MIF水平及MIF-173G/C多态性与恩施地区土家族银屑病关联性研究

周发琼 雷淑英 吴明珠

MIF水平及MIF-173G/C多态性与恩施地区土家族银屑病关联性研究

周发琼 雷淑英 吴明珠

目的:探讨恩施地区土家族银屑病患者巨噬细胞移动抑制因子(migration inhibitory factor，MIF)表达水平，分析M IF173G/C多态性与银屑病发病关联性。方法对2013年2月至2014年2月恩施中心医院收治的245例银屑病土家族患者及260名土家族健康对照(对照组)，应用SNaPshot SNP分型技术确定MIF-173G/C等位基因型，ELISA法检测血清中MIF水平。比较病例组和对照组MIF表达水平以及MIF-173G/C基因型和等位基因频率的差异。结果银屑病组MIF水平明显高于对照组(P＜0.01);MIF基因173G/C基因型和等位基因频率在2组间分布差异有统计学意义(P＜0.05)，银屑病组CC基因型和C等位基因频率均显著高于对照组(P＜0.01);相对于GG基因型，暴露于CG、CC基因型的相对危险度分别为1.46(95%CI:1.01～2.10，P＜0.05)和5.19(95%CI:1.69～15.89，P＜0.01);MIF173G/C多态性3种基因型GG、GC、CC的银屑病患者的临床特征比较，显示家族史、寻常型银屑病差异有统计学意义(P＜0.05)。结论MIF-173G/C可能是恩施地区土家族银屑病患者发病的遗传危险因素之一，其机制是该多态性对影响MIF表达水平。

巨噬细胞移动抑制因子;MIF-173G/C多态性;银屑病

银屑病(psoriasis)是一种皮肤科一种较为常见的疾病。其临床特征为慢性炎性疾病，病程较长，易反复发作甚至终生不愈。银屑病发病以青壮年为主，严重影响患者的身体健康和精神状况。近年来随着免疫，生物制剂以及激素等疗法的综合利用，银屑病治疗效果取得令人满意的临床效果，然而少数患者临床疗效较差，提示了解银屑病发病机制显得尤为重要。现已经明确银屑病发病与机体免疫紊乱，遗传，感染等因素密切相关［1］。临床上银屑病呈现出一定的家族聚集性，提示银屑病是一种与遗传因素密切相关的疾病［2－4］。鉴于炎症和遗传因素在银屑病发病中的作用，本文探讨恩施地区土家族银屑病患MIF表达水平，分析MIF173G/C多态性与银屑病易感性关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取恩施中心医院2013年2月至2014年2月皮肤科收治银屑病患者245例，符合银屑病的诊断标准［5］;其中男110例，女135例;年龄22～75岁。选择260例健康体检者为对照组，男120例，女140例;年龄20～67岁。所有受试对象为恩施地区土家族，在进入本研究之前告之患者，取得患者同意后才进入本研究。排除标准:所有纳入研究人员无明显免疫风湿性疾病、无高血压、糖尿病、严重肝肾疾病、恶性肿瘤、慢性消耗性疾病以及严重感染性疾病，近3个月无服用免疫抑制剂以及激素史。

1.2 试验方法

1.2.1 血清MIF水平测定:所有纳入研究对象在入院后第2天或门诊就诊时晨起空腹外周静脉血2 ml，4℃恒温低速离心分离血清，－20℃保存。酶联免疫吸附试验法检测血清MIF水平，操作方法按照上海依科赛生物制品有限公司MIF试剂盒检测。

1.2.2 MIF-173位点单核苷酸多态性的检测:在经患者或者其家属同意并签署知情同意书后，取患者肘静脉血2 ml，采用DNA提取试剂盒(上海泛柯生化试剂公司)提取DNA，并－20℃保存。按照文献设计MIF-173 G/C引物以及基因型分析［6］PCR上游引物:5’-ACTAAGAAAGACCCGAGG-3’下游引物5’-TGGCA GAAGGACCAGGAGAC-3’PCR产物产物为330 bp。扩增条件为变性95℃，5 min，变性95℃，30 s退火54℃40 s延伸72℃，45 s，共34个循环。利用SNaPshot SNP分型技术MIF-173G/C位点进行分型。

