末梢血与静脉血紫外速率法检测G－6－PD活性的比较和应用*

梁乔慧，黄玉庭

(1．广西壮族自治区来宾市妇幼保健院检验科，广西来宾 546100 2．广西壮族自治区来宾市人民医院检验科，广西来宾 546100)

临床检验

末梢血与静脉血紫外速率法检测G－6－PD活性的比较和应用*

梁乔慧1，黄玉庭2

(1．广西壮族自治区来宾市妇幼保健院检验科，广西来宾 546100 2．广西壮族自治区来宾市人民医院检验科，广西来宾 546100)

目的:比较同一患者末梢血与静脉血紫外速率法检测G－6－PD活性的结果差异，评估末梢血标本直接速率法测定G－6－PD的可行性。方法:静脉血标本使用EDTA－K2抗凝，离心沉淀吸取红细胞溶血后速率法检测。末梢血标本混匀溶血离心沉淀后取上清液速率法检测，同时测定其血常规，得其压积，测得的结果除以其压积。结果:两种标本检测结果比对显示，末梢血标本结果比静脉血标结果均偏高(24±4)%。末梢血标本结果乘以0．76较正后，两组结果高度的一致，经统计学计算差异无显著性(P＞0．05)。结论:直接速率法测定G－6－PD过筛实验中，末梢血样本也可以直接测定G－6－PD，通过如下计算得结果:G－6－PD活性浓度=末梢血结果/红细胞压积×0．76。该方法适合在标本不便采集或患者不想抽血时使用，更适合于儿童医院，妇幼保健院等常采手指血(末梢血)的医院使用。

G－6－PD活性浓度;末梢血;静脉血;压积红细胞hct

G－6－PD缺乏症，俗称蚕豆病，是一种染色体异常的遗传性溶血性疾病，是新生儿黄疸的重要原因。对于可疑患者或产前检查，医生常会在检查血常规同时检查G－6－PD活性，通过筛查，可以指导用药，有效预防溶血症的发生，进行婚前体检和产前检查对优生优育和有效预防新生儿黄疸有重要意义。目前对G－6－PD的检测方法主要是用生物化学方法，包括高铁血红蛋白还原试验，荧光斑点法，NBT定量比值法等手工方法，直接紫外速率法具有标本前处理简单，操作简便快速，重复性好，便于上机全自动化等优点，所以得以广泛使用。由于该方法是测定压积红细胞中的G－6－PD活性浓度，要求采集静脉血，对于儿童或新生儿，或者不便抽血的患者就比较麻烦。经收集我院门诊及住院360例病人做分析对象，以静脉血标本为对照，末梢血标本为分析对象，做这两组标本的比对，比对显示:末梢血标本结果均偏高(24±4)%。末梢血标本结果乘以0．76较正后，各浓度区间两组结果有高度的一致性，经统计学计算差异无显著性(P＞0．05)。结论是速率法G－6－PD过筛实验中，末梢血可以作为样品直接检测，也就是不需抽取静脉血，采集手脂血(末梢血)结合血常规计算(G－6－PD活性浓度=末梢血结果/红细胞压积×0．76)，也可以达到过筛的目的。本法特别适合各级儿童医院，妇幼保健院等不便或不想采集静脉血的检查对象。

1 资料与方法

1．1 临床资料

1．1．1 仪器:日本日立7600－010全自动生化分析仪，希森美康4000I全自动血球计数仪，820台式离心机，计算器，微量吸样器。

1．1．2 试剂:①利德曼公司生产的G－6－PD检测试剂盒(直接紫外分光法)，前处理溶解红细胞的溶液为蒸溜水②检测红细胞压积所用的试剂为希森美康全自动血液分析仪诊断用试剂。

1．1．3 标本来源360例我院门诊、住院病人，男女比为1:1，其中0～10岁251例，10～60岁76例，60岁以上33例。WBC＜20×109L－1的266例，WBC20～25×109L－1的34例，WBC25～30×109L－1的25例，WBC＞30× 109L－1的35例，EDTA－K2抗凝静脉血和抗凝末梢全血。质控品是利德曼公司提供的多项生化质控品［1］。

1．2 方法

1．2．1 静脉血标本:采集病人EDTA－K抗凝全血，在3000转/min条件下，离心5min，去掉上清液，取下层压积红细胞20微升加入1mL去离子水中(稀释51倍)，充分混匀待红细胞完全溶解后(15～30min)上机测定。仪器测得的结果为静脉血离心压积红细胞的G－6－PD活性浓度。

1．2．2 未梢血标本:采集该病人的抗凝末梢全血10微升，直接加入500微升去离子水中(稀释51倍)，充分混匀待红细胞完全溶解后，在3000转/min条件下，离心5min，取上清液上机测定。采集该病人的抗凝末梢全血60微升，全自动血球仪测血常规，得其血红细胞压积。生化仪测得的结果÷压积=未梢血压积红细胞的G－6－PD活性浓度两种方法最终结果应在试剂厂家给的线性泛围内(0～1500U/L)，否则稀释后再检测［2］。

1．3 统计学分析:初步统计发现末梢血标本结果均比静脉血标本结果偏高(24±4)%，为了使两组结果有更直观比较，梢血标本结果乘0．76较正。360例检测结果，以静脉血标本结果为参考方，末梢血标本结果乘0．76较正后为分析方，做两种标本结果的比对，以简明统计．EXE软件统计分析，采用配对设计的t检验，求出P值，P＞0．05为差异无统计学意义。

