杨宇萍,杜 晶,邓仙梅,孟 江
(广东药学院中药学院,广东广州510006)
姜及其不同炮制品中姜酚的含量测定
杨宇萍,杜 晶,邓仙梅,孟 江
(广东药学院中药学院,广东广州510006)
目的 比较姜及其不同炮制品中姜酚类成分的含量差异,以揭示不同炮制品的药效变化原理。方法以辣椒碱为对照,姜酚类成分为指标,采用紫外-可见分光光度法测定样品中姜酚类成分的含量。结果 标准曲线方程为Y=0.01X-0.003 2(r2=0.999 4),表明辣椒碱浓度为9.99~119.88 μg/mL时与吸光度呈良好线性关系。精密度试验、稳定性试验、重复性试验及加样回收率试验测试结果的相对标准偏差(RSD)值均小于3.0%。生姜及其炮制品中姜酚含量由高至低依次为:姜炭、炮姜、干姜、生姜。结论 姜不同炮制品的药效变化很可能是因炮制前后姜酚类成分含量变化所引起的,并且,紫外-可见分光光度法准确度高、稳定性良好,可应用于样品中姜酚类成分的含量测定。
生姜; 姜科; 炮制品; 酚类; 分光光度法,紫外线
姜为姜科植物姜(Zingiber officinale Rosc.)的根茎,它作为一味“药食同源”的中药被广泛应用于世界各地。根据中医药理论,中药材经过适当的炮制加工可以起到减毒增效、改变药性,以满足不同临床治疗需要的作用[1-3]。姜的炮制品有干姜、炮姜及姜炭,其因满足了不同疾病的需要而被广泛应用于中医临床。生姜具有散寒发汗、化痰止咳、和胃止呕的作用;主治风寒感冒、呕吐等。干姜具有温中散寒、回阳通脉、温肺化饮的作用;主治脘腹冷痛、呕吐泄泻、肢冷脉微、痰饮喘咳。炮姜具有温经止血、温中止痛的作用;主治阳虚失血、吐衄崩漏、脾胃虚寒、腹痛吐泻。姜炭则有温经止血、温脾止泻的功效;主治虚寒性吐血、便血、崩漏、阳虚泄泻[1,4-5]。现代研究表明,姜的主要有效成分为姜辣素类成分[6],包括6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚、12-姜酚等[7]。且现代药理学研究结果也证实了它们的药效差异。例如,干姜具有很好的温中散寒作用,炮姜具有较好的温经止痛、止泻的功效,而姜炭则具有很好的温经止血作用[8-11]。经炮制后,其药效为何会发生如此变化呢,本文拟通过对姜酚类成分含量进行测定比较,揭示姜在炮制前后药效发生变化的奥秘,为其进一步研究提供理论依据。
1.1 材料
1.1.1 仪器 AY120电子天平(SHAMAOZU CORPOPAITION JAPAN)、HH-6恒温水浴锅(江苏金坛市宏华仪器厂)、GZX-9240 MBE数显鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)、UV-2450紫外分光光度计(日本岛津公司);SHB-Ⅳ双B循环水式多用真空泵 (郑州长城科工贸有限公司)。
1.1.2 药材与试剂 姜样品分别采集于广东、四川,经广东药学院中药资源系刘基柱副教授鉴定为姜科植物姜的根茎。干姜、炮姜、姜炭均是根据《中华人民共和国药典》(2010年版一部)附录药材炮制通则项下烘干法、砂烫法及炒炭法炮制所得。辣椒碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号:A0198);乙醇为分析纯。
1.2 方法
1.2.1 溶液的制备
1.2.1.1 对照品溶液的制备 精密量取辣椒碱对照品10 mg,置于50 mL容量瓶中,加乙醇定容至50 mL得标准品母液,再吸取适量标准品母液加乙醇稀释,制备成浓度为0.199 8 mg/mL的辣椒碱对照品溶液。
1.2.1.2 供试品溶液的制备 按照前期试验优选的干姜中姜辣素(姜酚)的最佳提取工艺[12],称取干姜2 g,精密称定,加入10倍量的80%乙醇回流提取3次,每次60 min,提取液滤过,减压浓缩至干,提取物再加乙醇溶解并定容至100 mL中,即得供试品溶液,备用。
1.2.2 测定波长的选择 将辣椒碱对照品溶液、供试品溶液和空白溶液在200~500 nm进行全波长扫描,结果辣椒碱和供试品溶液在280 nm处均有最大吸收,空白溶液在此波长下无吸收,故确定280 nm为测定波长。
1.2.3 标准曲线的绘制 精密吸取辣椒碱标准液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL于10 mL容量瓶中,用乙醇定容至刻度,测定吸光度,绘制标准曲线。以对照品质量浓度为横坐标(X),吸光度为纵坐标(Y)进行线性回归,得回归方程。
1.2.4 方法学考察
1.2.4.1 精密度试验 精密量取2 mL对照品溶液,加乙醇定容至10 mL,作为供试品溶液。以乙醇作空白,测定吸光度,连续测定6次,计算相对标准偏差(RSD)。
1.2.4.2 稳定性试验 精密称取生姜、干姜、炮姜及姜炭药材粉末2.0 g,按1.2.1.2项下方法制备供试品溶液。以乙醇作空白,测定吸光度,分别于0、10、20、30、40、50、60 min测定吸光度,计算RSD。
1.2.4.3 重复性试验 精密称取生姜、干姜、炮姜及姜炭药材粉末2.0 g,按1.2.1.2项下方法,平行制备6份供试品溶液,按1.2.3项下方法测定吸光度,计算RSD。
1.2.4.4 加样回收率试验 称取已知姜酚含量的干姜药材粉末6份,每份约1 g,精密称定,分别精密加入辣椒碱50 mg,按1.2.1.2项下方法制备各供试品溶液,按1.2.3项下方法测定吸光度,计算RSD。
1.2.5 含量测定 按已优选的最佳工艺条件对不同批次的生姜、干姜、炮姜及姜炭样品进行提取,制备供试品溶液,并按1.2.1.2项下方法测定吸光度,计算含量。
2.1 线性试验 回归方程为 Y=0.01X-0.003 2,r2= 0.999 4,结果表明,辣椒碱在9.99~119.88 μg/mL时与吸光度呈良好线性关系。
2.2 精密度试验 RSD=0.13%,表明仪器精密度良好。