1.3 统计学分析基因型与等位基因型频率采用频率计数法计算，研究对象基因型与Hardy-Weinberg平衡检验、组间基因型与等位基因频率的比较均采用χ2检验。并以比数比(odds ratio，OR)及其95%可信区间(confidence intervals，CI)表示相对风险度。logistic回归分析MIF-173G/C多态性位点和银屑病之间的相关性MIF血清浓度作为计量资料以±s表示，2组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MIF-173G/C多态性的分布与比较经过预扩增、然后预扩增产物纯化、最终延伸反应以及延伸产物纯化。银屑病组GG，GC，CC基因型频率分别是52.25%，41.22%，6.53%;对照组基因型频率为63.84%，34.62%，1.54%;进行Hardy-Weinberg平衡定律的吻合度检验结果:银屑病组(χ2=0.44，P＞0.05)，对照组(χ2=4.50，P＜0.05)。以GG基因型为参照，暴露于CG、CC基因型的OR分别1.46(95% CI:1.01～2.10，P＜0.05)和5.19(95%CI1.69～15.89，P＜0.01)。可见随等位基因C的增加，患银屑病的风险显著增加(χ2=10.59，P＜0.01)。以G等位基因为参照，暴露于C等位基因的OR值1.53 (95%CI:1.14～2.50，P＜0.01)。见表1。

表1 2组MIF-173G/C多态性频率的分布比较

2.2 病例组不同临床特征患儿的基因型分析对病例组245例患儿分别进行logistic回归分析MIF-173G/ C多态性位和临床资料之间的相关性发现，男女儿童的基因型差异无统计学意义(χ2=0.888，P＞0.05)，对是否有银屑病家族史(χ2=26.798，P＜0.01)，是否为寻常型银屑病(χ2=0.786，P＞0.05)，是否处于活动期(χ2=12.426，P＜0.05)。见表2。

表2 不同临床特银屑病患者的MIF-173G/C基因分型情况例

2.3 结核病患者血清MIF表达水平分析组银屑病患者MIF水平较对照组明显升高(P＜0.01)。同基因型病例组与对照组血清MIF比较均有统计学意义(P＜0.05)。比较银屑病组三种MIF-173 G/C基因型患者血清MIF浓度比较差异有统计学意义(P＜0.05)。而健康对照组三种MIF-173 G/C基因型血清MIF浓度比较差异无统计学意义(P＞0.05)。见表3。

表3 2组MIF173G/C血清MIF表达水平比较pg/ml，±s

表3 2组MIF173G/C血清MIF表达水平比较pg/ml，±s

注:与对照组比较，*P＜0.05;与GG基因型比较，#P＜0.05;与GC比较，△P＜0.05

组别总数基因型GG GC CC银屑病组(n=245)804±70*424±24*890±69*#814±58*#△对照组(n=260)369±60 373±48 344±59 394±51

3 讨论

研究表明，炎性介质相关基因及表达的蛋白在银屑病等免疫性疾病的发生发展过程中起到至关重要的作用。MIF是一个关键的前炎性因子，是由T淋巴MIF分子含有115个氨基酸残基，其相对分子质量约为12 5 kDa，其编码基因位于22号染色体长臂(22q11.2)的保守区［7］。正常情况下机体垂体以及单核巨细胞也会分泌少量的MIF［8，9］。MIF具有众多生物学效应，其主要效应有免疫调节功能，促进血管新生，酶学活性［10］。MIF蛋白通过多种信号传导通路促进角质的形成、炎性细胞浸润及真皮乳头微血管扩张增生［10］。

