高效液相色谱法测定厄贝沙坦的含量

魏献波，王美艳Δ，路婷婷

(1.扬子江药业集团北京海燕药业有限公司 质管部，北京 100026；2.扬子江药业集团北京海燕药业有限公司 化学药物研究所，北京 100026)



高效液相色谱法测定厄贝沙坦的含量

魏献波1，王美艳1Δ，路婷婷2

(1.扬子江药业集团北京海燕药业有限公司 质管部，北京 100026；2.扬子江药业集团北京海燕药业有限公司 化学药物研究所，北京 100026)

目的 建立测定药物中厄贝沙坦含量的高效液相色谱法。方法 采用Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，以磷酸溶液(以三乙胺调节pH至3.2)-乙腈(62:38)为流动相，在柱温35 ℃，流速约1.0 mL/min，检测波长245 nm的条件下进行检测。结果 厄贝沙坦的质量浓度在0.04～0.40 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.99999)，平均加样回收率为98.37%，RSD为0.7%(n=9)。结论 该方法操作简便、定量准确、线性响应范围宽，重复性好，可作为药物中厄贝沙坦含量测定的方法。

厄贝沙坦； 含量测定； 高效液相色谱法

高血压是一种临床综合征，以体循环动脉压增高为主要表现，其本身可引起一系列的症状，长期高血压更可以影响重要脏器尤其是心、脑、肾的功能，最终导致脏器功能衰竭。高血压可分为原发性高血压(即高血压病)和继发性高血压(即症状性高血压)两大类。

近年来，我国高血压患病人数每年在以惊人的速度上升，高血压已成为中国迫切需要解决的重大公共卫生问题。厄贝沙坦片为血管紧张素Ⅱ受体抑制剂，能够抑制血管紧张素Ⅰ转化为血管紧张素Ⅱ，特异性地拮抗AT1受体，通过选择性地阻断血管紧张素Ⅱ与AT1受体的结合，抑制血管收缩和醛固酮的释放，产生降压作用，是治疗原发性高血压的一种常用药物。张海波等[1]采用Meta分析系统评价厄贝沙坦与其它降压药物治疗轻、中度高血压的临床疗效和安全性差异，结果表明厄贝沙坦治疗轻、中度高血压在疗效上与其它降压药物比较差异无统计学意义，但在安全性方面优于其它降压药物。此外，临床研究表明厄贝沙坦降压稳定，副作用小[2-3]。厄贝沙坦口服后能迅速吸收[4-5]，生物利用度在60%～80%之间，在体内的分布容积广，半衰期长达11～15 h。在药代动力学研究中，药效和剂量在10～600 mg范围内显示出明显线性相关性，降压作用平稳而持久，并可通过有效降低夜间血压来恢复正常的血压昼夜节律。厄贝沙坦可单独使用，也可与其它抗高血压药物合用[6-8]。

本文建立了一种高效液相色谱法测定药物中厄贝沙坦的含量，此法操作简便、定量准确、线性响应范围较相关文献[9-12]更宽，重复性好，药品中的其他辅料不干扰测定。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器与试药：Agilent 1100高效液相色谱仪；Seven Easy型pH计；XS 205型分析天平。厄贝沙坦对照品(中国食品药品检定研究院，批号为100607-201202)，杂质I对照品(USP，批号为1347711)；科苏(厄贝沙坦片)(扬子江药业集团北京海燕药业有限公司，规格为每片75 mg，批号为14012511)；磷酸(GR，国药集团化学试剂有限公司)、甲醇、乙腈(色谱级，赛默飞世尔科技(中国)有限公司)、三乙胺(AR，国药集团化学试剂有限公司)，水为超纯水。

1.1.2 溶液的配制：精密称取厄贝沙坦对照品与杂质I对照品各约10 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为系统适用性溶液。

分别取厄贝沙坦对照品约10 mg、10 mg、20 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品溶液1、对照品溶液2以及对照品溶液3。

取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于厄贝沙坦10 mg)，置50 mL容量瓶中，加甲醇适量，振摇使厄贝沙坦溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