2.3 稳定性试验 生姜、干姜、炮姜及姜炭的RSD值分别为1.54%、0.74%、1.23%、1.68%,均小于2.00%,表明供试液稳定性良好。
2.4 重复性试验 生姜、干姜、炮姜及姜炭的RSD值分别为1.65%、1.80%、1.95%、2.06%,表明该方法的重复性良好。
2.5 加样回收率试验 RSD=2.20%,表明该方法的准确度良好。见表1。
表1 加样回收率试验结果
2.6 含量测定 不同产地样品中姜酚的含量不同,在产于广东揭阳的样品中姜酚含量最高;不同炮制品中姜酚的含量由高至低依次为:姜炭、炮姜、干姜、生姜。见表2。
表2 不同产地的不同炮制品姜酚含量测定结果(mg/g)
中药材必须经过炮制加工成饮片后才能入药,这是中医临床用药的一个特点,也是中医药学的一大特色。中药材经过一定的炮制技术加工处理后可获得减毒增效、改变药性等效果而满足不同疾病临床治疗的需要。干姜、炮姜、姜炭是由生姜经不同炮制工艺加工后所得的3种中药饮片,虽来源相同,但经炮制加工后其原有的强辛散性药性逐渐减弱,而收敛性则逐渐增强,故在临床上彰显出不同药效。本试验测试结果表明,姜的不同炮制品中姜酚类成分含量差异显著,其含量高低依次为姜炭、炮姜、干姜、生姜,这是因不同炮制方法所致。因此,其药效变化很可能是因炮制前后姜酚类成分含量变化所引起。然而,在炮制前后其成分具体发生了什么变化及其变化机制有待进一步研究。
此外,不同产地的姜样品中姜酚类成分含量也有明显差异。本研究结果表明,广东产姜中姜酚含量高于四川。这可能是由于不同地理位置、土壤、气候条件等因素影响所致。
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Content determination of gingerols in ginger and its different processed products
Yang Yuping,Du Jing,Deng Xianmei,Meng Jiang
(School of Chinese Medicine,Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou,Guangdong 510006,China)
Objective To compare the differences of gingerols content in ginger and its processed products in order to reveal the change principle of pharmacological efficacy in different processed products.Methods With capsaicin as control and the gingerols constituents as index,the content of gingerols in ginger and its processed products samples was determined by adopting the ultra-violet(UV)visible spectrophotometry.Results The standard curve equation was Y=0.01X-0.003 2(r2=0.999 4),which showed that capsaicin in the rang of 9.99-119.88 μg/mL had a good linear relation with absorbance.RSD values of precisions experiment,stability experiment,repeatability experiment and recovery experiment were less than 3.0%.The gingerol contents in fresh ginger and its processed products from high to low were in turn ginger carbon,processed ginger,dried ginger and fresh ginger.Conclusion The pharmacological efficacy change of different ginger processed products is probably due to the content change of gingerols constituents before and after processing,moreover the UV visible spectrophotometry has high accuracy and good stability,which could be applied to determine the content of gingerols in ginger samples.
Zingiber officinale; Zingiberaceae; Processed drugs; Phenols; Spectrophotometry,ultraviolet
10.3969/j.issn.1009-5519.2015.22.001
A
1009-5519(2015)22-3369-02
2015-08-02)
关于医学论文中的志谢
本刊编辑部
国家自然科学基金资助项目(81102809)。
杨宇萍(1989-),女,广东茂名人,在读硕士研究生,主要从事中药炮制及饮片质量标准化的研究;E-mail:15902031877@163.com。
孟江(E-mail:jiangmeng666@126.com)。
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