2 结果

2．1 经t检验，不同G－6－PD活性浓度区间的两种方法检测结果对比，P值均大于0．05，差异无统计学意义(见表1)。

表1 WBC＜20×109L－1时不同G－6－PD活性浓度区间的两种方法检测结果对比

2．2 精密度检测:同一对象平行10次测定重复性:静脉血标本精密度相对平均偏差为9．2%，末梢血标本精密度相对平均偏差为4．6%，末梢血标本精密度较好。

3 讨论

直接紫外速率法是检测压积红细胞上的G－6－PD活性浓度，压积红细胞可以通过离心沉淀取得，也可通过仪器测量得到，未梢血标本只是相当于稀释过的离心压积红细胞的再次检测，稀释的倍数就是其红细胞压积，两种做法相当于相同的方法学不同的标本前处理而已，所以这两种结果之间有必然的相关性［3］。在日常静脉血标本检测操作过程中，离心机的转速，离心时间都可以按试剂说明操作容易做到，但在吸样过程中误差较大，比如病人的血粘稠度较大时吸样就比较困难，有可能吸样就不足，离心后上清液如吸得不干静，吸样时就有可能混入较多血浆，吸样时动作过大过快等也会影响吸样准确性。相比之下，血常規測得的压积是比较真实可靠的，存在人为因素较少。两种不同的红细胞压积就使得这两种做法结果有一定偏差，同一实验室内，这种偏差是相对稳定的，偏差(24± 4)%。在厂家确定的线性范围，参考范围内。为了使两种标本结果有可比性，有相同的参考范围，末梢血法结果要剩以0．76较正。这个较正数大小因实验室工作环境和操作习惯而有些差别。在末梢全血中，主要包括含有红细胞之外还有白细胞和血小板，血浆等物质。应考虑其基质效应［4］。经过多次实验和对比显示，白细胞干扰对检测影响最大。所以末梢血标本溶血后必须离心沉淀，去掉白细胞等杂质干扰，取上清液检测，而静脉血标本离心沉淀后红白细胞分层分开，吸样时受白细胞影响较少，可直接检测。黄疸血浆、脂浊血浆对结果有影响，但在可接受的范围内(要求相对偏差＜10%)［5］。综合比较，妇幼保健院，儿童医院的检测对象主要是新生儿，婴幼儿和新婚夫妇等，主要是做筛查，日常检查血常规主要是采未梢血，采集静脉血比较困难，病人也不易接受［6］。多数情况下临床医师检查血常规同时希望可以同时筛查一下G－6－PD活性浓度。所以采用未梢血法比较适合儿童医院，妇幼保健院等临床工作特点，所以未梢血标本也是可以作为检测样品的，该做法的缺点是需要同时做血常规检查［7］。

［1］童若春，陶元鋆，倪福椿，等．红细胞G－6PD缺陷几种实验诊断方法的评价［J］．临床检验杂志，1988，(3):146～147．

［2］罗建明，唐霞．高铁血红蛋白还原试验的再改进［J］．中华血液学杂志，1998，(10):547～548．

［3］蔡旗，沈玉才，张栋武．脐血G－6－PD活性检测对新生儿黄疸早期干预的价值［J］．中国妇幼保健，2002，17(9): 548～549．

［4］吴梓梁，余伟栋，陈顺存，等．红细胞葡萄糖6－磷酸脱氢酶活性不同检测法的评价［J］．广州医学院学报，1990，18 (3):41～46．

［5］贾璋林，杨发达，谢煜楠，等．不同溶血方法对葡萄糖－6－磷酸脱氢酶活性影响的研究［J］．国际检验医学杂志，2011，32(3):372～374．

［6］梁栋伟，区丽群．生化仪直接测定G－6－PD活性的临床应用［J］．检验医学与临床，2007，4(8):709～710．

［7］贾璋林，杨发达，谭桂彩，等．葡萄糖6－磷酸脱氢酶活性浓度检测法的初步研究［J］．检验医学与临床，2008，5 (2):65～67．

Comparison and Application of Detection of G－6－PD Activity in Peripheral Blood and Venous Blood of UV Rate M ethod

LIANGQiaohui，HUANG Yuting
(The Maternal and Child Health Care Hospital of Laibin，Guangxi Laibin 546100，China)

Objective:By detecting the G－6－PD activity in peripheral blood and venous blood of the same patientswith themethod of UV rate，to compare the differences of the results，and assess the feasibility that the G－6－PD activity of peripheral blood specimens detected by the directly ratemethod．Method:Firstly，venous blood samples use EDTA－K2 anticoagulation，then draw the red cell after centrifuge and dissolove it to detect by the ratemethod．That on the one hand，centrifugate the peripheral blood samples aftermixing，and draw the supernatant fluid to detect by the ratemethod，at the same time，do the blood routine examination and obtain the hematocrit，then the hematocrit is divided by themeasured results．Result:After comparing the two specimens of the test results，It showed that the peripheral blood sampleswas(24±4)%higher than the venous blood specimens．When the test results of the peripheral blood samplesweremultiplied by 0．76，the two test results will be highly consistent，and there was no significant difference after statistics calculation(P＞0．05)．Conclusion:The screening test of detecting the G－6－PD activity by the direct velocity method shows thatwe can detect the G－6－PD activity of the peripheral blood samples instead of the venous blood samples in some cases．The results calculated as follows:Concentration of G－6－PD activity=(The test results of the peripheral blood/HCT)×0．76．Thismethod is suitable for patients in convenient to collect or when the patients don’twant to draw the blood samples，it＇smore suitable for Children＇s Hospital，Maternal and Child Care Centre and so on where often collect the finger blood．

G－6－PD activity concentration;The peripheral blood method;The venous blood method;RBC hct

文献标识码:B

10．3969/j．issn．1006－6233．2015．08．066

广西壮族自治区科学研究与技术开发计划课题，(编号:143618)

1006－6233(2015)08－1541－03