ABCB1基因位点（C3435T）多态性与癫痫耐药关联性的Meta分析

彭 锐 张 洪 张 英 魏丹芸武汉大学人民医院药学部，湖北武汉 430060

癫痫是慢性反复发作性短暂脑功能失调综合征，以脑神经异常放电引起反复痫性发作为特征，是神经系统常见疾病之一。研究人员对流行病学调查结果显示，国外癫痫发作率为3.3‰～7.8‰，年发病率为0.43‰～0.47‰。研究人员对国内部分省份的流行病学调查表明，癫痫的年发病率为0.288‰，患病率为2.1‰～7.8‰，活动性癫痫的患病率为4.6‰[1-3]。目前，癫痫在神经疾病中已成为第二大常见疾病，最常见的是脑血管病。

近几十年，关于癫痫耐药机制的研究，目前主要有两种阐明机制，即“药物靶点学说”和“多药转运体学说”[4]。前者机制阐述了抗癫痫药物（AEDs）主要通过影响Na+、Ca2+和K+等离子通道，GABA受体，谷氨酸受体等神经递质受体或者与神经递质释放有关等方面发挥作用。一旦相应靶点发生结构和功能改变，会引起该药疗效发生变化[5]。但是，临床医生经常观察发现一些患者对服用某种AED后，并没有发挥良好的疗效，而且对绝大多数AEDs均会表现出耐药现象，并且这些AEDs的分子结构和体内作用机制不同，“药物靶点学说”无法解释这种情况。经过更多的研究表明，“多药转运体学说”或许是另外一种作用机制诱导癫痫患者对各种AEDs耐药，学说阐述某些基因及其编码蛋白产物可能与癫痫的耐药性相关。

ABC转运蛋白家族 （ATP binding cassette transporter super family）是一大类跨膜蛋白，其主要功能是利用ATP水解产生的能量将与其结合的底物包括化学物质和药物等主动泵出细胞外。ABC家族主要包括P-pg、乳腺癌耐药蛋白等，均具有药物排出泵的功能。药物转运是给药后个体差异及药物相互作用的重要环节之一，也是导致多药耐药的因素。P-pg是人体内重要的转运蛋白，分布广泛，参与多种内（外）源性物质的吸收、分布以及分泌排泄。P-pg是由人类ABCB1基因（也称多耐药基因MDRI）编码的，已经报道了ABCB1存在基因多态性，其中C1236T、G2677T/A和G3435T最大影响ABCB1基因表达和蛋白结合能力。近年来研究发现，ABCB1基因及其编码的P-糖蛋白与癫痫多药耐药有关[6-8]。

1 资料与方法

1.1 纳入与排除标准

符合如下标准的文献被纳入：①主题为研究ABCB1基因C3435T位点多态性与癫痫耐药性的关联性；②研究类型为抗癫痫药耐药-抗癫痫药敏感的随机对照试验；③能提取完整ABCB1 C3435T位点多态性基因频率；④如发现疑似重复发表或抄袭的文献，核实后纳入资料最为完整的一篇。以下情况文献将被排除：①经过多种途径仍无法获取全文或主要数据资料；②重复发表的文献。

1.2 检索策略

计算机检索 Pubmed、Science direct、Wiley online library、Web of Science、中国知网、万方数据库和维普中文科技期刊数据库建库至2014年6月15日公开发表的文献，同时查阅检索结果中所附相似文献及参考文献。英文检索策略为：（“antiepileptic drug resistant”OR “epilepsy”）AND （“ABCB1” OR “SNP3435” OR“C3435T”）；中文检索为：（抗癫药物耐药 OR 癫痫）AND（ABCB1 OR SNP3435 OR C3435T基因多态性）。

1.3 文献筛选

由两名研究者按照上述纳入与排除标准采用Note Express软件独立进行筛选，并交叉核对，如有分歧则交与第三名研究者提供指导意见并商定。

1.4 资料提取

资料提取工作由两名评议员独立进行，提取内容包括：第一作者姓名、发表年份、研究国家、研究地区、研究人种、耐药组-敏感组各基因型频率、基因检测方法及哈迪温伯格平衡检测P值。由第三名研究者核对数据并纠正可能存在的差错。

