青春期卵巢肿瘤术中冰冻切片方法探讨

度长海 曹书芬 张丽 国宏莉

青春期卵巢肿瘤术中冰冻切片方法探讨

度长海 曹书芬 张丽 国宏莉

目的 探讨快速、准确地对术中卵巢肿瘤进行好的切片技巧。方法 采用冰冻切片对卵巢肿瘤进行快速制片。结果 冰冻切片质量优良、镜下结构、细胞形态清晰、细胞核、细胞浆染色更佳。结论 快速优良冰冻切片对卵巢肿瘤术中病理诊断速度及准确性具有重要作用。

冰冻切片术；制片方法；卵巢肿瘤

WHO定义青春期为10～19岁, 青春期卵巢肿瘤发病率相对成年人低, 但其恶性率较成人高, 其病理类型与成人相比具有其特殊性及复杂性。因为青春期少女很少定期体检,早期缺乏特异性临床表现, 加之年龄的特殊性, 青春期卵巢肿瘤的诊治常常被忽视, 误诊率高。青少年正处在第二性征发育的重要阶段, 正确及时地对青春期卵巢肿瘤患者做出诊断和处理, 对于保留患者的卵巢功能、生育功能, 减少并发症及改善生活质量都尤为重要［1］。本文对本院收治的青春期卵巢肿瘤患者的快速冰冻切片操作技巧进行回顾性分析以期提高生育年龄段卵巢恶性肿瘤术中冰冻取材和诊断水平。现将具体方法报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 选取2011～2013年间本院妇产科住院患者, 取材时多所见附件区见灰红灰黄包块10～14 cm大小, 切面呈囊实性, 囊内含黏液、实性区多为黄色, 少数伴出血坏死, 部分患者上附输卵管, 有囊泡, 内含清亮液。

1.2 方法

1.2.1 准备 在切片前, 提前将冷冻切片机(德国生产Leica-CM1950)的温度降到所设定的温度, 卵巢组织冷冻温度以-24℃为宜, 调节好切片刀与组织的角度30～50°较适合。

1.2.2 取材 送检组织间隔0.2～0.5 cm切开观察。取材组织比常规稍大, 2 cm×2 cm×0.5 cm大小为宜。

1.2.3 速冻 将取好的组织迅速放在冷冻台上, 等到胶水呈乳白色, 将冻锤压在组织上约30 s。

1.2.4 制片 冷冻切片机刻度调到20 μm, 先粗切直到暴露组织最大面后, 再将刻度调到4.5 μm应尽可能将的最大面裱贴在玻片上, 立即用AFF固定液固定。

1.2.5 染色、封片 将固定好的组织放入预先加热过的苏木精中染色1 min 左右, 依次0.5%盐酸酒精分化、温水返蓝、染伊红、梯度乙醇脱水、封固。

2 结果

光镜下：制作出的卵巢包块冷冻切片完整、无皱褶。见图1。镜下见实性结构核大, 核仁突出胞核染色清晰, 扁平、立方细胞形成大小不等的囊, 其间隔以致密的梭形细胞间质或疏松的黏液样间质。术中冰冻诊断：(卵巢包块)恶性肿瘤,分类待常规病理。

图1 冰冻切片胞核染色清晰, 胞质鲜明图

图2 常规石蜡切片图(与冰冻形成鲜明对比)

分析此类卵巢包块冰冻及石蜡切片, 见图2。作者发现冰冻切片在以上各结构中均可见数量不等的嗜酸性玻璃样点滴, 但并不是单独一个卵巢生殖细胞肿瘤所特有的, 因为很多分化差的恶性肿瘤都能见到细胞的不典型性使得无法明确报告, 常规石蜡连续切片后出现肿瘤结构清晰明确。

3 讨论

好的冰冻切片术前准备需充分、恰当。如冷冻切片机长时间开机后机内会形成冰霜, 积累过多可导致切片跳刀, 这时可用吹风机快速将冰霜融化, 可自然干燥。因卵巢组织比较疏松, 囊区内黏液等原因, 当冷冻切片机温度设置过高导致组织外硬内软, 切片时组织易粘在防卷板上, 易皱折, 切片不完整。切片刀与组织块之间要调整到最适合的角度, 以30～50°适宜。准备新的一次性切片刀, 可随时更换使用。

总体来说卵巢冷冻切片制作并不难, 但病灶的规范化取材很关键［3］。进行冰冻取材的医生必须由有一定诊断经验的医师进行。在接到冰冻申请单后, 病理医生应该及时了解患者术前各项检查, 尤其是影像学检查结果, 以便在冰冻取材时做到有的放矢。对于临时术中冰冻申请的患者, 也应该及时与手术医师或家属联系了解基本病情。标本取材时, 首先要对大体标本有一个整体认识, 仔细观察囊, 实区情况, 取材的常规组织切面厚度, 书页状剖开后仔细观察切面情况,颜色、质地, 并结合触摸, 质硬区域及囊区交界部分都应该作为重点取材部位;尤其卵巢交界性肿瘤是一种低度潜在恶性的卵巢肿瘤, 占卵巢上皮性瘤的10%～15%。好发于育龄期妇女［2］。取材的同时还要注意保持取材器械的干燥, 注意不要让送检标本上带上过多水分, 以免带水过多而使切片产生空洞、冰晶等现象, 导致细胞内结构移位造成误诊。提高制片质量良好的冰冻切片可以提高诊断的准确率和诊断速度。速冻是冷冻切片好坏的关键, 这样能减少组织内冰晶的产生,同时冰冻机箱温度应该恒定, 一般在-18℃左右为宜。冰冻切片要求切片要完整, 薄厚适当, 不要有褶皱、气泡等现象,染片要清晰, 这样才会减少诊断的风险。在冰冻切片的诊断结果后进行术后石蜡切片诊断的必要性, 多进行对比, 以提高病理诊断水平。对术中冰冻病理诊断的确诊率, 分析误诊的原因及减少误诊率, 术中冰冻切片病理诊断是术中确定病变性质的有效方法, 对术中选择适当的手术方案有重要的影响［4］。可见快速、准确地对术中卵巢肿瘤进行好的切片, 掌握技巧的必要性。

［1］ 朱晓静.青春期卵巢肿瘤临床病理特点及诊治分析.郑州大学, 2011.

［2］ 郄明蓉, 綦小蓉.卵巢交界性肿瘤的诊治进展.中华妇幼临床医学杂志(电子版), 2012(4):418-421.

［3］ 文登虎, 杨月红, 刘杰.甲状腺微小癌术中冷冻切片的体会.临床与实验病理学杂志, 2013, 29(11):1263.

［4］ 李静, 孙保存, 刘增辉, 等.2839例术中冰冻切片诊断与术后石蜡切片诊断的对比研究.天津医科大学学报, 2013(6): 471-473.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.01.172

2014-10-11］

442000 湖北医药学院附属人民医院病理科(度长海曹书芬 张丽)；病理学教研室(国宏莉)