芪柴煎剂对变应性鼻炎大鼠血清IL-4,IFN-γ影响的实验研究

胥彪，胡文健

（达州市中西医结合医院耳鼻咽喉头颈外科，四川达州635000；1泸州医学院附属中医医院耳鼻咽喉科，四川泸州646000）

芪柴煎剂对变应性鼻炎大鼠血清IL-4,IFN-γ影响的实验研究

胥彪，胡文健1

（达州市中西医结合医院耳鼻咽喉头颈外科，四川达州635000；1泸州医学院附属中医医院耳鼻咽喉科，四川泸州646000）

目的：研究芪柴煎剂（自拟方）对变应性鼻炎大鼠模型血清IL-4、IFN-γ的影响，探讨其对变应性鼻炎大鼠的作用疗效。方法：应用卵清蛋白将实验大鼠制作成变应性鼻炎模型，随机分为正常对照组（A组）、芪柴煎剂低剂量组（B组）、高剂量组（C组）、地氯雷他定组（D组）、模型对照组（E组）各8只。连续14 d分别给予对应的药物，A组、E组以蒸馏水替代。用双抗体夹心ELISA法检测血清IL-4、IFN-γ的含量。结果：各实验组血清IL-4含量较模型对照组明显偏低，差异均有统计学意义（P＜0.05）；芪柴煎剂低剂量组IL-4含量高于芪柴煎剂高剂量组，差异有统计学意义（P＜0.05）。各实验组血清IFN-γ含量高于模型对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；芪柴煎剂低剂量组、地氯雷他定组IFN-γ含量低于高剂量组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：芪柴煎剂能够下调变应性鼻炎大鼠血清IL-4水平；上调IFN-γ水平。

IL-4；IFN-γ；变应性鼻炎大鼠模型；芪柴煎剂

变应性鼻炎作为一种临床常见病，严重影响了患者的生活质量[1]。临床应用芪柴煎剂方，治疗肺脾气虚、肝郁气滞证型鼻鼽，获得了肯定的临床疗效[2]。但其有效的作用机制和途径不甚明确，因此我们试图运用现代医学的方法揭示其治疗变应性鼻炎的作用机制，旨在为临床使用芪柴煎剂治疗变应性鼻炎提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要药物和试剂

1.1.1 主要药物

芪柴煎剂，其主要组成药物为：黄芪、防风、白术、石菖蒲、细辛、苍耳子、五味子、白芍、桂枝、辛夷、薄荷、柴胡。由达州市中西医结合医院制剂室制备。

地氯雷他定片，5 mg×7片，国药准字：H20020091，深圳市海滨制药有限公司。

1.1.2 主要试剂

IFN-γ试剂盒：美国RD公司产品，批号201308；IL-4试剂盒：美国RD公司产品，批号201308；氢氧化铝粉末：天津津海化学试剂厂，货号H12020766；鸡卵白蛋白：美国sigma公司，货号A5253。

1.2 造模方法和模型评价标准

40只清洁健康级SD大鼠，雌雄各半，体重200士20 g，鼠龄6～7月。适应性喂养实验大鼠1周后，依据文献3建立变应性鼻炎动物模型的方法[3]。基础致敏：以9.6 mg卵清蛋白为抗原材料，佐以960 mg氢氧化铝粉末，加入32 mL生理盐水制成3%均匀混悬液，将混悬液注入实验大鼠腹腔，剂量为1 mL/只，隔日一次，共8次。鼻腔激发：基础致敏结束后第2 d用生理盐水配制成0.5%卵清蛋白溶液，以加样枪滴鼻行双侧鼻腔攻击，每侧50 μL，每日1次，连续7 d。空白对照组大鼠予以等量蒸馏水替代卵清蛋白溶液进行实验。末次鼻腔激发后，立刻观察30 min，记录大鼠鼻分泌物量、喷嚏及搔鼻次数，采用叠加量化记分法记分[4]。鼻痒：轻抓鼻几次1分，两者之间为2分，四处摩擦为3分。喷嚏：打1～3个喷嚏为1分，4～10个为2分，10个以上为3分。清涕：清涕少量为1分，涕过前鼻孔为2分，涕流满面为3分。总分超过5分为模型复制成功。1.3实验动物分组给药

