蒙药泡囊草炮制样品及未炮制样品总生物碱的检测△

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(1.内蒙古国际蒙医医院，内蒙古 呼和浩特 010065;2.内蒙古民族大学，内蒙古 通辽 028000;3.内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110;4.锡林浩特市蒙医医院，内蒙古 呼和浩特 026000)

1 前 言

蒙医药是中华民族医药的瑰宝之一。蒙医药学是游牧文化基础上产生和发展的传统医学，是国家级非物质文化遗产。蒙医学历史与蒙古族历史文化长河同源于匈奴初期，仅有文字记载的历史已达3000 多年，至今，在内蒙古及8 省区相关旗县任然有着深厚的群众基础。蒙医药作为祖国灿烂的民族医药文化之一，已走进了内蒙古草原文化的殿堂。

蒙医药千百年来以其源远流长的悠久历史，系统完整的理论体系，得天独厚的药物资源，自成一体的用药方法科学合理的炮制工艺，备受世人所瞩目。蒙医药事业作为中国传统药物的主要组成部分，得到了国家、自治区政府的大力支持及政策上的扶持，有了空前发展的前景。

蒙医药作为世界传统医药的组成部分，并以其天然、安全、疗效好等优点，受到国内外的关注。在区内外及国际上多次参与和开展了国际学术会议，同时蒙医药走进联合国的事宜及内蒙古国际蒙医医院与蒙古、美国等其他国家的合作协议的达成等事项，为蒙医药的国际性发展奠定了基础。蒙医药的进一步发展需要蒙医药的规范化及标准化发展，从而促进蒙医药研究与国际接轨，为全人类服务。

蒙医药的国内国际形势为蒙医药事业的进一步发展提供了有利环境，但同时肩负着蒙医药的规范化及标准化发展要求，并急需将蒙医药研究与其他学科的科研领域紧密结合，为今后开发蒙药创新药物提供规范化及标准化的理论依据。

本研究遵照国内外蒙医药发展的形式及标准化的需求，对蒙药用植物泡囊草的成分进行了分析，为今后进一步发展蒙药成分研究及其规范化研究提供科学依据。

泡囊草蒙文名为(混-好日苏)，别名为西日-汤普如木，泡囊草系茄科植物泡囊草Physochlaina physaloides(L.)G.Don 的干燥根，具有应用历史悠久的传统蒙药［1］。分布于我国内蒙古、黑龙江、新疆等多个地方。该物种为中国图谱数据库收录的有毒植物，其毒性为全草有毒。根补肾温中，安神定喘。主治虚寒泄泻，劳伤，咳嗽痰喘，心慌不安。全草清热解毒，祛湿杀虫。主治中耳炎，鼻窦炎，咽喉肿痛，中毒，头痛。其有效成分为山莨菪碱、莨菪碱、东莨菪碱及红古豆碱［2］。1984 中国医学科学院药物研究所陈鹭生、司德昭报道在内蒙古乌兰察布市调查采集泡囊草，经化学分析证明这种植物可以作为提取山莨菪碱的原料［3］。山莨菪碱是医疗上有重要用途的莨菪烷类生物碱。由于泡囊草有大毒，蒙医常将泡囊草采用炮制削减其毒性后使用。

解红霞等利用溴甲酚绿染色法检测了泡囊草不同部位总生物碱含量［4］，康辉等利用HPLC 法测定了华山参中山莨菪碱的含量［5］。本研究利用溴甲酚绿染色法，以氢溴酸东莨菪碱为标准样，对泡囊草根炮制样品及未炮制样品的总生物碱的含量进行了测定。为泡囊草的质量控制提供依据，为泡囊草炮制工艺的规范化和质量的可控性提供科学依据。

2 实验材料与仪器

2.1 材料：泡囊草炮制样和未炮制样(蒙药混-好日苏)由锡林郭勒盟蒙医医院提供;氢溴酸东莨菪碱(批号：114-49 -8，购于上海源叶生物科技有限公司);其他试剂均为分析纯，产自天津市盛奥化学试剂有限公司。

2.2 仪器

BSA224S 型电子分析天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司);BT25 电子分析天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司);M200Pro 酶标仪(Thermo 公司);WSZ-200A 型回旋振荡器(上海-恒科学仪器有限公司，昆山-恒仪器有限公司);023454C 型微量移液器(厂家eppendof Research plus);Uti 有限公司);限公司);水为Milli Q 纯化水。

3 方法与结果

3.1 样品总生物碱的提取及检测

3.1.1 缓冲液及显色剂的配制：枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲

液(PH4.0)的配制：按《中国药典》2005年版一部附录(XVD)配制。甲液：取枸橼酸21g 加水溶解成1000ml，置冰箱保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g 加水溶解成1000ml。取上述甲液61.45ml 与乙液38.55ml 混合摇匀，即得。溴甲粉绿溶液(0.04%)的配制：取溴甲粉绿0.02g，加上述枸橼酸- 磷酸氢二钠缓冲液(PH4.0)使溶解成50ml，摇匀，即得。

3.1.2 样品液的制备：精密称取炮制及未炮制样品1g，各5份，置具塞锥形瓶内，精密加枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(PH4.0)25ml，镇摇5min，放置过夜，用干燥滤纸滤过，取滤液，用缓冲液清洗滤纸，定容于25ml 容量瓶中，即得样品液［4］。

3.2 含量测定：泡囊草所含主要成分为托烷类生物碱，经酸水解后生成山莨菪碱，故采用酸性染料溴甲酚绿染色后，在415nm 波长处有特征吸收。据此特点，选择氢溴酸东莨菪碱为对照品，采用分光光度计法测定含量。

