MIP-1α和INF-γ在结核性脑膜炎患者脑脊液中的表达

王淑华

MIP-1α和INF-γ在结核性脑膜炎患者脑脊液中的表达

王淑华

目的 探讨巨噬细胞炎性蛋白-1α (MIP-1α)和γ-干扰素 (INF-γ)在结核性脑膜炎患者脑脊液中的表达及临床意义。方法 ELISA法测定早期和中晚期结核性脑膜炎患者(早期、中晚期结核性脑膜炎组)脑脊液各60例、恶性脑瘤患者(恶性脑瘤组)脑脊液75例及30例健康人(对照组)脑脊液中MIP-1α和INF-γ的浓度, 评价MIP-1α和INF-γ联合检测在结核性脑膜炎中的临床价值。结果 MIP-1α、INF-γ在早期结核性脑膜炎患者脑脊液中水平为(10.63±2.47)pmol/L、(7.85±2.08)μg/L,在中晚期脑膜炎患者脑脊液中的水平为(18.19±4.62)pmol/L、(12.86±3.02)μg/L, 在脑瘤患者脑脊液中的水平为(3.01±1.17)pmol/L、(2.73±0.96)μg/L, 在健康人脑脊液中的水平为(1.09±0.67)pmol/L、(0.82±0.77) μg/L, 早期和中晚期结核性脑膜炎组与恶性脑瘤组及对照组比较, 差异有统计学意义(P＜0.001)；早期结核性脑膜炎组和中晚期结核性脑膜炎组比较, 差异有统计学意义(P＜0.001)。MIP-1α和INF-γ在结核性脑膜炎患者脑脊液中的表达水平与结核性脑膜炎正呈相关。结论 MIP-1α和INF-γ在结核性脑膜炎脑脊液中表达的水平明显高于脑瘤患者及健康人脑脊液中的表达水平。

结核性脑膜炎；脑脊液；巨噬细胞炎性蛋白-1α；γ-干扰素

目前结核性脑膜炎诊断的实验室可靠指标为：①脑脊液涂片抗酸染色找抗酸杆菌：阳性率很低, 难以早期发现。②脑脊液培养：培养条件要求较高, 培养周期长, 且大多数医院实验室难以开展。③脑膜脑组织活检：有一定的危险性,难于满足临床要求。本文通过联合检测MIP-1α、INF-γ在脑脊液中的表达水平, 旨在为结核性脑膜炎早期诊断探讨一个简单、快速、可靠的方法。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 120例结核性脑膜炎患者, 均为2010年3月～2014年3月在本院传染科住院患者。其中, 男61例, 年龄14～75岁, 女59例, 年龄16～78岁, 平均年龄46.7岁。此120例患者均有结核中毒症状, 玻片离心沉淀法收集脑脊液细胞, 并进行抗酸染色, 找到抗酸杆菌, 结核菌素试验(PPD)强阳性, 血液和脑脊液结核抗体测定阳性, 头颅CT改变, 再结合临床症状, 确诊为结核性脑膜炎(早期结核脑膜炎组60例, 中晚期结核性脑膜炎组60例)。120例患者经规则抗痨治疗后, 脑部病变吸收。75例恶性脑瘤患者(恶性脑瘤组),均为2010年3月～2014年3月在本院神经外科住院患者,均经头颅CT、组织病理学或细胞学证实。无其他疾病。30例健康人(对照组)均为2010年3月～2014年3月来本院体检中心做健康体检者, 无结核患者的密切接触史, 头颅CT阴性, PPD阴性, 无结核性疾病及其他疾病。四组一般资料比较,差异无统计学意义(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 主要试剂 IFN-γ试剂盒(深圳晶美生物科技有限公司);MIP-1α试剂盒(美国ADL生物科技有限公司)。

1.3 主要设备 酶联免疫检测仪(美国Instruments.Inc), 型号：EL×800。

1.4 实验方法 所有入选患者在无菌条件下做腰穿抽取脑脊液3 mml, 离心取上清液2 mml冻存于-80℃冰箱中统一待用于ELISA法测趋化因子MIP-1α、INF-γ, 剩余的沉渣用于涂片抗酸染色找抗酸杆菌。按照试剂盒说明进行操作。

1.5 统计学方法 用SPSS13.0统计软件包处理数据。计量资料以均数± 标准差表示, 采用t检验；计数资料采用χ2检验。以 P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

早期和中晚期结核性脑膜炎组与恶性脑瘤组及对照组比较, 差异有统计学意义(P＜0.001)；早期结核性脑膜炎组和中晚期结核性脑膜炎组比较, 差异有统计学意义(P＜0.001)。见表1。

表1 四组脑脊液中MIP-1α和INF-γ水平比较

表1 四组脑脊液中MIP-1α和INF-γ水平比较

注：与对照组和恶性脑瘤组比较,aP＜0.001；与早期结核性脑膜炎组比较,bP＜0.001

组别例数MIP-1α(pmol/L)INF-γ(μg/L)对照组30 1.09±0.67 0.82±0.77早期结核性脑膜炎组60 10.63±2.47a7.85±2.08a中晚期结核性脑膜炎组60 18.19±4.62ab11.86±3.02ab恶性脑瘤组75 3.01±1.17 2.73±0.96 P＜0.001＜0.001