造模成功后，按随机数字表法将造模成功后的大鼠分为空白对照组（A组）、芪柴煎剂低剂量组（B组）、芪柴煎剂高剂量组（C组）、地氯雷他定组（D组）、模型对照组（E组）。从实验第23 d开始，用制剂室预先制备好的芪柴煎剂（浓缩后5 mL煎剂相当于5 g生药）对实验大鼠灌胃，剂量参考按照《药理实验方法学》人与动物等效剂量换算方法[5]，人与大鼠药物按每公斤体重剂量之比约为1∶10，灌胃时间为两周。各组大鼠药物用量如下：A组（正常对照组）给予蒸馏水每鼠2 mL/d，B组（低剂量组）予以芪柴煎剂每只大鼠4 g/（kg/d）(生药量)，约相当于正常剂量的一半；C组（高剂量组）给予芪柴煎剂每鼠8 g/( kg/d)，约相当于常规剂量；D组（地氯雷他定对照组）给予地氯雷他定1 mg/(kg/d)，E组给予蒸馏水每鼠2 mL/d。

1.4 实验动物标本制备

给药2周后，用10%水合氯醛腹腔注射麻醉实验大鼠，用量为0.3～0.4 mL/100 g，麻醉成功后，仰卧位固定于动物手术台，酒精消毒，打开胸腔，暴露大鼠心脏，用注射器取全血约2～3 mL于抗凝管中，保存于-20℃冰箱中，待行ELISA检测。

1.5 统计学方法

数据采用x±s表示，实验所得数据采用SPSS 19.0软件，组间均数应用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 实验结果

给药后大鼠症状明显改善，搔鼻、喷嚏次数减少，鼻腔清水样分泌物减少。高剂量、地氯雷他定组大鼠尤为明显，仅偶见个别大鼠鼻痒、喷嚏，均无清涕从前鼻孔流出，和正常对照组比较无明显的统计学意义（P＞0.05）。与模型对照组比较,各组大鼠鼻部症状积分偏低，差异明显，有统计学意义（P＜0.01），表1。

表1 给药后实验大鼠鼻部症状积分

2.2 大鼠血清IL-4含量比较

芪柴煎剂低剂量组（P＜0.05）、高剂量组（P＜0.01）、地氯雷他定组（P＜0.01）血清IL-4含量明显低于模型对照组，差异有统计学意义；芪柴煎剂低剂量组与芪柴煎剂高剂量组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），表2。

表2 实验大鼠血清IL-4含量比较

正常对照组（A）芪柴煎剂低剂量（B）芪柴煎剂高剂量（C）

地氯雷他定（D）模型对照组（E） 88888 55.34±15.77 218.65±45.03ab136.36±42.22ac173.44±49.47a262.64±32.11a

33.48

0.00

2.3 大鼠血清IFN-γ含量比较

芪柴煎剂低剂量组血清IFN-γ含量（P＜0.05）；芪柴煎剂高剂量组（P＜0.01）、地氯雷他定组（P＜0.01）血清IFN-γ含量明显高于模型对照组，差异有统计学意义；芪柴煎剂低剂量组与芪柴煎剂高剂量组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；芪柴煎剂高剂量组血清IFN-γ含量明显高于地氯雷他定组，差异有统计学意义（P＜0.05），表3。

表3 实验大鼠血清IFN-γ含量比较

3 讨论

大量研究表明导致变应性鼻炎的免疫学基础是Th1/Th2细胞间免疫反应失衡[6]。Th2分泌的主要特征因子IL-4，其主要功能为刺激B细胞，在体液免疫过程中引起速发（Ⅰ型）变态反应。从有症状到无症状的变应性鼻炎患者获取标本，于体外暴露变应原，可以观察到表达IL-4的mRNA明显增加，B细胞同类转换产生IgE，但这一现象在非变应性鼻炎中并不存在[7]。IFN-γ为Th1型细胞因子的一种,可通过增加IFN-γ可以影响CD+T细胞分化所处的微环境,使Th1/Th2漂移并向Th1型转化,以阻断Th2型细胞因子的分化。IFN-γ可显著抑制IL-4mRNA的转录水平,抑制IL-4诱导的B细胞表达IgE受体,从而抑制IgE的生成[8]。

