肿瘤干细胞标记物ALDH1和Ki67在子宫内膜腺癌中的表达和意义

周 彤，刘 颖，石英爱，张丽红

（1.吉林大学第一医院a内分泌科；b呼吸内科，吉林长春130021；2.吉林大学病理生物学教育部重点实验室，吉林长春130021）

肿瘤干细胞标记物ALDH1和Ki67在子宫内膜腺癌中的表达和意义

周 彤1a，刘 颖1b，石英爱2＊，张丽红2＊

（1.吉林大学第一医院a内分泌科；b呼吸内科，吉林长春130021；2.吉林大学病理生物学教育部重点实验室，吉林长春130021）

肿瘤干细胞（Cancer Stem Cell，CSC）为存在于肿瘤组织中的数量极少、具有无限增殖潜能，可分化为肿瘤细胞，且对肿瘤的发生、发展和转移起决定性作用的细胞。乙醛脱氢酶1（aldehyde dehygeogenase1，ALDH1），是在ALDH基因家族指导下合成的一类酶，主要存在于肝脏与肾脏细胞中，在体内主要发挥乙醛的代谢解毒功能，也与细胞的增殖、分化相关，可作为干细胞标志物［1］；同时也是肿瘤起始细胞（cancer－initiating cells，CICs）的标志物之一［2］。本研究以5例子宫内膜单纯性增生病例为对照，利用免疫组织化学方法观察31例子宫内膜腺癌的ALDH1和Ki67的表达，并探讨二者表达的相关性，为以肿瘤干细胞为靶向诊断和治疗子宫内膜腺癌提供理论和实验依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源

收集吉林大学第一临床医院2013年10月2014年10月期间的子宫内膜腺癌切除标本，共计31例。包括：相对高分化腺癌16例；中分化腺癌8例；低分化腺癌7例。另有子宫内膜单纯性增生标本5例；所有患者术前均未接受任何化疗、放疗等的辅助治疗，临床病例资料完整。

1.2 免疫组织化学染色（SP法）

鼠抗人ALDH1单克隆抗体购于美国BD公司；兔抗人Ki67多克隆购于北京中杉公司，按试剂盒说明书操作。

1.3 结果判定

高倍镜下（200×）每张切片随机选择5个视野，子宫内膜单纯性增生组织计数腺体上皮细胞，腺癌计数肿瘤细胞，每个视野计数200个细胞，共1000个，计算阳性细胞所占的百分数，其中＞50%为＋＋＋（阳性）；25%～50%为＋＋；＜25%为＋；无着色为－（阴性）。

1.4 统计学方法

全部实验数据用SPSS17.0统计软件分析处理。各组间比较采用χ2检验，P＜0.05具有统计学意义。

2 结果

ALDH1蛋白主要表达于细胞质中，呈棕黄色颗状。ALDH1蛋白在部分子宫内膜单纯性增生组织腺上皮中表达，少数病例阳性细胞出现在间质内，表达率为40.0%（2／5）。子宫内膜癌组织中ALDH1既可表达于肿瘤细胞胞质中，部分间质内亦可见阳性表达，表达率为90.3%（28／31）；且随着肿瘤分化程度的不同，从高分化到低分化，其阳性表达率逐渐提高（见表1），经χ2检验，组间差异有显著性，P＜0.05。但ALDH1与子宫内膜腺癌的临床分期、浸润深度、淋巴结转移等无关（P＞0.05）。Ki67主要表达在细胞核中，呈棕黄色颗粒。Ki67在子宫内膜单纯性增生组织中不表达。而在子宫内膜癌组织中Ki67表达于肿瘤细胞核中，阳性率为100%（见表1）。经χ2检验，组间差异有显著性，P＜0.0001。Ki67与子宫内膜腺癌的临床分期、浸润深度、淋巴结转移等呈正相关（P＜0.05）。

3 讨论

子宫内膜腺癌是女性高发的恶性肿瘤之一。早期患者无明显症状，缺乏有效的诊断方法，疗效及预后并不理想。近年来随着干细胞研究的逐渐深入，肿瘤干细胞学说受到重视。目前关于子宫内膜腺癌肿瘤干细胞标记物的研究甚少，有研究报道称CD133可能是其中之一［3］。