3.2.1 标准曲线的绘制：精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品3.93mg，置25ml 容量瓶中，加蒸馏水使溶解成刻度，摇匀，即得氢溴酸东莨菪碱对照品溶液。精密量取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml 分别置分液漏斗中，各精密加枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(PH4.0)10ml，再精密加0.04%溴甲粉绿溶液3ml，摇匀，用10ml 三氯甲烷萃取5min，待溶液完全分层后，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷湿润的滤纸滤入25ml 容量瓶中，再用三氯甲烷萃取3 次，每次5ml，依次滤入容量瓶中，并用三氯甲烷洗涤滤纸，滤入容量瓶中，加三氯甲烷至刻度。用酶标仪测定(《中国药典》2005年版一部附录VA)于415nm 波长处测定吸光度，平行检测3 次。以吸光度对溶液浓度进行回归分析，氢溴酸东莨菪碱在6.24～18.72ug/ml 之间与吸光度线性关系良好，计算回归方程Y=134.62X-8.1137，r=0.9995(n=6)，见表1。

对照品浓度μg/ml 3.12 6.24 9.36 12.48 15.6 18.72吸光度(A) 0.0849 0.110617 0.135317 0.157817 0.181517 0.205467

3.2.2 精密度实验：取标准对照品液3.0ml，置于分液漏斗中，精密加构椽酸-磷酸氢二钠缓冲液(PH4.0)10ml，再精密加入0.04%嗅甲酚绿溶液3mL，摇匀，用10ml 三氯甲烷振摇提取5min，待溶液完全分层后，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷湿润的滤纸滤入25ml 容量瓶中，再用三氯甲烷提取3 次，5ml/次，每次振摇3min，依次滤入容量瓶中，并用三氯甲烷洗涤滤纸，滤入容量瓶中，加三氯甲烷至刻度。在415nm 处测定吸光度3 次。结果可知，RSD =0.17%，表明仪器精密度良好。见表2。

SD%吸光度(A)编号1 2 3 0.2651 0.2603 0.2627 0.17

3.2.3 含量测定与比较：取上述炮制1ml 及未炮制样品2ml，置于分液漏斗中，精密加枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(ph4.0)10ml，再精密加入0.04%溴甲酚绿溶液3ml，摇匀，用10ml 三氯甲烷萃取5min，待溶液完全分层后，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷湿润的滤纸滤入25ml 容量瓶中，再用三氯甲烷萃取3 次，每次5ml，每次振摇3min，依次滤入容量瓶中，并用三氯甲烷洗滤纸，滤入容量瓶中，加三氯甲烷至刻度。用酶标仪测定(《中国药典》2005年一部附录VA)于415nm 波长处测定吸收度计算总生物碱相对含量，并利用T-test 计算了p 值。结果见表3，4。

1 2 3 4 5样品量(g)编号1..0014 1.0013 1.0003 1.0029 1.0036平均吸光度值(A) 0.0933 0.0852 0.0782 0.1122 0.0965百分含量(%) 0.46 0.41 0.38 0.55 0.48平均百分含量(%)0.456 ±0.04

从总生物碱的测定结果看，泡囊草炮制及未炮制样品中生物碱百分含量不相同，炮制样品中生物碱含量比未炮制总生物碱含量显著高(p值为0.5%)。

4 讨 论

泡囊草具有应用历史悠久的传统蒙药，主要有效成分以山莨菪碱、莨菪碱等生物碱为主，因其植物有大毒，蒙医常将泡囊草采用炮制削减其毒性后使用。植物生物碱的水溶性、挥发性、水解性和化学反应性等性质的不同，采用不同的炮制方法可提高其溶出率或减少其毒性。植物游离生物碱易溶于乙醇等有机溶剂，在酸性条件下形成盐易溶于水，用醋或酒炮制，可增加其总生物碱的溶出。然而在有些炮制过程中水溶性生物碱的流失或挥发性生物碱的丢失，容易引起总生物碱的减少［7］。因此不同的炮制方法引起不同程度的生物碱溶出。宋宏春等对牛奶及膏制法炮制的泡囊草的总生物碱进行了检测，结果表明炮制后的总生物碱含量低于未炮制样品［8］。本研究结果显示炮制后的泡囊草的总生物碱明显高于炮制前的样品，这可能与炮制方法相关。在今后的研究中，利用HPLC 对炮制及未炮制样品的生物碱含量进行评价及讨论。

［1］国家中医药管理局.中华本草蒙药卷［M］.上海：科技出版社，2004：265.

［2］陈鹭声，司德昭.北京地区泡囊草的引种和生物学特性观察［J］.药学学报，1994，19(11)：869 -875.

［3］宋宏春，张宏宇，云彩麟，等.不同炮制方法对蒙药泡囊草中托烷类生物碱含量的影响［J］.中国民族医药杂志，2008，3，71 -73.

［4］解红霞，王宝珍，萨日娜，等.分光光度法测定蒙药泡囊草不同部位中总生物碱的含量，内蒙古医学院学报.2011，33(1)，46.

［5］康辉，聂桂华，代雪平.HPLC 法测定华山参中山莨菪碱的含量［J］.中医研究，2010，2(10)，33.

［6］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.一部.2005：94 -95.

［7］陈文贵.炮制对含生物碱药物影响的探讨［J］.云南中医杂志，1989，10(2)，33.

［8］宋宏春，张宏宇，云彩麟.蒙根达赖，不同炮制方法对蒙药泡囊草中托烷类生物碱含量的影响［J］.中国民族医药杂志，2008，3，71.