1.5 哈迪-温伯格平衡检测

如原文中未提供或未进行哈迪-温伯格遗传平衡检测，研究组利用常见的Excel软件对哈迪-温伯格平衡进行分析，提取并分析其对应检测结果。

1.6 统计学方法

本研究利用常用的5种基因模型对ABCB1的基因位点（C3435T）多态性与癫痫耐药进行Meta分析；Meta分析采用RevMan 5.0软件，计算其OR及95%可信区间 （CI），绘制漏斗图来判断是否存在发表偏倚。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 文献检索及筛选结果

根据检索策略，最初检索出中英文文献76篇，通过阅读标题、摘要及全文，最终筛选出10篇[9-18]研究纳入Meta分析，其中，中文文献4篇[9-12]，英文文献6篇[13-18]，检索及筛选流程见图1。

图1 文献筛选流程及结果

2.2 资料提取结果

根据以上规定资料提取文献中相关信息，提取结果见表 1、2。

表1 关于癫痫耐药与ABCB1（C3435T）基因位点多态性的相关性研究文献摘要信息资料

2.3 Meta分析

本文以C表示野生型基因，T表示突变型基因，选取5种主要的基因模型进行Meta分析，分别为等位基因模型（C/T）、显性模型（CC/CT+TT）、隐形模型（CC+CT/TT）、共显性模型（CC/CT 和 CC/TT）以及超显性模型（CC+TT/CT）。

2.3.1 ABCB1 C3435T基因位点的5种基因模型异质性分析

固定效应模型下，ABCB1 C3435T基因位点的5种基因模型结果的整体异质性的定量定性值分别为：等位基因模型下I2=34%，P=0.14；显性基因模型下I2=25%，P=0.22；隐形基因模型下 I2=32%，P=0.16；共显性基因模型下CC/CT I2=32%，P=0.16、CC/TT I2=26%，P=0.20；超显性基因模型下I2=43%，P=0.13。可见所有模型异质性较小，因此均可选用固定效应模型。考虑到种族和环境对基因多态性有一定的影响，本文以文献所在地区对其进行亚组分析。而土耳其、马来西亚和日本分别仅有1篇文献，无法判断其异质性。

表2 癫痫耐药与ABCB1（C3435T）基因位点多态性的相关性研究基本信息资料（例）

2.3.2 ABCB1 C3435T基因位点的5种基因模型显著性分析

2.3.2.1 等位基因模型 统计学显著性结果表示，整体P=0.0007，z=3.40，差异有统计学意义；行亚组分析显示，仅在印度地区，结果差异有统计学意义（P=0.01，z=2.25）， 合 并统 计学 效 应 量 ORIndia=0.70，95%CI（0.54，0.93）；而在中国北部，结果差异无统计学意义（P=0.20，z=1.29），在中国南部结果差异也无统计学意义（P=0.86，z=0.17）。 森林图见图 2。

2.3.2.2 显性模型 统计学显著性结果表示，整体P=0.007，z=2.71，差异有统计学意义；行亚组分析显示，仅在印度地区，结果差异有统计学意义（P=0.007，z=2.69），合并统计学效应量 ORIndia=0.44，95%CI（0.24，0.80）；而在中国北部，结果差异无统计学意义 （P=0.18，z=1.34），在中国南部结果差异也无统计学意义（P=0.77，z=0.29）。森林图见图3。

图2 等位基因模型结果亚组分析森林图

2.3.2.3 隐形模型 统计学显著性结果表示，整体P=0.005，z=2.83，差异有统计学意义；行亚组分析显示，各地区差异均无统计学意义（P＞0.05）。森林图见图4。