按处方组成，制备不含厄贝沙坦原料的阴性模拟制剂，照上述供试品溶液的制备方法制备作为阴性空白溶液。

1.1.3 色谱条件：色谱柱：Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温：35 ℃；流速：1.0 mL/min；进样体积：10 μL；检测波长：245 nm；流动相：磷酸溶液(取85%磷酸5.5 mL，加水至950 mL，以三乙胺调节pH至3.2)-乙腈(62:38)，使用前需超声脱气。

1.2 实验方法

1.2.1 系统适用性试验：取系统适用性溶液按1.1.3项下色谱条件进样10 μL，观察出峰顺序并计算分离度；理论板数按厄贝沙坦峰计算应不低于2 000。

1.2.2 专属性试验：取供阴性空白溶液、对照品溶液1和供试品溶液，在1.1.3所述色谱条件下分别进样10 μL，观察供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰保留时间是否一致，阴性空白溶液在厄贝沙坦位置有无干扰。

1.2.3 线性关系考察：精密量取对照品溶液3 1.0、4.0、5.0、6.0、10.0 mL，置10 mL的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得线性系列溶液。将上述溶液按1.1.3项下色谱条件分别进样10 μL，测定峰面积。

1.2.4 检测限和定量限试验：取厄贝沙坦对照品溶液1不断稀释，当厄贝沙坦峰高与基线噪音高度之比为10:1时，得本方法的定量限浓度，取定量限浓度下的溶液连续进样6次，记录峰面积与保留时间；当厄贝沙坦峰高与基线噪音高度之比为3:1时，得本方法的检测限浓度，取检测限浓度下的溶液连续进样3次，记录峰面积与保留时间。

1.2.5 精密度试验：取1.1.2项下的供试品溶液6份，每次进样10 μL，测定厄贝沙坦峰面积。

1.2.6 稳定性试验：将1.1.2项下的对照品溶液1放置0、4、8、12、28、24和36 h后，精密量取10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。

1.2.7 加样回收试验：按处方组成，制备不含厄贝沙坦原料的阴性模拟制剂，称取阴性模拟制剂约20 mg共9份，分别加入厄贝沙坦原料16 mg、20 mg、24 mg各3份，分别置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得浓度分别为80%、100%和120%的回收率溶液。精密量取空白溶剂、对照品溶液(双样双针)及回收率溶液(进2针)各10 μL，按1.1.3项下色谱条件进行测定。

1.2.8 样品含量测定：按1.1.2项下方法平行制备3批样品的供试品溶液，在1.1.3项下色谱条件进行测定，按外标法以峰面积计算样品含量。

2 结果

2.1 系统适用性试验 在高效液相色谱法中，理论塔板数是柱效的具体体现，它与分离度、重复性和拖尾因子一齐构成高效液相色谱法系统适用性实验的指标，直接对实验结果产生不可忽视的影响[13]，本实验以厄贝沙坦峰与杂质I峰的分离度以及厄贝沙坦峰的理论板数为指标，考察了系统的适用性情况。由色谱图1可知，出峰顺序依次为杂质I峰与厄贝沙坦峰，分离度大于2.0，理论板数按厄贝沙坦峰计算不低于2 000，符合品种分离项下要求。

图1 系统适用性色谱图Fig.1 Chromatogram of System Suitability

2.2 专属性试验：专属性体现了在其他成分可能存在的条件下，所用方法能够正确检测出被测物质的特性，本实验以出峰时间为指标，考察了阴性模拟制剂是否对测定产生影响。由色谱图2可知，供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰保留时间一致，阴性空白溶液在厄贝沙坦位置无干扰。

图2 专属性色谱图Fig.2 Chromatograms of System Specificity

2.3 线性关系考察：以对照品浓度(mg/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，回归方程为Y=22 779.397 65X，r=0.999 99(n=5)。

