槲寄生药材中紫丁香苷薄层鉴别方法研究

潘静岚

广州白云山星群药业(股份)有限公司，广东 广州 510000

槲寄生药材中紫丁香苷薄层鉴别方法研究

潘静岚

广州白云山星群药业(股份)有限公司，广东 广州 510000

目的：以紫丁香苷为对照品，建立槲寄生药材的薄层鉴别方法。方法：以紫丁香苷为对照品，根据《中国药典》(2010版)附录ⅥB(薄层色谱法)项下方法，对3个产地，共8批槲寄生药材进行薄层鉴别。考察不同提取方法、不同展开系统、不同点样量、不同薄层板、不同温度、不同湿度对槲寄生药材中紫丁香苷薄层鉴别的影响，从中选出槲寄生药材中紫丁香苷薄层鉴别的最佳条件。结果：以紫丁香苷为对照品，三氯甲烷-甲醇-水(15∶4∶0.2)为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，供试品和对照品在相同位置显紫色斑点。结论：该方法可行、专属性强、重复性好，能够作为槲寄生药材的鉴别方法。

槲寄生药材；薄层鉴别；紫丁香苷

槲寄生Viscum coloratum(Komar.)Na k a i为桑寄生科灌木植物，植物带叶的茎枝可供药用，具有补肝肾，强筋骨，祛风湿，安胎等功效，提取物可改善微循环，其总生物碱还具有抗肿瘤作用。《中国药典》(2005版)收载的槲寄生质量标准中，只有齐墩果酸的薄层鉴别和含量测定，《中国药典》［1］(2010版)收载的标准中，取消了齐墩果酸的含量测定，增加了紫丁香苷的含量测定。但紫丁香苷的含量测定使用的是HP L C法，对仪器要求较高。本实验对槲寄生药材中紫丁香苷的薄层鉴别方法进行研究，方法简便易行，检测成本低，为槲寄生药材的真伪鉴别及质控标准提供了实验依据。

1 材料

1.1 仪器 分析天平 (S A R T OR I U S B P121S)、 HN-10006超声仪(广州市华南超声设备有限公司提供)，半自动点样仪(C A M AG NAN OM A T3)，80-2B离心机(上海安亭科学仪器厂提供)，东方-B型风热式电热恒温干燥箱(广州东方电热干燥设备厂提供)、薄层摄像系统(C A M AG R EP RO ST A R3)

1.2 试药 紫丁香苷对照品(中国药品生物制品鉴定所提供，供含量测定用，111574-200603)，槲寄生药材(广西、新疆、吉林3个产地，共9批，均采购自广州市清平药材市场)，甲醇、乙醇、三氯甲烷等试剂均为分析纯(西陇化工股份有限公司提供)。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取紫丁香苷对照品10mg，加甲醇溶解，制成浓度为1mg/m L的紫丁香苷对照品溶液。

2.2 供试品溶液制备方法的选择 方法一：称取槲寄生药材粉末10 g，加30%乙醇100m L回流30分钟，过滤，滤液蒸干后加1m L甲醇溶解。方法二：称取粉末10 g，加乙醇100m L超声30分钟，离心(5 000 r/m in)15分钟，取上清液蒸干后加1m L甲醇溶解。方法三：称取粉末10g，加水100m L，加热回流30分钟，滤过，滤液浓缩至2m L，加在D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5 cm，柱高为15 cm)上，用水100m L洗脱，弃去水液，再用30%乙醇100m L洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1m L使溶解。依照《中国药典》(2010年版)附录ⅥB(薄层色谱法)项下方法，对3种方法提取的槲寄生药材供试品溶液进行薄层层析。结果用方法一提取的供试品溶液黏度较大，不易点样，斑点拖尾较严重。方法二和方法三提取的供试品黏度较小，点样容易，但方法二提取的供试品展开后拖尾现象较方法三提取的供试品严重。方法三的展开效果最好，斑点清晰，因此建议使用方法三对供试品进行提取［2-3］。

2.3 显色剂 10%硫酸乙醇溶液。

2.4 槲寄生药材中紫丁香苷TLC鉴别的条件考察

2.4.1 展开系统选择 分别吸取对照品溶液和供试品溶液点于同一薄层板上，参考文献分别以展开剂：1)三氯甲烷-甲醇-水(15∶4∶0.2)、展开剂；2)三氯甲烷-甲醇-水(6∶2∶1)的下层澄清溶液、展开剂；3)乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇(8∶6.4∶6.4)，3种不同展开系统展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，至可见光下检视，结果见图1。结果显示展开剂1)和3)的展开效果比2)好，展开剂1)和3)的R f值分别为0.5和0.4，展开剂2)的R F值为0.1。展开剂1)和3)的R F值虽然相近，但展开剂1)又比3)的拖尾现象要少，而且斑点更清晰圆整，因此选定展开剂三氯甲烷-甲醇-水(15∶4∶0.2)为最佳展开剂。

图1 不同展开系统的槲寄生药材薄层色谱图

2.4.2 点样量的选择 分别吸取对照品溶液和供试品溶液2、4、5、6、8、10μL，点于同一薄层板上，放入“2.4.1”项选择的展开剂中展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，至可见光下检视。结果显示槲寄生药材中紫丁香苷含量较低，如果点样量不足，斑点不够清晰。供试品的点样量为10μL时，斑点清晰而且没有扩散现象，因此把紫丁香苷对照品的点样量为定为2μL，槲寄生药材供试品的点样量定为10μL。

