分光光度法测定葛根叶中总黄酮的含量

王翰华　陆元勋　胡梦月　周松青　金雯

摘 要：目的：建立葛根叶中总黄酮含量的测定方法。方法：以芦丁为对照品，选择510nm为测定波长，采用分光光度法测定葛根叶中总黄酮的含量。结果：芦丁在0.01208mg/mL-0.07248mg/mL范围内线性关系良好（r=0.9996），平均回收率为98.72%，RSD为2.6%。结论：分光光度法精密度高，重复性好，可用于葛根叶中总黄酮含量的测定。

关键词：葛根叶；总黄酮；含量测定；分光光度法

中药葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd） Ohwi或甘葛藤Pueraria thomsonii Benth的干燥根。在我国具有悠久的历史，在《本经》、《别录》等均有记载。味甘、辛、凉，归脾、胃经，具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻之功效。由于葛根具有抗炎解热、扩张冠状动脉血管、增加冠状动脉血流量及降低血压等作用[1，2]，含有多糖及多种微量元素[3]，现已被广泛应用于保健食品中，是我国卫生部批准的第一批药食同源的植物[4，5]。临床上主要用于冠心病、高血压、心绞痛、高黏血症、脑梗死、椎-基底动脉供血不足等多种疾病的治疗。[6]目前，未见有葛根叶的相关研究报道。为了扩大葛根的药用部位，文章采用分光光度法测定葛根叶中总黄酮含量，为葛根叶的后续研究和开发打下基础。

1 实验材料

1.1 仪器

TU-1818型紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；BS124S型电子分析天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]；KQ-100B型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 药材与试剂

葛根叶药材购于安徽省亳州市药材市场。芦丁对照品（中国生物制品检定所，批号：100080-200707）。所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取芦丁对照品15.1mg，置于50mL容量瓶中，加入60%乙醇适量，溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 供试品溶液的制备。取葛根叶粉末5g，精密称定，置锥形瓶中，加入60%乙醇50mL，称重，超声30min，60%乙醇补足失重，滤纸过滤，取续滤液，即得。

2.3 测定波长的选择

精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1.0mL，置25mL容量瓶中，先加入5%的亚硝酸钠溶液1.0mL，摇匀，放置5min，再加入10%的硝酸铝溶液1.0mL，摇匀，放置5min，再加入4%的氢氧化钠溶液10.0mL，加60%的乙醇至刻度，混匀，静置l5min。以上述不加芦丁对照品液的混合液为空白参照，在200nm-800nm波长范围内扫描，确定最大吸收波长为510nm。

2.4 方法学考察

2.4.1 标准曲线的制备。精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分别置于25mL容量瓶中，照“2.3”项下方法，自“加入5%亚硝酸钠溶液”起依法测定各个标准品溶液的吸光度，以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程A=0.1529C-0.0023，r=0.9996，表明芦丁在0.01208mg/mL-0.07248mg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.4.2 精密度试验。精密吸取对照品溶液3.0mL，共6份，分别置于25mL容量瓶中，照“2.3”项下方法操作，测定吸光度，结果吸光度的RSD为0.98%，表明本方法精密度良好。

2.4.3 重复性试验。取葛根叶粉末6份，按“2.2”项的方法制备供试品溶液，精密量取供试品溶液1mL，置25mL容量瓶中，按“2.3”项下的方法操作，测定吸光度，计算葛根叶中总黄酮含量的RSD值为1.3%，表明本方法重复性良好。

2.4.4 稳定性试验。精密吸取葛根叶供试品溶液1.0mL，按“2.3”项下方法操作，在0min、5min、10min、15min、20min、30min时依法测定吸光度，RSD值为1.6%，表明本法在30min内测定是稳定的。

2.4.5 加样回收率。精密称取已知总黄酮含量的葛根叶，分别精密加入高、中、低浓度芦丁对照品适量，照“2.3”项下方法操作，每个浓度平行三份，测定吸光度，以计算的检测量减去本底，比上加入量算得回收率，结果见表1。

2.5 样品的测定

取葛根叶6份，按照“2.2”项下的方法制备供试品溶液，依法测定吸光度，计算得总黄酮含量9.08mg/g，RSD=1.9%。

3 讨论

目前关于总黄酮含量的测定方法有比色法、紫外分光光度法、薄层色谱法等，其中以比色法最常用，且多以芦丁为对照品。该法操作简便，稳定性和重现性好，因此本实验选择以芦丁为对照品的比色法为测定方法。

在供试品的提取过程中，比较了回流提取和超声提取两种方法，结果表明回流提取效率高。同时考察了不同比例的乙醇溶剂，发现60%乙醇提取效率高。

葛根因含葛根素，大豆苷及大豆苷元，金雀异黄素和芒柄花黄素等异黄酮类成分，近年来葛根在防治骨质疏松症方面的作用得到广泛关注。[7，8]综合国内外数据库检索的结果，未见有葛根叶的相关报道。基于同株植物含有相同化学成分的原理，对葛根叶的研究开发，有利于扩大葛根的药用部分，有利于葛根的深入开发和研究，有利于推进抗骨质疏松药物的研究。

参考文献

[1]姚丹，丁选胜.葛根素药理作用机制探讨及临床应用[J].中国临床药理学与治疗学，2008，13（4）：468-472.

[2]白东义，佟春玲，韩慧，等.葛根素的药理作用及其临床应用研究进展[J].江苏中医药，2009，41（3）：76-78.

[3]易红，杨华.葛根的品种产地和提取工艺研究进展概况[J].中国实验方剂学杂志，2006（11）：601.

[4]李悦，李艳菊.国内外葛根功能食品研究进展[J].食品研究与开发，2007，28（12）：174-177.

[5]李玉山.葛根的综合开发和利用[J].林产化学与工业，2009，29（6）：109-114.

[6]杨杰忠.葛根素的临床应用进展[J].中国医药指南，2012，10（21）：465-466.

[7]姚红，黄少华，苏子仁.葛根总黄酮对去卵巢大鼠骨密度及骨钙影响的实验研究[J].新中医，2005，37（2）：92-93.

[8]Wong R，Rabie B.Efect of puerarin on bone formation[J].Osteoarthritis Cartilage，2007，15（8）：894-899.

作者简介：王翰华（1982-），男，浙江宁波人，硕士，浙江医药高等专科学校讲师，从事中药质量标准研究和中药相关课程教学。