黑参提取物体内抗肿瘤作用研究

袁 媛，甘 雨，王 菲，黄 赫，杜佳林，李显华

（辽宁省中医药研究院，辽宁 沈阳 110034）

肿瘤是威胁人类健康的重大疾病之一，目前放化疗抑制肿瘤的同时对人体有很大的伤害。较多的研究报道表明人参的抗肿瘤作用明显，红参的抗肿瘤活性优于人参。为探讨黑参的抗肿瘤活性，笔者通过实体瘤S180生长的抑制作用、HepA肝癌腹水瘤的生命延长作用以及免疫功能调整作用，对黑参提取物、红参提取物的抗肿瘤活性进行了比较，确定了黑参的抗肿瘤疗效。

1 实验材料

动物与瘤株：昆明种小鼠270只，体质量18～22g，雌雄各半，购自辽宁长生生物技术有限公司，许可证号SCXK（辽）2010-0001。S180瘤株、HepA肝癌腹水瘤均购于上海轩研生物科技有限公司。

仪器：超净工作台（型号class Ⅱ TYPE A2 BSC系列生物安全柜，北京东联哈尔仪器制造有限公司生产）。

药品：消癌平（南京圣和药业有限公司生产，生产批号201304241），环磷酰胺（通化茂祥制药有限公司生产，生产批号130201），黑参提取物（低、中、高剂量）自制得到[1，2]，红参提取物（低、中、高剂量）自制得到。

2 实验方法[3，4]

2.1 实体瘤S180抑瘤作用

荷瘤小鼠造模。将S180瘤株用生理盐水以1000r/min经10min离心洗涤2次后，洗掉细胞中胰蛋白酶和培养液中血清等成分，用台盼蓝染色法计数活细胞数，用生理盐水将肿瘤细胞稀释成1×106～1×107浓度，进行传代。无菌条件下取S180腹水瘤小鼠，抽取传代第8日的荷瘤小鼠的腹水置于盛有生理盐水的带塞试管中，按瘤株与生理盐水1∶3稀释，每个接种点以0.2mL，1×106～1×107个细胞数，用1mL的皮下注射器注射接种到右前肢腋窝处腋下部皮下，共90只，整个操作于30min内完成。

给药及计算抑瘤率。接种24h后将小鼠按体质量随机分为9组，每组10只。环磷酰胺西药对照组，给药浓度为25mg/kg；消癌平中药对照组，给药浓度为25mg/kg；6个给药组分别给予红参、黑参提取物低、中、高剂量，折合生药量分别为13.6mg/kg、27.2mg/kg和40.8mg/kg；模型对照组给予同体积的蒸馏水。以上各组均为灌胃给药，0.8mL/20g，1日1次，连续给药10日，荷瘤小鼠末次给药24h后称体质量，脱臼处死，剥离取下腋下肿瘤并用滤纸吸干，立即称取瘤重，计算抑瘤率，进行疗效评价。计算公式为肿瘤生长抑制率（%）=（空白对照组平均瘤质量－给药组平均瘤质量）/空白对照组平均瘤质量×100%。

2.2 HepA肝癌腹水瘤生命延长作用

荷瘤小鼠造模。无菌条件下抽取传代第8日的荷瘤小鼠的腹水置于盛有生理盐水的带塞试管中，按瘤株与生理盐水1∶3稀释，作为HepA小鼠肝癌腹水瘤细胞悬液。用一次性注射器或经高压消毒的注射器吸取HepA小鼠肝癌腹水瘤细胞悬液0.2mL，于经碘酊、乙醇消毒过的腹部皮肤作腹腔注射。共90只，整个操作于30min内完成。

