石见穿提取物多糖对SGC—7901肿瘤细胞的作用

代贵江 刘晓冬 郑科文 吴宜艳

【摘 要】目的：研究分析石见穿提取物多糖对SGC-7901肿瘤细胞的作用。方法：应用热水提取法以及乙醇沉淀法提取多糖，设立10、20、40、80、160ug/ml不同浓度的多糖组以及等体积培养液对照组共6组，应用MTT法测定石见穿提取物多糖的肿瘤抑制率，对比分析6组24h、48h的SGC-7901肿瘤细胞抑制率。结果：MTT测定显示石见穿多糖对SGC-7901细胞有明显的抑制作用，并且呈现时间和计量的依赖性。结论：石见穿提取物通过乙醇提取法充分提取石见穿提取物多糖，石见穿多糖对SGC-7901肿瘤细胞的抑制作用随着浓度和作用时间的升高而增强。另外石见穿多糖属于纯天然药材，可降低肿瘤患者脏器负担，值得临床推广应用。

【关键词】石见穿提取物；多糖；肿瘤抑制率

石见穿学名华鼠尾草，中医理论中有活血化瘀、清热解毒、活血理气等作用，临床中主要将石见穿与其他中药配合使用，多用于肝炎、妇科以及癌症等方面。近期有较多文献研究表明，石见穿有效成分对于抗肿瘤有显著的作用，石见穿主要成分偶多糖类、多酚类、三枯类以及醇类[1]。本文为研究分析石见穿提取物对SGC7901细胞的作用，应用热水提取法以及乙醇沉淀法提取石见穿有效成分多糖，并应用MTT法分析其对抑制肿瘤活动的作用，为石见穿的医学应用提供参考，为中医治疗肿瘤和进一步研究天然药物及北药开发奠定基础。

1 材料与方法

1.1 药品、试剂与仪器

石见穿提取物由笔者所在的药学实验室自制，石见穿购于上海市中药饮片厂，生产批号981101，SGC-7901细胞瘤株由中国医学科学院肿瘤研究所提供。乙醇、丙酮、氯仿、正丁醇以及源化钾等全部为分析纯试剂。

1.2 石见穿提取物多糖的提取方法

将石见穿粉200g放置于1500ml的烧杯中，倒入1000ml的石油醚，将其浸泡24小时进行脱脂，浸泡后过滤，药渣干烧，之后采用热水回流的方式提取3次，每次提取2小时，三次后合并提取液，采用旋蒸的方法将提取液浓缩到300ml。再加入1200ml的无水乙醇，在40℃环境下放置24小时后过滤、干燥，再将其样品用4：1的Sevage试剂（氯仿和正丁醇）除蛋白，连续操作六次。后得到的样品醇沉后依次用乙醇、丙酮及乙醚洗涤两次，最后真空干燥所见的黑色粗便为石见穿多糖[2]。

1.3 石见穿多糖抗肿瘤活性的试验方法

取SGC-7901肿瘤细胞接种在96孔板中，要求为对数生长期的肿瘤细胞并以1×104个/孔接种，100ul/孔。48h后将其分为10、20、40、80、160ug/ml多糖组以及等体积培养液的对照组6组，各组均设5个平行孔并分别加入100ul同等浓度的多糖，在孵箱内分别培养24h、48h，培养条件要求37℃、饱和湿度以及5% CO2，之后再加入5mg/ml MTT 20ul培养4h后去掉培养液将150ul的二甲基亚砜加入每孔，结束培养计算细胞增殖抑制率。抑制率=（对照组A值-多糖组A值）/对照组A值×100%，A值采用酶标仪在490nm处读取[3]。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.O软件对本组数据统计分析，实验数据采用标准差（χ-±s）表示，方差齐性检验采用单因素方差分析，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 石见穿多糖提取率

本组实验应用热水提取法以及乙醇沉淀法提取多糖，200g石见穿经过Sevage法除蛋白得到3.60g石见穿粗多糖，有效提取率为1.8%。

2.2 石见穿多糖对SGC-7901肿瘤细胞的抑制率

MTT测定显示石见穿提取物多糖对SGC-7901肿瘤细胞有明显的抑制作用，并且呈现时间和剂量的依赖性，各浓度石见穿组较对照组P<0.05，如表1。

3 结论

我国在应用天然药物方面有着悠久的历史，尤其是在肿瘤疾病治疗中对中草药的抗癌作用的研究，许多中草药提取物对抗肿瘤的研究均被深入研究和临床应用。众多药理研究证实，石见穿有抗肿瘤的作用，临床中多见与其他药物配合用于肝癌、胃癌的治疗中[4]。本文将人体胃癌SGC-7901肿瘤细胞作为评价体系，研究石见穿提取物多糖对抗肿瘤的作用。在石见穿多糖的提取中，应用热水提取法以及乙醇沉淀法提取多糖，石见穿多糖的提取率可达1.8%。这种工艺提取率较高稳定可行。

肿瘤是人体组织的某个细胞在各种致癌因素的作用下，失去了原本基因水平的正常生长调控，出现异常细胞增生问题，造成异常的病变[5]。因此临床治疗中抑制肿瘤细胞的生长至关重要，本组在石见穿多糖对SGC-7901肿瘤细胞抑制率的实验结果中发现，不同浓度的石见穿多糖对肿瘤细胞均有抑制作用，浓度越高抑制率越高，且48h抑制率要明显高于24h抑制率，即说明石见穿多糖对SGC-7901肿瘤细胞的抑制作用随着浓度和作用时间的升高而增强。另外石见穿多糖属于纯天然药材，可降低肿瘤患者脏器负担，值得临床推广应用。

参考文献

[1]郑海音，徐伟，郑晓燕，等.石见穿多糖的提取及其对肝癌细胞增殖的抑制作用[J].中国中医药科技，2008，（5）：360-362.

[2]徐敬宣，薛姣，钱晓萍，等.石见穿的化学成分及抗肿瘤作用研究进展[J].现代肿瘤医学，2011，（3）：587-590.

[3]高俊峰，王秀辉，张鹏，等.石见穿化学成分和药理作用研究进展[J].中国实验方剂学杂志，2013，（12）：348-351.

[4]雷涛，孟繁钦，王艳芳，等.石见穿化学成分及药理研究进展[J].中国医药导报，2010，（29）：9-11.