2.4.3 温度考察 分别吸取对照品溶液2μL和供试品溶液10μL，点于同一薄层板上，于10℃、室温和30℃下(先将层析缸和展开剂提前1小时放入实验温度下)，以“2.4.1”项选择的展开剂展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，均无扩散现象，至可见光下检视。结果显示3种温度下，斑点数目基本相同，R F值分别为0.4、0.5、0.5。可见在10～30℃范围内，槲寄生药材的紫丁香苷薄层鉴别重现性较好［4-6］。

2.4.4 湿度考察 分别吸取对照品溶液2μL和供试品溶液10μL，点于同一薄层板上，分别在室内环境(R H25%)、相对湿度47%和65%的条件下(先将层析缸和展开剂提前1小时放入实验湿度下，展开剂要提前30分钟倒入层析缸预饱和)，以“2.4.1”项选择的展开剂展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，至可见光下检视。结果显示3种不同湿度下，斑点数目和基本相同，在相对湿度65%的环境下，虽然斑点稍有扩散现象，但并不影响结果的判断。3种不同相对湿度的R F值基本相同。可见在相对湿度25%～65%的范围内，湿度对槲寄生药材的紫丁香暗薄层鉴别影响较小。

2.4.5 不同薄层板的考察 分别吸取对照品溶液2μL和供试品溶液10μL，点于不同薄层板上，以“2.4.1”项选择的展开剂展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，至可见光下检视，结果见图。结果显示默克预制G板效果最为理想，但薄层板对槲寄生药材的紫丁香苷薄层鉴别影响不大，重现性较好，见图2。

图2 不同薄层板的槲寄生药材薄层色谱图

2.5 槲寄生药材中的紫丁香苷薄层鉴别系统验证

2.5.1 槲寄生药材收集 药材编号见表1。

表1 槲寄生药材来源

2.5.2 系统验证 分别按照“2.1”项和“2.2”项确定的方法制备紫丁香苷对照品溶液和9个批次的槲寄生药材供试品溶液，分别吸取对照品溶液2μL和供试品溶液10μL，点于默克预制板G板上，以“2.4.1”项选择的展开剂取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液显色105℃加热至斑点显色清晰，至可见光下检视，结果见图。供试品色谱中，在与紫丁香苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图3。

图3 槲寄生药材薄层系统验证色谱图

3 讨论

在槲寄生药材的紫丁香苷薄层鉴别试验中，以紫丁香苷为对照品，选择以水加热回流，D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5 cm，柱高为15 cm)处理槲寄生供试品药材，采用三氯甲烷-甲醇-水(15∶4∶0.2)为展开剂，以10%硫酸乙醇溶液为显色剂。结果斑点清晰，分离效果较好。

在确定展开条件后，对不同点样量、不同温度，不同湿度，不同薄层板进行考察，并对3个不同产地共8个批次的槲寄生药材进行薄层鉴别，结果表明，本文使用的薄层鉴别方法结果稳定，具有良好的重现性。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.2010：附录ⅥB.

［2］ 王文永，赵仕丞，刘东新.山海螺的薄层鉴别及紫丁香苷的含量测定［J］.中药材，2011，34(5)：702-704.

［3］ 黄剑林，周秦，马润梅.薄层法对比两种颜色槲寄生的成分［J］.陕西中药，2006，27(10)：1286-1288.

［4］ 冯彦琳，李美萍，李俊，等.薄层色谱扫描法测定刺五加注射液中紫丁香苷的含量［J］.药物分析杂志，2006，26(6)：853-854.

［5］ 任一杰，张华，张喜民，等.复方金银花滴丸质量标准的研究［J］.西部中医药，2014，27（6）：16-17.

［6］ 张幸福，骆桂法，周燕雪.抱茎獐牙菜的生药学研究［J］.西部中医药，2014，27（7）：41-43.

Study on TLCMethod for Identification of Syringin in HuJiSheng

PAN Jinglan
Guangzhou BaiYunShan XingQun Pharmaceutical Co.Ltd.,Guangzhou 510000,China

Objective:To establish TLCmethod for identifying HuJiSheng(Herba Visci)by taking syringin as the reference substance.Methods:According to themethods recorded inⅣB of appendix in Chinese Pharmacopoeia (2010),syringinwas carried out to be the reference substance to identify eightbatches of HuJiSheng from three producing areas by TLCmethods.In order to screen the best condition for identifying syringin in HuJiSheng by TLC methods,the influence for TLC identification was investigated by analyzing the differentextractionmethods,developing systems,sampling amount,thin-layer plates,temperature and humidity.Results:The purple spots of test substance and reference substance appeared in the same position w ith syringin as reference substance,chloroform-methanol-water(15∶4∶0.2)as developing solventand 10%alcoholic solution of sulfuric acid as chromogenic reagent.Conclusion:Themethod,which is feasible,highly specific and reproducible,can be used to identify Hu－JiSheng.

HuJiSheng;TLC;syringin

R284.1

A

1004-6852(2015)04-0030-03

2014-03-10

潘静岚(1982—)，女，中药工程师。研究方向：中药制剂。