栀子药材的薄层鉴别方法研究*

杨立国，张英杰，谢佳颖，夏伟军，张海元，梅双喜

(云南省药物研究所，云南白药集团创新研发中心，云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室，云南昆明 650111)

栀子药材的薄层鉴别方法研究*

杨立国，张英杰，谢佳颖，夏伟军，张海元，梅双喜△

(云南省药物研究所，云南白药集团创新研发中心，云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室，云南昆明 650111)

目的 建立栀子药材的薄层鉴别方法。方法 以栀子苷、异栀子苷、京尼平龙胆双糖苷和西红花苷-Ⅰ为对照品，对栀子药材进行薄层鉴别，并考察了不同展开系统、不同显色方法、不同厂家薄层板、不同展距、不同点样量、不同预饱和时间、不同温度和不同湿度对栀子药材薄层色谱的影响。结果 以栀子苷、异栀子苷、京尼平龙胆双糖苷和西红花苷-Ⅰ为对照品，三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)为展开系统，所得薄层色谱斑点清晰，专属性强。结论 该鉴别方法简单可行，重复性好，可作为栀子药材的薄层鉴别方法。

栀子；栀子苷；异栀子苷；京尼平龙胆双糖苷；西红花苷-Ⅰ；薄层鉴别

栀子(Gardenia jasminoides Ellis)为栀子属植物栀子的干燥成熟果实，是我国卫生部颁布的第一批药食两用资源，始载于《神农本草经》，列为中品，中国历版药典和其它本草均有记载。其性苦、寒，归心、肺、三焦经，具有泄火除烦，清热利尿，凉血解毒之功效，临床广泛用于热病心烦、黄疸尿赤、血淋涩痛、血热吐衄、目赤肿痛、火毒疮疡等证[1]。

栀子是云南省药物研究所研制的“金品”痛舒胶囊、肿痛气雾剂等产品的重要原料之一[2]，为了有效的控制其质量，我们对其薄层鉴别方法进行了研究。据相关文献[3]报道，栀子中含有多种化学成分，包括环烯醚萜苷类、西红花苷类、黄酮类、奎宁酸类等。其中，环烯醚萜苷类和西红花苷类成分是栀子中两类主要有效成分[4]。而在上述两类有效成分中，含量较高的四个成分为栀子苷、异栀子苷、京尼平龙胆双糖苷和西红花苷-Ⅰ[5]。但当前多数研究[6-9]主要通过栀子苷对栀子药材进行鉴别，忽略了其余几个有效成分(异栀子苷、京尼平龙胆双糖苷和西红花苷-Ⅰ)，无法全面而准确的评价栀子药材的质量。本研究以栀子苷、异栀子苷、京尼平龙胆双糖苷和西红花苷-Ⅰ为对照品，对栀子药材的薄层鉴别方法进行了完善。

1 仪器与材料

SK8200HP超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)；ZF-90多功能暗箱式紫外投射仪(上海宝山顾村电光仪器厂)；瑞士Mettler Toledo AG285电子天平；薄层色谱展开缸(上海信谊仪器厂)；默克薄层层析硅胶G板(默克化工技术上海有限公司)；青岛海洋高效G板和普通G板(青岛海洋化工厂分厂)；栀子苷、西红花苷-Ⅰ和栀子对照药材购自中国食品药品检定研究院；异栀子苷和京尼平龙胆双糖苷购自成都普菲德生物技术有限公司；栀子药材购自江西抚州，经云南省药物研究所邱斌高级工程师鉴定，标本保存于云南省药物研究所标本室；试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱条件的考察

2.1.1 对照药材及药材供试品溶液的制备 取对照药材或栀子药材粉末1 g，加甲醇10 mL，超声处理20 min，放冷至室温，过滤，取滤液作为供试品溶液。

2.1.2 混合对照品溶液的制备 分别取栀子苷、异栀子苷、西红花苷-Ⅰ和京尼平龙胆双糖苷各0.5 mg，加甲醇2 mL溶解，作为混合对照品溶液。

2.1.3 展开系统的考察 分别吸取混标溶液、对照药材溶液和供试品溶液2 μL，点于同一薄层板上，以(1)乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5：5：1：1)，(2)三氯甲烷-甲醇-冰醋酸(3：1：0.05)，(3)三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)三种不同展开系统展开，取出，晾干，10%硫酸-乙醇显色，105℃加热至斑点清晰，可见光下检视，结果见图1。综合比较图中斑点数目、分离度等情况，可确定系统(3)三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)为最佳展开系统。

1-混标；2-对照药材；3-栀子药材；A-系统(1)；B-系统(2)；C-系统(3)

图1 展开系统的考察

2.1.4 检视方法的选择 分别吸取混标溶液、对照药材溶液和供试品溶液2 μL，点于同一薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)展开，取出，晾干，经日光、10%硫酸-乙醇及365nm紫外灯下三种检视方式检视，结果见图2。综合比较图中斑点数目及清晰情况，可确定(B)10%硫酸-乙醇显色为最佳检视方式。

1-混标；2-对照药材；3-栀子药材；A-日光下检视；B-10%硫酸乙醇显色；C-10%硫酸乙醇显色后，365nm下检视

2.2 方法学验证

2.2.1 重复性考察 按2.1.1供试品溶液制备方法制备供试品溶液6份，分别吸取混标溶液和上述6份供试品溶液2 μL，点于同一薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)展开，取出，晾干，10%硫酸-乙醇显色，105°C加热至斑点清晰，可见光下检视，结果见图3。结果表明，供试品溶液制备方法的重复性良好。

