罗哌卡因与舒芬太尼对创面愈合的影响

芮睿 程桥 凡浙录

罗哌卡因与舒芬太尼对创面愈合的影响

芮睿 程桥 凡浙录

目的 研究罗哌卡因联合舒芬太尼对小鼠创面愈合的影响。方法 健康SD小鼠128只，体质量20～25 g，应用随机数字表法，将128只小鼠均分为4组（n=32）：空白生理盐水组（NS组），罗哌卡因组（L组），舒芬太尼组（S组），罗哌卡因+舒芬太尼组（L+S组）。于制造创面前10 min，L和L+S组皮下浸润0.5%罗哌卡因1.0 mL/kg，S和L+S组腹腔注射舒芬太尼3.0 μg/kg稀释到1.0 mL。分别于第3、7、10天每组取8只小鼠，观察创面愈合率，ELISA法测定GM-CSF的表达情况，每组另8只小鼠观察完全愈合时间。结果 L+S组愈合率3、7、10天分别为（39.394±1.164）%，（64.144±1.901）%，（83.543±1.120）%高于其他3组，愈合时间（10.250±0.463）d短于其他3组（P＜0.05），粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的含量高于NS组和S组（P＜0.05），但与L组相比无统计学意义。结论 皮下浸润0.5%罗哌卡因和腹腔注射舒芬太尼均可促进创面愈合，联合用药效果优于单独使用。

罗哌卡因；舒芬太尼；创面愈合

目前，常用的镇痛方法包括静脉持续镇痛泵法、局部浸润麻醉法和硬膜外止痛法，而多模式联合镇痛已表现出多种优点。腹部[1]、胸科[2]及骨科[3]手术使用切口局部浸润联合静脉持续镇痛法止痛效果明确，减少术后并发症的发生，减少单一模式镇痛药的使用量，缩短住院时间。0.5%罗哌卡因是一种长效局麻药，切口局部浸润可以促进伤口愈合[4]，舒芬太尼是一种强效阿片类镇痛药，广泛应用于术后镇痛。本课题主要研究罗哌卡因局部浸润联合舒芬太尼全身给药对小鼠伤口愈合的影响及其与粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的关系，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般材料 健康清洁级SD雄性小鼠128只，体质量20～25 g，由山西省肿瘤医院动物中心提供。按照完全随机对照原则，将128只小鼠随机均分为4组（n=32）：空白生理盐水组（NS组），罗哌卡因组（L组），舒芬太尼组（S组），罗哌卡因+舒芬太尼组（L+S组），每只小鼠分笼饲养。

1.2 方法 小鼠称重后，采用0.6%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（0.1 mL/10 g），8.0%硫化钡小鼠背部脱毛，常规消毒后，于小鼠背部脊柱中线近头侧做一个0.8 cm×0.8 cm创面，剪开全层皮肤至皮下深筋膜。NS组于制作创面前10 min皮下浸润0.9%生理盐水1.0 mL/kg，腹腔注射0.9%生理盐水1.0 mL；L组于制作创面前10 min皮下浸润0.50%罗哌卡因1.0 mL/kg，腹腔注射0.9%生理盐水1.0 mL；S组于制作创面前10 min皮下浸润0.9%生理盐水1.0 mL/kg，腹腔注射舒芬太尼3.0 μg/kg稀释到1.0 mL；L+S组于制作前10 min皮下浸润0.5%罗哌卡因1.0 mL/kg，腹腔注射舒芬太尼3.0 μg/kg稀释到1.0 mL。首次给药之后每12小时追加1次，剂量同首次用药。

