HPLC法测定不同厂家牛黄解毒片中黄芩苷的含量

薛胜利 孟娜娜 李 珂

(泰山医学院药学院，山东泰安271016)

HPLC法测定不同厂家牛黄解毒片中黄芩苷的含量

薛胜利 孟娜娜 李 珂

(泰山医学院药学院，山东泰安271016)

目的建立HPLC法测定不同厂家牛黄解毒片中黄芩苷的含量。方法采用HPLC法检测牛黄解毒片中黄芩苷的含量，色谱条件:色谱柱:Diamonsil C18柱(250 nm×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇-水-磷酸(50：50：0.2)，流速:0.8 ml/min;检测波长:280 nm;柱温:20℃。进样量:20 μl。结果黄芩苷在浓度为0.02～0.16 mg/ml内峰面积呈良好的线性关系(r=0.9990)，回收率分别为92.04%、94.10%和96.24%，RSD≤2.27%(n=3);不同厂家牛黄解毒片中黄芩苷的含量从0.98%到2.49%不等。结论HPLC法操作简便、灵敏，具有良好的重复性和稳定性，可用于牛黄解毒片中黄芩苷的质量控制。

牛黄解毒片;黄芩苷;不同厂家;高效液相色谱法;含量测定

牛黄解毒片为《中国药典》2010年版一部收载品种，为临床常用中成药，由牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草等8味药物组成，临床用于治疗火热内盛、咽喉肿痛、牙龈肿痛、口舌生疮、目赤肿痛［1］。黄芩为常用传统中药，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎的功效，所含的黄岑苷是黄芩及其制剂的主要质控指标成分，据药理学研究报道，黄岑苷具有抗微生物、抗变态反应、降压和镇静、利胆和

解痉等作用［2-3］。本实验采用高效液相色谱法［4］对牛黄解毒片中黄芩苷的含量进行测定，方便易行，能消除杂质干扰，准确度高，测定结果准确，可靠;因此可作为监测和控制该制剂质量的含量指标［5］。同时又对多个不同厂家牛黄解毒片中黄芩苷的含量进行测定［6］，结果显示在0.98%到2.49%，差距很大。因此应当完善牛黄解毒片的质量控制标准。

1 实验材料

1.1 仪器日本岛津高效液相色谱仪(岛津国际贸易有限公司)双泵，六通阀进样器。DP-01型不锈钢真空泵，KQ-500E超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，GR-202电子分析天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)，台式高速离心机(上海安亭科学仪器厂)，微孔滤膜(上海市新亚净化器件厂)，注射器(康利医疗器械有限公司)。

1.2 药品与试剂黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110715-200815)，甲醇(色谱纯，天津市凯通化学制剂有限公司)，水(娃哈哈纯净水)，磷酸(分析纯，天津四通化工厂)，天津同仁堂牛黄解毒片(批号Z12020021)，山东中泰药业牛黄解毒片(批号Z13020331)，广西广明药业牛黄解毒片(批号Z45021310)。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品10 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解，并稀释到刻度，摇匀，超声振荡使充分溶解，配制成1 mg/ml的溶液，作为对照品储备液。

2.2 供试品溶液的制备取牛黄解毒片20片，研细，称取适量，置于容量瓶中，加甲醇至刻度，称重。超声提取30 min，补足减失的重量，摇匀，5000 r/ min离心15 min，取上清液，即得所需浓度的供试品溶液。

2.3 色谱条件及系统适应性试验色谱柱:Diamonsil C18柱(250 nm×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇-水-磷酸(50：50：0.2)，流速:0.8 ml/min;检测波长:280 nm;柱温:20℃。进样量:20 μl。取黄芩苷对照品和牛黄解毒片样品溶液各20 μl进样，记录色谱图，见图1、2。本实验条件下，黄芩苷与样品中其他成分达到基线分离，分离度大于1.5，理论塔板数大于2000。

图1 黄芩苷的紫外吸收光谱

图2 溶媒(A)、黄芩苷标准品(B)与黄芩苷样品(C)的HPLC色谱图

2.4 线性关系的考察精密量取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.6 ml的标准品储备液，置于10 ml容量瓶，配制成浓度为0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.12、0.16 mg/ml的对照品溶液。分别量取20 μl进样，每种浓度的溶液连续进样三次，记录峰面积。以峰面积对进样浓度进行线性回归。得回归方程A =3E+07C-128720，r=0.9990。结果表明，在此色谱条件下，黄芩苷在浓度为0.02～0.16 mg/ml与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验取0.9 ml的标准品储备液，置于10 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。每次进样20 μl，连续进样5次。测定峰面积，RSD(%)= 1.42%，表明仪器的精密度良好。