3 讨论

目前, 结核性脑膜炎实验室诊断的指标都不太理想, 所以寻找简单快速、可靠、经济的辅助诊断指标有一定的临床价值。本文通过检测MIP-1α、INF-γ在四组(早期、中晚期结核性脑膜炎组、恶性脑瘤组、对照组)脑脊液中的水平, 对检测数据进行统计学处理, 结果：结核性脑膜炎组明显高于恶性脑瘤组及对照组, 差异有统计学意义(P＜0.001),早期与中晚期结核性脑膜炎组相比较, 差异有统计学意义(P＜0.001)。本文证实联合检测脑脊液中MIP-1α和INF-γ水平, 再结合临床, 对结核性脑膜炎的早期诊断有较高价值,结核(TB)对趋化因子的表达有直接的诱导作用, TB细胞壁的组成成分可能在诱导中起关键性作用。在感染后数小时即可检测到MIP-1α的表达［1］, 在TB的诱导下, 颅内巨噬细胞产生的MIP-1α比血单核细胞产生的明显多［2］, 而且感染的TB的毒力越强, 人类巨噬细胞产生趋化因子MIP-1α的能力就越强［3］。TB及其分解产物能够引发病变局部的炎症反应和全身反应。在结核性脑膜炎中以局部的细胞免疫为主。在病变部位有大量免疫细胞的聚集。动物实验发现, TB及其产物等能够活化局部的淋巴细胞, 被活化的淋巴细胞主要是(CD4T细胞)会产生大量的INF-γ［4］。INF-γ是一种重要的免疫调节因子, 它还能够激活巨噬细胞, 促进细胞因子的释放, 增强巨噬细胞的吞噬作用。本实验中结核性脑膜炎脑脊液中MIP-1α和INF-γ呈正相关, 也说明了二者之间存在一定的关系。

Atanackovic等通过研究良、恶性脑瘤渗出的T淋巴细胞发现：在恶性脑瘤中效应型T细胞和极化1型T细胞聚集不充分, 同时还发现自然杀伤细胞和具有潜在细胞毒性的细胞聚集不充分。这可能是导致恶性脑瘤中MIP-1α、INF-γ等细胞因子不能大量产生的重要原因。本研究显示结核性脑膜炎脑脊液中MIP-1α和INF-γ的水平明显高于恶性脑瘤患者及对照组脑脊液中的水平。

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［3］ Saukkonen JJ, Bazydlo B, Thomas M, et al.Beta-chemokines are induced by Mycobacterium tuberculosis.Infect Immunity, 2002, 70(4):1684-1693.

［4］ Söderblom T, Nyberg P, Teppo AM, et al.Pleural fluid interferon-γ and tumour necrosis factor-α in tuberculous.Eur Respir J, 1996, 9(8):1652-1655.

Expressions of MIP-1α and INF-γ in cerebrospinal fluid of tuberculous meningitis patients

WANG Shuhua.Department of Detection, Shandong Heze Municipal Hospital, Heze 274031, China

Objective To explore the expressions and clinical significance of macrophage inflammatory protein-1α (MIP-1α) and γ-interferon (INF-γ) in cerebrospinal fluid of tuberculous meningitis patients.Methods The concentration of MIP-1α and INF-γ were detected by ELISA method in the cerebrospinal fluid of 60 early tuberculous meningitis patients, 60 middle-late tuberculous meningitis patients (early and middlelate tuberculous meningitis group), 75 malignant cerebrum patients (malignant cerebrum group) and 30 healthy people (control group).The clinical value of joint detection of MIP-1α and INF-γ in tuberculous meningitis was evaluated.Results The levels of MIP-1α and INF-γ were (10.63±2.47) pmol/L and (7.85±2.08) μg/ L in the cerebrospinal fluid of early tuberculous meningitis patients, (18.19±4.62) pmol/L and (12.86±3.02) μg/L in middle-late tuberculous meningitis patients, (3.01±1.17) pmol/L and (2.73±0.96) μg/L in cerebrum patients, and (1.09±0.67) pmol/L and (0.82±0.77) μg/L in healthy people.There was statistically significant difference between the early and middle-late tuberculous meningitis group, the malignant cerebrum group, and the control group (P＜0.001).The difference between early tuberculous meningitis group and middle-late tuberculous meningitis group was also statistically significant (P＜0.001).Conclusion The expression levels of MIP-1α and INF-γ in the cerebrospinal fluid of tuberculous meningitis are obviously higher than those in cerebrum patients and healthy people.

Tuberculous meningitis; Cerebrospinal fluid; Macrophage inflammatory protein-1α; γ-interferon

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.02.009

2014-08-18］

274031 山东菏泽市立医院检验科