分别于第3、7、10天，每组随机取8只小鼠，处死后采用透明膜法记录创面面积，计算创面愈合率，创面愈合率=(初始创面面积-各时相点未愈合面积)/初始创面面积×100%[5]。剪取创缘外4 mm包括创面的皮肤组织，清理皮下组织，用液氮处理后捣碎置于-80℃的冰箱中保存，通过ELISA法测定GM-CSF的表达，并且应用BCA蛋白定量法测定总蛋白的含量，计算二者的比值以比较各组标本中GM-CSF的含量[6]。每组剩余的8只小鼠用来观察创面完全愈合时间，将肉眼观察创面完全上皮化作为完全愈合的标准[5]。

1.3 统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件，处理数据，正态计量资料采用“x±s”进行描述，多组间均数比较，采用单因素方差分析，进一步组间比较，应用LSD-t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 创面愈合率 L组、S组和L+S组创面愈合率分别于制造创面第3、7、10天明显高于NS组，并且L+S组高于L组和S组，差异有统计学意义（P＜0.05）;L组和S组比较，差异无统计学意义。见表1。

2.2 愈合时间 L组创面愈合时间比NS组缩短（2.000± 0.000）d，S组创面愈合时间比NS组缩短（1.875±0.330）d，L+S组比L组和S组分别缩短（2.125±0.330）d，（2.250±0.415）d，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 4组愈合时间的比较(x±s，d)

2.3 GM-CSF检测 NS组小鼠制造创面第3天，GMCSF占总蛋白比例达到高峰，第7天较第3天稍下降但仍维持较高水平，第10天明显降低；L组和L+S组分别与NS组和S组对比，变化趋势相同，各时相点GM-CSF占总蛋白比例均升高，差异分别有统计学意义（P＜0.05）；L+S组与L组对比，S组与NS组对比， GM-CSF占总蛋白比例差异无统计学意义。见表3。

表3 4组GM-CSF含量的比较(x±s，/10万)

3 讨论

由本研究结果可以认为腹腔注射舒芬太尼联合创面局部浸润0.5%罗哌卡因可以促进愈合；单纯创面局部浸润0.5%罗哌卡因和单纯腹腔注射芬太尼也可促进伤口愈合，但是没有联合用药明显。L组小鼠愈合加快可能与GM-CSF占总蛋白比例增高有关，而S组加快伤口愈合可能与GM-CSF占总蛋白比例无明显关系。

创面愈合是指某些因素造成皮肤等组织缺损或者断裂后，机体进行修复的一系列病理生理过程。急性创面愈合包含止血期，炎症反应期，细胞增殖期，基质重建期，4个阶段各有特色但又相互协同，是多种细胞，细胞因子及细胞外基质共同参与的复杂的愈复过程。

罗哌卡因一种长效酰胺类局麻药，0.5%罗哌卡因用于局部麻醉可产生良好的镇痛效果[4]。由本研究结果可得，0.5%罗哌卡因创面局部浸润可以加快创面愈合，可能与以下机制有关：（1）罗哌卡因具有抑菌作用，并且表现出浓度依赖性[7]，降低感染机率，促进创面愈合；（2）0.5%罗哌卡因可促进成纤维细胞增殖，胶原生成增多[4]，创面愈合过程中成纤维细胞是主要的修复细胞，由成纤维细胞合成的胶原为表皮细胞爬行提供支架，从而促进愈合；（3）由本研究结果推测0.5%罗哌卡因可促进GM-CSF生成，其在创面愈合过程中发挥重要作用，可以缩短愈合时间。

而GM-CSF在创面愈合4个阶段均产生促进愈合作用：首先止血期，GM-CSF与血小板活化因子联合作用，促进组织因子产生，加快止血过程；炎症期，GM-CSF加强趋化各种炎症细胞浸润，促进其分泌多种细胞因子；增生期，GM-CSF直接刺激成纤维细胞及内皮细胞增殖，加快再上皮化速度；最后塑形期，促进胶原纤维正常沉积，加快愈合。