基于MIF分子主要生物效应可能在银屑病发生发展中可能起着潜在作用，本研究旨在探讨恩施地区土家族银屑病患者巨噬细胞移动抑制因子表达水平，分析MIF173G/C多态性与银屑病发病关联性，结果表明银屑病组MIF水平明显高于对照组(P＜0.05)，这一发现与国外学者Shimizu等［11］相似。基因多态性与疾病的关联性近来成为基础医学领域的一个研究热点，MIF基因存在多个位点基因多态性，其中MIF的cDNA序列中第173位碱基单核苷酸多态性研究较为广泛。本研究发现MIF基因173G/C基因型和等位基因频率在2组间分布差异有统计学意义(P＜0.05)，银屑病组CC基因型和C等位基因频率均显著高于对照组(P＜0.05)，该该结果与国外学者研究发现［7］一致。国外学者发现MIF173G/C多态性与其他系统性红斑狼疮，炎性肠疾病等免疫性疾病有关［12，13］。银屑病组三种MIF-173G/C基因型患者血清MIF浓度比较具有统计学差异，而健康对照组3种MIF-173 G/C基因型血清MIF浓度比较差异无统计学意义(P＞0.05)。基因型的异同导致血清MIF水平不一可能是恩施地区土家族MIF173G/C多态性与银屑病存在关联性的分子机制之一。而本研究银屑病组中是否为寻常型银屑病及是否有银屑病家族史的患者其MIF173G/C的SNP的基因型存在显著差别，表现为寻常型银屑病和有银屑病家族史的患者基因型以GC为主，因此，推测其基因型的不同可能与银屑病的发生及预后有关。

本研究提示，MIF基因变异可能参与了银屑病的发生发展，其对银屑病的早期筛查，基因型诊断早期治疗可能会有一定的辅助作用，但其确切分子机制尚需得到进一步研究。本次研究的病例对照研究还存在一些不足，流行病学研究发现发病年龄，环境因素与代谢因素，服用避孕药物等因素是影响银屑病发病的相关因素，本研究的研究对象在发病年龄，环境因素与代谢因素，服用避孕药物等方面资料不全，而且本研究的样本量较小，需进一步扩大样本量，完善相关背景资料以进一步深入探讨MIF基因的遗传多态性在银屑病发生发展过程中可能的生物学机制。

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Correlation between serum levels of MIF as well as 173G/C polymorphism and pathogenesis of psoriasis in Tujiapopulationof Enshi District

ZHOU Faqiong*，LEI Shuying*，WU Mingzhu.*Dermatology of Dermatology Central Hospital of Enshi Tujia and Miao Autonomous Prefecture，Hubei，Enshi 445000，China

ObjectiveTo investigate the levels of macrophage migration inhibitory factor(MIF)in serum of patients with psoriasis in Tujia population of Enshi District，and to explore the correlation between the pathogenesis of psoriasis and 173G/C polymorphism.M ethodsA total of 245 patients with psoriasis(case group)who were admitted to our hospital from September 2009 to September 2010 and 260 healthy volunteers of Tujia population in the same period were enrolled in the study.The serum levels of MIF were detected by ELISA，and MIF-173 G/C was genetyped by SNaPshot SNP technique.Finally，MIF-173 G/C genotype and serum levels of MIF were analyzed and compared between the two groups.ResultsThe serum levels of MIF in case group were significantly higher than those in control group［(804.21±69.78)pg/m l vs(369.46 ±60.46)pg/m l，P＜0.01］.There were significant differences in the 173G/C genotype of MIF gene and allele frequency between two groups(P＜0.05).The CC genotype and C allele frequency in case group were significantly higher than those in control group(P＜0.01).As compared with GG genotype，the relative risk exposed to CG，CC genetype was 1.46(95%CI: 1.01～2.10，P＜0.05)，5.19(95%CI:1.69～15.89，P＜0.01)，respectively.The clinical characteristics were compared in the patients with three different kinds of genotype(GG，GC，CC)of MIF173G/C polymorphism，which showed that there was a significant difference in family history，psoriasis vulgaris(P＜0.05).ConclusionMIF-173 G/C polymorphism may be one of genetic susceptibility factors in pathogenesis of psoriasis in Tujia population of Enshi District，and its potential mechanism is that the polymorphism may affect the expression levels of MIF.

macrophage migration inhibition factor;MIF-173G/C polymorphism;psoriasis

R 758.63

A

1002－7386(2015)03－0331－03

2014－09－18)

10.3969/j.issn.1002－7386.2015.03.002

445000湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院皮肤科(周发琼、雷淑英);武汉大学人民医院检验科(吴明珠)