探究影响黄芪多糖抗氧化活性的因素

劳军 王楠楠

作为一种常见的中草药，黄芪（Astragalus membranaceus）是豆科属多年生草本植物，其药用部分为根部，含有多糖、皂苷及酚类等成分。其中，黄芪多糖可以用来抗氧化自由基、降低血糖和延缓衰老。黄芪中的多糖可以分为水溶性多糖和水不溶性多糖，本文通过水提醇沉法提取黄芪水溶性多糖，再通过DPPH法研究其抗氧化活性。

一、材料与方法

1.材料

（1）实验用黄芪为市售，购自于吉林大药房，烘干后研磨成粉。无水乙醇、 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）均为国产分析纯。

（2）实验所用仪器主要有TU-1901型紫外可见分光光度计（北京普系统仪器有限公司）、电热恒温干燥箱（DHG-9245A）、离心机（PDZ5-WS）。

2.方法

（1）采用水提醇沉法提取黄芪水溶性多糖。称取100g黄芪粉，加适量的水定容于900ml，水浴加热至70℃。维持100min之后，加75%乙醇300ml沉淀多糖物质，3000rpm，离心10min之后即为粗多糖。

（2）DPPH法对不同浓度黄芪多糖清除自由基能力的测定。将上述黄芪多糖配成10mg/ml、25mg/ ml、50mg/ml、75mg/ml、100mg/ml的溶液，对照组加入水50μL、DPPH溶液2ml和95%乙醇950μL；实验组分别加入不同浓度的黄芪多糖溶液50μL、DPPH溶液2ml和95%乙醇950μL；混合后摇匀，静置30min。在分光光度计517nm处测出每组的吸光度值。把吸光度代入如下公式，从而计算出DPPH自由基的清除率（A代表实验组，A0代表对照组）。

（3）不同pH对黄芪多糖清除自由基能力的影响。把DPPH溶液2ml和95%乙醇950μL混合成反应液，使用NaOH和HCl分别把反应液调制成pH为2、3、4、5、6、7、8、9的系列溶液，然后再分别加入黄芪多糖溶液50μL，从而测定对DPPH自由基的清除率。

（4）不同温度对黄芪多糖清除自由基能力的影响。把上述反应液分别置于4℃、20℃、50℃、80℃中10min后，再分别加入黄芪多糖溶液50μL，静置30min，然后测定对DPPH自由基的清除率。

二、结果分析

1.不同浓度黄芪多糖清除自由基的能力

如图1所示，随着黄芪多糖的浓度不断增加，自由基的清除率也不断增加，当浓度达到50mg/ml时，清除率可达84%；然后随着浓度增大，自由基清除率达到了一个平台期，这可能是由于DPPH溶液中的自由基有限，在黄芪多糖浓度为50mg/ml已基本上把自由基清除干净，因此以下系列实验选择在此浓度下进行研究。

2.不同pH及反应温度对黄芪多糖清除自由基能力的影响

不同pH对黄芪多糖自由基清除率的影响如图2A所示，当pH小于5时，随着pH的增大清除率升高；当pH为5时，自由基的清除率最高为57.3%；当pH大于5时，随着pH的增大清除率不断下降，这极有可能是黄芪多糖的稳定性所导致。不同温度对黄芪多糖自由基清除率的影响如图2B所示，随着温度的升高，自由基清除率不断下降，由4℃的71.9%降至80℃的62.3%，这极有可能是由于随着温度的不断升高，黄芪多糖化学成分不稳定或者DPPH在高温释放出更多的自由基所致。

三、结论

现有的研究已經证明，黄芪多糖具有一定的抗氧化能力，在清除自由基方面高于公认的维生素C。本文对黄芪多糖的抗氧化性及各种影响条件进行研究探讨，结果发现，黄芪多糖对自由基的清除最佳pH为5；随着温度的升高，对自由基的清除能力逐渐下降。

作者简介：劳军（1979-），男，山东东营，博士研究生，主要研究方向：生物学。