鼻鼽属本虚标实之证，芪柴煎剂组方以益气健脾为主，辅以疏肝解郁、祛风通窍。黄芪健脾补气、益卫固表为君药。白术、石菖蒲利湿健脾，且白术兼有健脾，石菖蒲兼能通窍为臣，薄荷、柴胡能疏风解表，调肝以解土虚木乘，亦为臣药。防风解表驱风，苍耳子、辛夷、细辛辛温，入肺经，为鼻科要药，功善通窍。桂枝长于助阳化气，温经通脉，气行则涕消。白芍与桂枝配伍有调和营卫之妙，和五味子合用有柔肝敛涕之效。以上药均为佐使，为温阳止涕、祛风通窍而设。全方投之，能实肺脾之气，散风寒之邪，解肝经之郁；则正气扶、邪气除病自愈之。

芪柴煎剂能够显著改善变应性鼻炎大鼠鼻部症状，低剂量组IL-4含量高于芪柴煎剂高剂量组，呈现剂量相关性。地氯雷他定组IFN-γ含量低于高剂量组，说明芪柴煎剂可能对IFN-γ调节作用优于地氯雷他定。其防治变应性鼻炎大鼠有效作用机制可能与下调血清IL-4水平和上调IFN-γ水平有关；但其有效作用机制还有待进一步的临床研究。

1.Amizadeh M,Safizadeh H,Bazargan N,et al.Survey on the prevalence of allergic rhinitis and its effect on the quality of high school students'life[J].Iran J Otorhinolaryngol,2013,25(71):79-84.

2.胡文健，胥彪,王敏,等.芪柴煎剂治疗肺脾气虚肝气郁结证型的临床观察[J].泸州医学院学报,2013,36(5): 489-490.

3.Ayoub M,Lallouette P,Sutterlin Bw,et al.Modulation of the TH1/TH2 bias by an immunoglobulin histamine complex in the ovalbumin allergy mouse modle[J].Int immunopharmacol,2003,3(4):523-539.

4.赵秀杰，董震，杨占泉,等.鼻超敏反应实验模型的建立[J].中华耳鼻咽喉科杂志1993,28(3):17-18.

5.徐叔云.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出社,2002:13.

6.Baars EW，Savelkoul HF.Citrus/Cydonia compcan restorethe immunological balancein seasonal allergic rhinitis-related immunolo-gical parameters in vitro[J]. Mediators Inflamm，2008,30(1):496-497.

7.成丽兰，王珍，姜翠菊,等，滨蒿内酯对大鼠血清Th1/ Th2细胞因子及IgE表达的影响[J].临床耳鼻咽喉头颈外科杂志.2013,27(23):1310-1312.

8.Rudack C,Sachse F,Alberty J.Chronic rhinosinusitisneed for further classification[J]?Inflamm Res,2004,53: 111-117.

（2014-10-31收稿）

作者投稿系统http∶//xb.lzmc.edu.cn/

Effect of Qi Chai decoction on serum IL-4,IFN-γ level in allergic rhinitis rats

Xu Biao，Hu Wenjian1
Departmene of ENT Head and Neck Surgery，the Dazhou Hospital of Integrated TCM and Western Medicine；1Departmene of ENT，the Affiliated Chinese Traditional and Medicine Hospital of Luzhou Medical college

Objective:To study the influence of Qi Chai decoction on serum IL-4,IFN-γ level of allergic rhinitis model of rats so as to explore its role and efficacy in treating allergic rhinitis.Methods:Rats with allergic rhinitis were made by ovalbumin as sensitizing agent.40 healthy adult SD rats were randomly divided into five groups(8 rats each)∶normal control group low-dose and high dose Qi Chai decoction groups，loratadine group,and model control group.Corresponding mjodel control given for 14 consecutive days in each group.Then the serum IL-4 and IFN-γ contents were tested by ELISA.Results:Compared with model control group,the serum IL-4 levels of low dose and high dose Qi Chai decoction groups and desloratadine group were significantly lower,and there were significant differences(P＜0.05),and IL-4 level of low dose Qi Chai decoction group was higher than that of high dose group(P＜0.05).Compared with model control group,the serum IFN-γ level of low dose and high dose Qi Chai decoction groups,and the desloratadine group were significantly higher(P＜0.05).Compared with high dose group,the serum IFN-γ level of low dose Qi Chai decoction group and loratadine group were significantly lower(P＜0.05).Conclusion:The Qi Chai decoction can down-regulate the serum IL-4 levels and up-regulate the serum IFN-γ levels of the rats with allergic rhinitis.

IL-4;IFN-γ Allergic rhinitis rat model;Qi Chai decoction

R246.81

A

10.3969/j.issn.1000-2669.2015.02.003

胥彪（1985-），男，硕士研究生，E-mail：xbxubiao@126.com

胡文健（1966-），男，副教授，本科