图3 显性模型结果亚组分析森林图

图4 隐性模型结果亚组分析森林图

2.3.2.4 共显性模型 共显性基因模型下有CC/CT和CC/TT两组比较。统计学结果表示，CC/CT组整体合并效应差异无统计学意义（P=0.06，z=1.86）；行亚组分析显示，仅在印度地区，结果差异有统计学意义（P=0.02，z=2.38）， 合并统计学效应量 ORIndia=0.47，95%CI（0.26，0.88）；而在中国北部，结果差异无统计学意义（P=0.27，z=1.11），在中国南部结果差异也无统计学意义（P=0.60，z=0.53）。森林图见图 5。CC/TT 组整体合并效应差异有统计学意义（P=0.002，z=3.08）；行亚组分析显示，仅在印度地区差异有统计学意义（P=0.005，z=2.81）， 合 并 统 计 学 效应 量 ORIndia=0.40，95%CI（0.21，0.76）；而在中国北部和南部差异均无统计学意义（P＞0.05）。森林图见图6。

2.3.2.5 超显性模型 超显性模型下整体P值为0.85，各个亚组整体P值均＞0.05，差异无统计学意义，见图7。

2.3.3 敏感性分析

本研究将不符合遗传平衡（P＜0.05）的文献[15]剔除后将每种基因模型进行敏感性分析（RevMan 5.0软件无此功能，借用其他研究人员的StataSE 12.0软件进行分析），发现每种基因模型下整体效应结果与前文一致，提出本研究得出的结果较为稳定，敏感性分析结果见表3。

2.3.4 发表偏倚

选取显性模型绘制的漏斗图，如图8所示，研究大多分布在漏斗顶端，并且相对较为对称，提示本研

图5 共显性模型CC/CT结果分析森林图

图6 共显性模型CC/TT结果分析森林图

图7 超显性模型结果分析森林图

表3 各种基因模型敏感性分析结果

究发表偏倚较小（对应的显性模型森林图为图3）。

图8 显性模型结果漏斗图

3 讨论

ABCB1基因存在多个单核苷酸多态性，其中最常见的是C1236T、G2677T/A和G3435T三个突变位点，本文分析了亚洲地区G3435T位点多态性和癫痫耐药的关系，并没涉及到其他地区一方面是文章不符合纳入标准，另一方面相关研究较少。ABCB1基因多态性是导致个体间药物疗效差异的主要原因，也是产生耐药的主要原因，因为其编码蛋白P-pg在细胞中的过表达，致使细胞内药物转运出速率加快，药物浓度降低，达不到治疗效果，从而产生耐药。

本次Meta分析的异质性均较低，提示结果可信度很高。漏斗图提示ABCB1 C3435T基因位点无发表偏倚。在等位基因模型、显性模型、隐性模型、共显性模型（CC/TT组）下，ABCB1 C3435T基因位点与癫痫耐药有明显相关性。印度北部和南部地区该基因位点在本研究中表现出明显统计学相关性。虽然中国北方和南方地区在该基因位点研究的文献分别有3篇[7，8，15]、2 篇[6，9]，但是未表现出明显统计学相关性，因此该基因位点突变与癫痫耐药无关联性。对于日本、土耳其和马来西亚，因为纳入的文献只有1篇，不能提供有效的证据，代表性不强，因此不能认为在这些国家人口中，ABCB1 C3435T位点多态性与癫痫耐药的形成有关联性。

本次研究虽然有严格的文献检索及纳入标准，但仍存在一些不足：其一，由于目前还没有一个专门针对基因多态性Meta分析的质量评价清单，无法有效的评估纳入研究的质量；其二，部分地区的文献数目过少，比如日本、土耳其和马来西亚三个国家仅仅纳入1篇相关文献，且缺乏灰色文献（如专题讨论会记录、未发表的资料、政府研究报告和其他非传统文献来源的证据），导致证据不足，这些对整体证据级别可能会产生一定负面影响。因此，尚需多中心、大样本、高质量的随机对照研究来获得更为可靠的结论，进一步证实ABCB1 C3435T位点基因多态性与癫痫耐药的关联。

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