舒芬太尼是一种强效阿片类的镇痛药，经小鼠热板实验测得iv 舒芬太尼的镇痛ED 50为2.8 μg/kg[8]。本研究结果表明，单纯腹腔注射3.0 μg/kg舒芬太尼组与舒芬太尼联合0.5%罗哌卡因局部浸润均可以加速创面愈合，且舒芬太尼作用与GMCSF无明显关系，可能与以下因素有关：（1）舒芬太尼通过作用于下丘及心脑血管中枢，降低交感神经兴奋性及血浆儿茶酚胺类应激相关激素水平，对应激反应有一定的抑制作用，减轻血糖升高[9]，从而避免应激反应造成的愈合延迟。（2）炎症是机体对创伤等行为的保护反应，但是过度的炎症反应可加剧组织损伤，影响创面修复。各种炎症细胞因子在免疫和炎症反应中发挥重要作用，在神经内分泌系统的调解下，促炎细胞因子和抗炎细胞因子维持一定的平衡，而创伤，疼痛等造成的应激状态时，该平衡被打破。IL-6是一种促炎细胞因子，参与急性期的炎症反应，与伤口愈合有关；IL-10阻断炎症发展过程中的多个环节，抑制急性炎症反应，维持各种细胞因子平衡。舒芬太尼产生有效镇痛，可以延迟IL-6分泌，降低其峰值浓度，促进IL-10分泌，减轻机体过度炎症反应，从而促进创面愈合[10]。（3）有研究表明，人体皮肤局部使用阿片类药物，激活μ受体，促进NO产生，刺激角质形成细胞迁移，可能会促进伤口愈合[11]。另外有研究认为，小鼠皮肤局部应用阿片类镇痛药，通过诱导stat 3表达，降低IL-6和TNF表达，促进肠道粘膜角质细胞迁移，可以促进肠道粘膜愈合[12]。还有研究表示，小鼠腹腔注射吗啡可以刺激TGF-β 1和MMP-2表达显著增加，促进组织胶原沉积，增加切口拉伸强度，加快伤口愈合[13]。

由此可见，3组给药小鼠创面愈合均加快，罗哌卡因联合舒芬太尼组创面愈合最快，效果优于单纯给予0.5%罗哌卡因组和腹腔注射舒芬太尼组。0.5%罗哌卡因局部浸润麻醉促进愈合与GM-CSF增多有关，腹腔注射舒芬太尼促进小鼠创面愈合与GM-CSF无明显关系，可能通过其他机制发挥作用，有待进一步研究确定。

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Objective To study the effect that ropivacaine combined with sufentanil on wound healing in mice. Methods There are 128 health of SD mice, 20-25 G body weight, according to the random number table, 128 mice were divided into 4 groups (n=32): blank Group (NS group) and ropivacaine Group (L group), sufentanil Group (S group), ropivacaine with sufentanil Group (L+S group). Used in manufacture of 10 min,L+S group were subcutaneous injected 0.5% ropicacaine by 1.0 mL/kg, S and L+S groups were abdomainal injected sufentanil solution 1 mL, contains sufentanil 3 μg/kg. Choosing 8 mice in each group at 3, 7 and 10 days after the ops to check its wound healing rate and measure the expression of GM-CSF by the ELlSA method, the 8 left mice in each group were made to check its time of complete healing. Results The healing rate of L+S group that is (39.394±1.164)%, (64.144±1.901)%, (83.543±1.120)% in the 3 th, 7 th and 10 th day of a manufacture wound respectively is higher than the left three groups and the healing time (10.250±0.463)d is also shorter than them (P＜0.05), the expression of GM-CSF is higher than NS group and S group (P＜0.05), but shows no statistical differences with L group. Conclusion Subcutaneous infiltration of 0.5% ropivacaine and intraperitoneal injection of sufentanil may promote the wound healing, combination therapy is better than the alone.

Ropivacaine; Sufentanil; Wound healing

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.8.003

山西 030001 山西医科大学麻醉学系 （芮睿） 山西医科大学第一医院麻醉科（程桥） 山西医科大学麻醉科 （凡浙录）

程桥 E-mail：490676346@qq.com