ALDH1属醛脱氢酶家族成员之一，其主要功能就是在细胞内参与催化氧化维生素A成为相应视黄酸的不可逆反应，而后者作为维甲酸核受体的配体，通过维甲酸受体信号通路直接调节基因表达，从而促进细胞分化，减少增殖［4］。也有研究表明恶性肿瘤的发生依赖于一种数量很少的异质性细胞群体，称为肿瘤起始细胞（cancer－initiating cells，CICs），对肿瘤的发生、发展和转移起决定性作用，也是肿瘤复发、转移和治疗失败的根源［1］。ALDH1在很多干细胞／前体细胞中表达，也可能是肿瘤起始细胞CICs的标志物之一。有证据表明ALDH1高表达的子宫内膜癌细胞个体预后差，且与肿瘤耐药和复发有关［5］。Wang等人发现ALDH1高表达的子宫内膜癌细胞系具有高度恶性生物学行为包括肿瘤发生、发展、耐药及高侵袭力等［2］。故ALDH1可作为潜在的子宫内膜腺癌的肿瘤干细胞的标记物。目前关于ALDH1在卵巢癌、乳腺癌中的表达研究相对较多［6］，可作为卵巢癌、乳腺癌、肺癌［7］以及其他肿瘤干细胞标记物。但对于其在子宫内膜腺癌的研究相对较少。本实验观察了ALDH1在部分子宫内膜单纯性增生组织腺上皮中有表达；在子宫内膜癌组织阳性表达率则可达为90.3%，且随着肿瘤分化程度的升高逐渐提高。但ALDH1表达与子宫内膜腺癌的临床分期、浸润深度、淋巴结转移等无关（P＞0.05）。

细胞增殖抗原标记物（Ki67）是一种与增殖细胞相关的核抗原，是目前公认的有效评估肿瘤细胞增殖活性的重要标记物，其表达的高低反映细胞增殖的程度［8］。本研究观察了Ki67在子宫内膜腺癌组织中的表达情况，发现其在子宫内膜单纯性增生组织中不表达，而子宫内膜腺癌肿瘤细胞阳性率为100%，且Ki67与子宫内膜腺癌的临床分期、浸润深度、淋巴结转移等正相关（P＜0.05）。而通过对ALDH和Ki67两者在子宫内膜腺癌表达情况相关性分析发现无相关性，可能与统计病例数较少有关。

表1 ALDH1蛋白在正常子宫内膜组织、子宫内膜癌中的表达（χ2检验）

肿瘤干细胞理论认为CSCs是肿瘤发生、发展的根源所在。虽然CSCs在肿瘤组织中的数量极少，但其具有无限增殖潜能、高致瘤性、放化疗抵抗性和高侵袭性，也是肿瘤复发、转移和治疗失败的根源。已经成为今后临床肿瘤靶向治疗的关键点。本研究为ALDH1作为子宫内膜腺癌肿瘤干细胞标记物提供一定的实验依据，为子宫内膜腺癌的治疗提供了新的方向。

［1］Jackson B，Braocker C，Thompson DC，et al.Update on the aldchyde dehydroense gene（ALDH）superfamily［J］.Humm Genomice，2011，（5）：283.

［2］Wang Y，Jiang Y，Tian T，et al.Inhibitory effect of Nodal on the expression of aldehyde dehydrogenase 1in endometrioid adenocarcinoma of uterus［J］.Biochem Biophys Res Commun，2013，440（4）：731.

［3］Nakamura M，Zhang，X，Mizumoto Y，et al.Molecular characterization of CD133＋cancer stem－like cells in endometrial cancer［J］.Int J Oncl，2014，44（3）：669.

［4］Penumantsa k，Edassery S L，Barua A，et al.Differential expression of aldehyde dehydrogenase 1A1（ALDH1）in normal ovary and serous ovarian tumors［J］.Journal of Ovarian Research，2013，（28）：1.

［5］Rahadiani N，Ikeda J，Mamat S，et al.Expression of aldehyde dehydrogenase 1（ALDH1）in endometrioid adenocarcinoma and its clinical implications［J］.Cancer Sci，211，102（4）：903.

［6］Liu L，Yi J，Zhang D.The progress of ALDH－1in gynecologic oncology［J］.Eur J Gynaecol Oncol，2014，35（5）：508.

［7］O’Flasherty JD，Barr M，Fennell D，et al.The cancer stem－cell hypothesis：its emerging role in lung cancer biology and its relevance for future therapy［J］.J Thorac Oncol，2012，7（12）：1880.

［8］Pathmanathan N，Ballaeine RL.Ki67and proliferation in breast cancer［J］.J Clin Pathol，2013，66（6）：512.

2014－12－24）

1007－4287（2015）09－1532－02

吉林省卫生厅科技计划（2013ZC005）；吉林省重点科技攻关项目（20150204066S）

＊通讯作者