匹拉米洞组为主以检测便隐血是否存在，由于具有过氧化物酶特性的食品、维生素C、过氧化物酶、各种动物的肉、血、肝脏富含叶绿素食品等均可对化学法产生干扰，造成假阳性，同时大量生食蔬菜中含有活性的植物过氧化物，也能够刺激试验呈现阳性反应，另外还有一些还原性的药物史，则很容易造成试验呈现现假阴性反应。因此，在利用化学法检验前，应禁食肉类及相关药品及食品3d。单克隆抗体法采用抗人体血红蛋白的单克隆抗体和多克隆抗体，具有一定的特异性。它很难受到动物血红蛋白的干扰，具有较强的准确性，能够及时检测出消化道是否出血。究其原因，这主要是因为单克隆抗体法对猪、羊等动物血红蛋白液检测隐血均为阴性，对食用猪、羊等动物类血红蛋白的粪便隐血进行测。其结果亦为阴性。因此，采用单克隆法检测便隐血更有助于早期发现肿瘤性消化道出血，特别是早期结肠、直肠癌[7]，粪便中带有癌肿的微量出血是早期可以查的唯一异常现象。而免疫法不受动物血红蛋白的干扰，具有高度的特异性和准确性，能确诊消化道是否有出血，对猪、羊等动物血红蛋白液检测隐血均为阴性，对食用猪、羊等动物类血红蛋白的粪便隐血进行测试，其结果也为阴性，但在试验前，不须禁食肉类及其他有过氧化物酶的药品及食品[8]，就能够确认便隐血是否存在，因此，该方法对患者来说更容易接受。

综上所述，化学法快捷方便，但对人和动物的血红蛋白可发生反应，而联合免疫法和单克隆抗体不能和动物的血红蛋白发生反应，仅和人的血红蛋白发生反应；维生素C浓度超过10g/L可引起化学法的阴性结果，但对联合免疫法和单克隆抗体的检测没有任何影响。因此，这两种检测方法值得临床进一步推广应用，然而，考虑到存在后带现象及血红蛋白抗原变性可能会出现假阴性结果。而联合免疫法克服了以上方法的缺点，有利于对消化道出血性疾病早期诊断与筛查。所以，化学法、单克隆抗体法和联合免疫法3种检测方法相互结合和补充，有助于提高消化道出血性疾病的检出率。

Objective To compare the therapeutic effect of chemical method, monoclonal antibody and combined immunoassay for fecal occult blood. Methods 90 cases of fecal specimens were selected admitted in our hospital from May 2013 to May 2014 , using chemical method, monoclonal antibody and combined immunization of three test methods of fecal occult blood testing on it. Results The chemical method, monoclonal antibody method combined with immune method in three ways to detect hemoglobin detection rates were 2, 0.2, 0.2mg/L; hemoglobin chemical method for human and animal could react, combined immunoassay and monoclonal antibody alone and human hemoglobin reacts with negative results; vitamin C concentrations exceeding 10g/L can be caused by chemical method, without influence on the joint detection of immunological method and monoclonal antibodies. The detection of three different detection methods of upper digestive tract hemorrhage group the positive rate were 95.2%, 72.1%, 91.2%, three different methods for the detection of lower digestive tract hemorrhage group the positive rate were 75.6%, 96.8%, 100%; the positive detection rate of normal group of three different detection methods were 10.5%, 3.2%, 6.8%. Conclusion The three methods for detection of chemical method, monoclonal antibody and combined immunization with each other, complement each other, help to improve the detection rate of diseases of digestive tract hemorrhage, provide more accurate results for clinical, worthy of further clinical application.

Chemical method; Monoclonal antibody; Combined immunization; Fecal occult blood

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.7.100

河南 476000 河南省商丘市第一人民医院（杨芳）