2.6 稳定性试验取同仁堂牛黄解毒片作为供试品进行稳定性试验，取一定质量样品粉末，置于25 ml容量瓶中，按“2.3.2”项样品处理方法处理，配制成样品溶液，室温下避光放置。分别在0、1、2、4、6、8、10小时进样，记录峰面积。RSD(%)=1.97%，结果表明供试品溶液在10小时内常温避光条件下基本稳定。

2.7 重复性试验取6份不同质量的药品粉末，分别置于25 ml容量瓶中，按“2.3.2”项方法处理，按上述色谱条件进样测定。结果RSD(%)=1.91(n =6)，表明该方法的重现性良好。

2.8 回收率试验取10份供试品，每份约15 mg，分别置于5 ml棕色容量瓶中。标号0为空白组，1、2、3为第一组，4、5、6为第二组，7、8、9为第三组。向第一组各瓶中加入标准品的储备液310 μl，向第二组的各瓶中加入标准品储备液390 μl，向第三组各瓶中加入标准品储备液470 μl，用甲醇稀释至刻度，然后振荡，离心。取上清液进样，每次进20 μl，重复进样3次，记录峰面积的平均值。结果见表1。

表1 回收率试验

2.9 样品含量测定分别取3个厂家的牛黄解毒片，置于25 ml容量瓶中，按“2.3.2”项样品处理方法配制样品溶液，每种溶液进样3次，进样量为20 μl，测定峰面积。结果见表2。

表2 样品含量结果

3 讨论

本实验固定相为反相色谱柱，流动相采用甲醇与水的混合溶液。实验首先选择甲醇与水的比例为2：8，保留时间太长。所以应该增加流动相的极性，减小保留时间。依次增加甲醇的比例到1：1，保留时间较为合理且样品分离度良好。由于此时泵压力太大，只能调节流速为0.8 ml/min。黄芩苷为弱酸性物质，加入磷酸可以减少其在色谱柱中的解离，降低色谱峰的宽度和拖尾。

黄芩是牛黄解毒片的重要成分，其有效成分的含量直接影响着药品的质量，临床用药的疗效。此项研究参考黄芩苷含量测定的方法，对牛黄解毒片中黄芩苷的含量进行了测定，操作方法简便、灵敏，具有良好的重复性和稳定性，可用于牛黄解毒片中黄芩苷的质量控制。同时运用HPLC法测定不同厂家牛黄解毒片中黄芩苷的含量，测定结果显示三个不同厂家的数值不相同，其含量在0.98%～2.49%之间，相差较远，这势必会对临床疗效产生一定的影响。因为作为有效成分之一的黄芩苷没有含量标准，无法更全面地控制市场流通渠道中牛黄解毒片的质量，更好地保证药品的质量及其临床的疗效。

［1］宋立人，洪询，丁绪亮，等.现代中药学大辞典［M］.北京:人民卫生出版社，2001:1865-1869.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京:化学工业出版社，2005:387.

［3］张建春，张华，施瑛，等.黄芩苷的研究近况［J］.时珍国医国药，2005，16(3):247-249.

［4］吴丽群.HPLC法测定牛黄解毒片中黄芩苷的含量［J］.海峡药学，2003，20(4):124.

［5］黄海欣.牛黄解毒片中黄芩苷含量测定限度规定的商榷［J］.中国药品标准，2003，18(6):158.

［6］朱梅，尉建伟.几种不同厂家牛黄解毒片的质量分析［J］.中国药业，2005，17(2):289-291.

Determination of Baicalin in Niuhuang Jiedu Tablets from different drug manufacturers by HPLC

XUE Sheng-li MENG Na-na LI Ke
(School of Pharmacy，Taishan Medical University，Taian 271016，China)

Objective:To establish a high performance liquid chromatographic(HPLC)method for the determination of baicalin in Niuhuang Jiedu Tablets from different drug manufacturers.Methods:The HPLC separation was performed on a Diamonsil C18 column(5m，250nm 4.6mm)，with a mobile phase as Methanol-water-phosphoric acid(50：50：0.2)at a flow rate of 0.8mL/min.The detection wavelength was 280 nm and the column temperature was 20℃.The injection volume was 20μl.Resluts:The method showed a good linearity of the Baicalin in the range of 0.02-0.16mg/ml(r= 0.9990).The recovery was 92.04%，94.10%and 96.24%，RSD≤2.27%(n=3).The baicalin in Niuhuang Jiedu Tablets from different drug manufacturers were different from 0.98%to 2.49%.Conclusion:This method is simple and rapid with repeatability and stability.It is suitable for the quality contorl of baicalin in Niuhuang Jiedu Tablets.

Niuhuang Jiedu Tablets;baicalin;different drug manufacturers;HPLC;determination

R917

A

1004-7115(2015)01-0061-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2015.01.021

2014-10-03)

薛胜利(1990-)，男，泰山医学院药学院2010级药学(临床药学方向)专业学生。通讯作者:李珂(1978-)，女，副教授，主要从事药物分析的教学及科研工作。