1-混标；2、3、4、5、6、7-栀子药材

2.2.2 耐用性考察

2.2.2.1 不同厂家薄层板的考察 分别吸取混标溶液、对照药材溶液和供试品溶液2 μL，点于三种不同薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)展开，取出，晾干，10%硫酸-乙醇显色，105°C加热至斑点清晰，可见光下检视，结果见图4。结果表明，默克硅胶G板的分离效果优于青岛海洋硅胶G板和青岛海洋高效硅胶G板。

1-混标；2-对照药材；3-栀子药材；A-默克硅胶G板；B-青岛海洋G板；C-青岛高效G板

2.2.2.2 不同展距的考察 分别吸取混标溶液、对照药材溶液和供试品溶液2 μL，点于不同薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)展开，展距分别为8 cm、10 cm、12 cm，取出，晾干，10%硫酸-乙醇显色，105°C加热至斑点清晰，可见光下检视，结果见图5。结果表明，展距为8 cm时，分离效果不佳；展距为12 cm时，斑点拖尾较严重，故选择展距为10 cm。

1-混标；2-对照药材；3、4-栀子药材；A-展距8 cm；B-展距10 cm；C-展距12 cm

2.2.2.3 不同点样量的考察 分别吸取栀子供试品溶液1、2、4 μL，混合标准品溶液2 μL，点于同一薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)展开，取出，晾干，10%硫酸-乙醇显色，105°C加热至斑点清晰，可见光下检视，结果见图6。结果表明，点样量为2 μL时斑点较为清晰，故确定供试品的点样量为2 μL。

1-混标；2、3-栀子药材1μl；4、5-栀子药材2μl；6、7-栀子药材4μl

2.2.2.4 不同预饱和时间的考察 分别吸取混标溶液、对照药材溶液和供试品溶液2 μL，点于三块不同薄层板上，分别以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)为展开系统，预饱和时间分别为0 min、15 min和30 min，展开，取出，晾干，10%硫酸-乙醇显色，105°C加热至斑点清晰，可见光下检视，结果见图7。结果表明，饱和15 min时，斑点较为清晰，且分离效果较好，故选择预饱和15 min。

1-混标；2-对照药材；3、4-栀子药材；A-预饱和0min；B-预饱和15min；C-预饱和30min

2.2.2.5 不同展开温度的考察 分别吸取混标溶液、对照药材溶液和供试品溶液2 μL，点于三块不同薄层板上，分别以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)为展开系统，在4°C、21°C、32°C的条件下展开，取出，晾干，10%硫酸-乙醇显色，105°C加热至斑点清晰，可见光下检视，结果见图8。结果表明，展开温度对展开效果影响不大，故选择室温下展开。

1-混标；2-对照药材；3-栀子药材；A-4°C；B-21°C；C-32°C

2.2.2.6 不同展开湿度的考察 分别吸取混标溶液、对照药材溶液和供试品溶液2 μL，点于三块不同薄层板上，分别以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)为展开系统，在相对湿度32%、58%、72%的条件下展开，取出，晾干，10%硫酸-乙醇显色，105°C加热至斑点清晰，可见光下检视，结果见图9。结果表明，相对湿度对分离效果及斑点的清晰程度影响不大。

1-混标；2-对照药材；3-栀子药材；A-相对湿度32%；B-相对湿度58%；C-相对湿度72%

2.3 十批栀子药材的薄层鉴别 按照2.1和2.2确定的色谱条件，将对照药材及10批供试品药材点于同一薄层板上，展开，晾干，10%硫酸-乙醇显色，105°C加热至斑点清晰，可见光下检视，结果见图10。结果表明，所建立的方法分离度高，重现性好，可用于栀子药材的鉴别。

1-对照药材；2-11十批栀子药材

3 讨论

3.1 栀子药材是云南省药物研究所研制的“金品”痛舒胶囊、肿痛气雾剂等产品的重要原料之一，本研究所建立的栀子药材的薄层鉴别方法，可用于栀子药材的质量控制，为进一步实现“金品”痛舒胶囊、肿痛气雾剂等产品质量的均一、稳定奠定了方法基础。

3.2 先前相关文献主要通过栀子苷对栀子药材进行鉴别，忽略了其余几个有效成分(异栀子苷、京尼平龙胆双糖苷和西红花苷-Ⅰ)，无法全面而准确的评价栀子药材的质量。本研究以栀子苷、异栀子苷、京尼平龙胆双糖苷和西红花苷-Ⅰ为对照品，对栀子药材的薄层鉴别方法进行了完善，为实现栀子药材质量的有效控制奠定了基础。

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[4]李木子，王京辉，蔡程科，等.栀子饮片质量分析研究[J].药物分析杂志，2014，34(6)：1025-1032.

[5]何兵，田吉，李春红，等.泸州纳溪GAP基地栀子中4种主要活性成分的含量测定[J].中成药，2009，31(12)：1884-1887.

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云南省科技领军人才培养计划项目(NO：2014HA001)。

杨立国(1985-)，男，河北，工程师，主要从事天然药物化学方面的研究。

△通信作者：梅双喜，E-mail：13211783158@126.com

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