奥硝唑片有关物质检查方法建立

路胜

哈药集团生物工程有限公司

奥硝唑片有关物质检查方法建立

路胜

哈药集团生物工程有限公司

目的：建立奥硝唑片有关物质检查方法，使奥硝唑与各杂质峰可有效分离。方法采用高效液相色谱法,采用0.01mol/L的磷酸氢二钾溶液：甲醇（70：30）为流动相，采用Allitima C18（3.5μm，4.6×200mm）为检测色谱柱,流速为1.0ml/min,检测波长为318nm,柱温为30℃。结果奥硝唑与起始物料及中间体（2-甲基-5硝基咪唑，2-甲基-5-硝基-1-(2，3．二羟基丙基)咪唑）均可有效分离，主峰与各破坏条件下所产生杂质峰可有效分离，主峰纯度符合规定，物料平衡。结论：所建立的有关物质检查方法准确可行,可用于奥硝唑片的有关物质检查，可有效控制产品质量。

奥硝唑片；有关物质；高效液相色谱法

奥硝唑在临床上应用广发，主要用于治疗敏感厌氧菌所引起的腹部、盆腔、口腔、外科和脑部等部位的多种感染性疾病，口服固体制剂因疗效确切被广泛应用。奥硝唑片质量控制方面虽对有关物质进行考察，但并未对起始物料及中间体进行控制，这样存在安全隐患，检索奥硝唑国内外药典标准，印度药典收载奥硝唑原料及奥硝唑片标准，参照相关文献[1-5]，结合奥硝唑合成工艺，本文采用高效液相色谱法测定奥硝唑片有关物质，所建立方法可有效控制产品质量。

1.试验材料

奥硝唑粗品、奥硝唑原料、奥硝唑片、2-甲基-5硝基咪唑、2-甲基-5-硝基-1-(2，3．二羟基丙基)咪唑，色谱柱：AllitimaC18（3.5μm，4.6×200mm），Agilent 1260型高效液相色谱仪（DAD检测器）。

2.方法与结果

2.1 色谱条件

采用高效液相色谱法,色谱柱为Allitima C18（3.5μm，4.6× 200mm）,流动相为0.01mol/L的磷酸氢二钾溶液：甲醇（70：30）溶液，流速为1.0ml/min,检测波长为318nm。理论塔板数不低于5000，杂质与主峰分离度应不低于3.5。

2.2 杂质分离情况考察

取奥硝唑粗品，加流动性制成含奥硝唑1mg/ml的溶液，按照上述色谱条件进样，结果各杂质峰与主峰有效分离，主峰峰纯度符合规定，奥硝唑粗品单一杂质约为0.1%，总杂质约为0.8%，另取奥硝唑片辅料、各已知杂质，按照所确定色谱条件进样，结果辅料不干扰有关物质测定，各已知杂质与主峰有效分离。

2.3 样品溶液制备

称取奥硝唑供试品适量，用流动相制成浓度为1mg/ml的溶液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1.0ml于100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照品溶液。

2.4 相对相应因子测定

奥硝唑制剂中主要杂质为该杂质为制剂主要降解产物，也为代谢主要产物。为方便控制该杂质量，对该杂质与奥硝唑相对响应因子进行研究。取奥硝唑对照品、2-甲基-5硝基咪唑及2-甲基-5-硝基-1-(2，3．二羟基丙基)咪唑各适量，制成系列浓度溶液，根据标准曲线斜率之比，计算二者相对响应因子，结果2-甲基-5硝基咪唑及2-甲基-5-硝基-1-(2，3．二羟基丙基)咪唑与奥硝唑的相对相应因子分别为0.81与1.57，在杂质计算时应按照相对相应因子进行计算。

2.5 方法验证

通过二极管阵列检测器监测有关物质检出情况，结果318nm为最佳检测波长。

检测限：取奥硝唑对照品，制成系列浓度溶液，进样，当浓度为1.5ng/ml时信噪比为4.5：1，检测限溶液浓度与供试品溶液浓度之比为0.00015，说明供试品溶液可行，可有效检出杂质。

溶液稳定性试验：取供奥硝唑试品溶液及对照溶液，分别于0、2、4、6、8小时进样，评价供试品溶液及供试品溶液的稳定性，供试品溶液在8小时无新杂质峰产生，各杂质峰无明显变化，对照品溶液峰面积无变化，说明溶液在8小时内稳定，供试品溶液8小时内杂质个数及总杂质见表1。

表1 溶液稳定性结果

耐用性试验：改变检测波长、更换相同品牌不同批号的色谱柱、改变流速及流动相比例，考察杂质检出情况，结果在各色谱条件下有微小变化时，杂质检出基本一致，耐用性好。

专属性：取奥硝唑片对照品，对供试品进行酸、碱、氧化、高温（固体及溶液）及强光破坏试验，使用DAD检测器，全波长监测，考察各种破坏条件下杂质检出情况。结果318nm为本品最佳监测波长，确定供试品检测波长为318nm，供试品在各条件下降解产物约为5%，杂质与主峰可有效分离，峰纯度符合规定，2-甲基-5硝基咪唑为主要降解产物，各破坏条件下物料平衡。各条件下塔板数及分离度符合规定。

2.6.样品检查

取奥硝唑片供试品，按照确定方法进行有关物质检查，结果2-甲基-5硝基咪唑约为0.2%，其它未知杂质小于0.1%，总杂质约为0.3%。

3.结论

所建立有关物质检查方法可行，对已知杂质采用相对相应因子计算杂质含量，更准确可靠。2-甲基-5硝基咪唑为主要代谢产物，毒性小，制剂中该杂质为0.2%左右，较安全。

[1]奥硝唑片药品标准（印度药典）：1824-1825.

[2]杜加秋，何佳佳，朱培曦，郑国钢.奥硝唑氯化钠注射液中有关物质的HPLC法测定.中国医药工业杂志，2014年第7期：684-686.

[3]何佳佳，朱培曦，郑国钢.奥硝唑氯化钠注射液主要杂质的结构鉴定[J]．药物分析杂志，2012，32(10)：1822-1825．

[4]欧年春，彭艳梅，郭英球.高效液相色谱法测定奥硝唑片中奥硝唑和有关物质的含量.中南药学，2011年第9卷第8期：585-586.

[5]赵雨娜.高效液相色谱法测定奥硝唑片有关物质.黑龙江科技信息，2013年第3期：1.

路胜（1981-），男，黑龙江省哈尔滨市，本科毕业，哈药集团生物工程有限公司，化验员，工程师。