给药及计算生命延长率。接种24h后将小鼠按体质量随机分为9组，每组10只。环磷酰胺西药对照组，给药浓度为25mg/kg；消癌平中药对照组，给药浓度为25mg/kg；6个给药组分别给予红参、黑参提取物低、中、高剂量，折合生药量分别为13.6mg/kg、27.2mg/kg和40.8mg/kg；模型对照组给予同体积的蒸馏水。以上各组均为灌胃给药，0.8mL/20g/次/日，连续给药10日，荷瘤小鼠末次给药24h后称重，从第11天开始停止给药，继续饲养观察，在观察期间记录小鼠的一般情况（饮食、外观、行为、分泌物、排泄物、中毒表现和死亡情况等）。计算存活时间及生命延长率。计算公式为生命延长率（%）=（给药组平均生存时间－空白对照组平均生存时间）/空白对照组平均生存时间×100%。

2.3 免疫功能调整作用

将接种S180瘤株24h的小鼠按体质量随机分为9组，每组10只。环磷酰胺西药对照组，给药浓度为25mg/kg；消癌平中药对照组，给药浓度为25mg/kg；6个给药组分别给予红参、黑参提取物低、中、高剂量，折合生药量分别为13.6mg/kg、27.2mg/kg和40.8mg/kg；模型对照组给予同体积的蒸馏水。以上各组均为灌胃给药0.8mL/20g，日1次，连续给药10日，荷瘤小鼠末次给药24h后称重，断尾取血，测白细胞数。之后处死小鼠，摘取胸腺、脾脏称重，计算胸腺指数、脾脏指数。计算公式为胸腺指数=（胸腺质量/小鼠质量）×10，脾脏指数=（脾脏质量/小鼠质量）×10

2.4 统计分析

采用spss软件对数据进行处理，数据以（±s）表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 实验结果

各组对S180实体瘤抑制作用见表1。

表1 各组对S180实体抑瘤作用

各组对HepA肝癌腹水瘤的生命延长作用见表2。

表2 各组对HepA肝癌腹水瘤生命延长

各组免疫功能调整作用见表3。

表3 各组胸腺及脾脏指数比较

4 讨 论

常规化疗药物多为细胞毒性药物，在杀伤瘤细胞同时也损害机体的免疫系统，而免疫功能低下又可促进肿瘤的发生和发展，因此肿瘤的发生与机体的免疫状况密切相关。因此，通过用一些增强免疫功能的药物可使肿瘤消退或延缓其发展。

人参（Panax ginseng C.A.Meyer）为五加科植物人参的干燥根，是亚洲常见药材，具有很高的药用和历史文化价值，被誉为“草药之王”，在科学研究领域和国际市场一直占有极其重要的地位，被广泛应用。其性平，味甘、微苦，微温，用于大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津止渴、安神益智。现代临床医学和药理学研究表明，人参具有提高机体免疫力、抗疲劳、抗肿瘤、降血糖以及抗炎等多种活性，在医学及养生方面具有可观的价值。近年来，各种各样的人参炮制品作为功能食品用于饮食，其中包括白参、红参、黑参等。黑参是利用传统的九蒸九曝炮制方法将人参反复蒸制烘干而得到的一种人参深加工品，是继红参后的又一人参新产品[1]。黑参比白参和红参有更强的抗肿瘤、抗炎、提高免疫力等生物活性。实验表明，黑参高剂量组可以抑制荷瘤小鼠S180实体瘤肿瘤生长，延长HepA肝癌腹水瘤小鼠的存活时间，改善免疫功能指标。提示黑参在抗肿瘤以及肿瘤免疫调节方面具有进一步研究和开发的价值。

[1] 袁媛，徐荣培.人参新炮制品—黑参的研究进展[J].中华中医药学刊，2013，31（11）：2379-2381.

[2] 袁媛，于艳，徐荣培.HPLC法测定19个人参新炮制品—黑参样品中的人参皂苷含量[J].辽宁中医杂志，2013，40（10）：1993-1995.

[3] 徐淑云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2002：1766.

[4] 陈奇.中药药理研究方法学[M].2版.北京：人民卫生出版社，2006：1006.