2.4 检测限和定量限试验：本方法的定量限浓度为126.5 ng/mL，符合清洁限度要求；取定量限浓度下的溶液连续进样6次，溶液峰保留时间的相对标准差0.1%，峰面积的相对标准差为4.5%。检测限浓度为37.9 ng/mL；取检测限浓度下的溶液连续进样3次，溶液峰保留时间的相对标准为0.2%，峰面积的相对标准差为4.7%，符合验证标准。

2.5 精密度试验：实验通过对同一批次样品的连续测定，考察了仪器的精密度。计算得厄贝沙坦峰面积的相对标准偏差为0.5%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验：计算得各时间点色谱峰的峰面积RSD为0.8%(n=7)，表明所测溶液在36小时内稳定。

2.7 加样回收试验：按外标法以峰面积测定样品含量并计算回收率，结果见表1。

表1 厄贝沙坦加样回收试验结果

2.8 样品含量测定 3批样品中厄贝沙坦含量分别为标示量的96.80%，97.50%，97.83%，平均含量为97.38%。

3 讨论

高效液相色谱法具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广(样品不需气化，只需制成溶液即可)、色谱柱可反复使用等优点，在《中国药典》中有多种中成药的定量分析采用该法，已成为中药制剂含量测定最常用的分析方法。

本文采用高效液相色谱法对科苏(厄贝沙坦片)中厄贝沙坦的含量进行了分析测定，方法的系统适用性符合要求；专属性试验确认阴性空白溶液在厄贝沙坦位置无干燥峰；检测限37.9 ng/mL，定量限为126.5 ng/mL；重复性良好，线性范围为0.04～0.40 mg/mL(r=0.999 99)；回收率为98.37%，溶液稳定性良好，能够用于药品中厄贝沙坦含量的测定。

对于加样回收试验中，本文采用“等量的阴性模拟制剂中加入不同质量的厄贝沙坦原料”的方法，通过测定回收率溶液中厄贝沙坦的百分含量来确定回收率。在后续试验中，可以考虑测定加标回收率，即于样品中加入厄贝沙坦对照品，采用探究出的标准曲线，以峰面积为准计算其中厄贝沙坦含量以及回收率。

对于本实验“线性关系考察”中，后续可以进行厄贝沙坦在低浓度范围内与峰面积是否呈线性相关的实验，以增加实验的适用性；对于“稳定性试验”中，应继续考察更长时间范围内对照溶液的稳定情况，以说明对照溶液的有效适用时间。

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[13] 中国药典[S].二部，2010，附录30.

(编校：谭玲)

Content determination of irbesartan in drugs by HPLC

WEI Xian-bo1, WANG Mei-yan1Δ, LU Ting-ting2

(1.Department of Quality Control, Yangtze River Pharmaceutical Group Beijing Haiyan Pharmaceutical Co., Ltd, Beijing 100026, China; 2.Chemical Research Institute, Yangtze River Pharmaceutical Group Beijing Haiyan Pharmaceutical Co., Ltd, Beijing 100026, China)

ObjectiveTo establish a HPLC method for the content determination of irbesartan in drugs.MethodsThe diamonsil C18column (150 mm×4.6 mm，5 μm) was used, with the mobile phase of phosphoric acid solution-acetonitrile(adjusted to pH 3.2 with triethylamine)(62:38).The column temperature was 35 ℃, with the UV detection wavelength of 245 nm and a flow rate of 1.0 mL/min.ResultsIrbesartan exhibited a good linear relationship with the peak area in the concentration range of 0.04-0.40 mg/mL with the correlation coefficient of 0.999 99．The average recovery was 98.37% with RSD of 0.7%(n=9).ConclusionThis method is simple and accurate with wide linear range and good reproducibility，and can be used to determine the content of irbesartan in drugs.

irbesartan; content determination; HPLC

魏献波，女，学士，质量控制主管，研究方向：药物分析检测，E-mail:80641626@qq.com；王美艳，通信作者，女，硕士，质量控制检测员，研究方向：药物分析检测，E-mail:1045773477@qq.com。

R927.2

A

1005-1678(2015)10-0141-03