高效液相色谱法测定注射用炎琥宁含量

钱永健，陈永壮

(广州市妇女儿童医疗中心，广东 广州 510623)



高效液相色谱法测定注射用炎琥宁含量

钱永健，陈永壮

(广州市妇女儿童医疗中心，广东 广州 510623)

目的：建立高效液相色谱法测定注射用炎琥宁的含量。方法：采用DiamonsilTMC18柱(4.6mm×200mm,5μm)，流动相为甲醇-0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液(pH=3.00), 流速为1.0mL/min，检测波长为251nm。结果：在40.2～281μg/mL范围内，炎琥宁峰面积与测定浓度线性范围为0.520～0.157mg·mL-1，呈现良好的线性关系(r=0.999 9)，平均回收率为99.9%，重复性试验RSD为0.49%。结论：采用高效液相色谱法测定注射用炎琥宁含量方法准确，简便快速，重现性好，值得在测定注射用炎琥宁制剂中推广应用。

注射用炎琥宁；高效液相色谱法；含量

炎琥宁主要用于治疗病毒性肺炎和病毒性上呼吸道感染，由穿心莲提取物经脱水、醋化、成盐精制而成，可特异性兴奋垂体-肾上腺皮质功能和抑制早期毛细血管通透性增高，具有体外灭活腺病毒、呼吸道病毒及流感病毒等作用[1]。临床通常采用紫外分光光度法测量炎琥宁含量，精密度低，重现性差，处理较为繁琐。为更好地控制产品质量，本文采用高效液相色谱法测定注射用炎琥宁的含量，该方法准确，简便快速，重现性好，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

高效液相色谱仪器(美国安捷伦)；磷酸二氢钾(分析纯，山东省化工研究院)；甲醇(色谱纯，天津四友生物医学技术有限公司)[2]；脱水穿心莲内脂琥珀酸半脂对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111598-200301)；注射用炎琥宁(湖北德益医药有限公司，批号：H20044463)。

1.2 色谱条件

DiamonsilTMC18柱(4.6mm×200mm,5μm)，流动相为甲醇-0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液(pH=3.00), 流速为1.0mL/min,检测波长为251nm，柱温：室温。在上述条件下，注射用炎琥宁与其他组分能达到基线分离。见图1。

图1 注射用炎琥宁高效液相色谱

2 结果

2.1 线性关系

选取10.03mg脱水穿心莲内脂琥珀酸半脂对照品，精密称取放置25mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，用流动相稀释至刻度，摇匀。取浓度分别为0.6、0.9、1.2、1.5、1.8mg·mL-1溶液各20μL注入液相色谱仪，记录峰面积变化。以峰面积(A)为纵坐标、浓度(C，mg·mL-1)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：A=8.278×103C-9.295，r=0.999 1。试验结果表明：在40.2～281μg/mL范围内，炎琥宁峰面积与测定浓度线性范围为0.52～0.157mg·mL-1，线性关系良好(r=0.999 9)。

2.2 溶液稳定性

取相当于炎琥宁20mg的本品适量，精密称取后放置10mL容量瓶中，用流动相溶解稀释至刻度，摇匀；按“1.2”项色谱条件分别于0、2、4、6、8h进样20μL，所测峰面积的平均RSD为1.36%，试验结果表明，在8h内供试品溶液中炎琥宁稳定。

2.3 干扰试验

按处方规定对空白辅料溶液进行配制，选取15mg甘露醇精密称量，放置25mL容量瓶中，用流动相溶解稀释至刻度，摇匀。精密量取1mL，放置25mL容量瓶，用流动相溶解稀释至刻度，摇匀。在液相色谱仪中注入20μL，并记录色谱图。试验结果表明：样品不受空白辅料溶液影响。

2.4 重复性试验

取相同批次样品，根据处方规定配制6份供试品溶液，按“1.2”项色谱条件测定计算含量，RSD为0.49%。见表1。

表1 样品重复性测定结果 (%)

2.5 回收率试验

选取适量脱水穿心莲内脂琥珀酸半脂对照品和98.44%本品，精密称取置于10mL容量瓶中，用流动相溶解稀释至刻度，摇匀，选取5mL放置100mL量瓶中，用流动相溶解稀释至刻度，测定得平均回收率为99.9%。见表2。

表2 炎琥宁回收率试验结果

3 讨论

高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)，又称高分离度液相色谱、高压液相色谱，以液体为流动相，是色谱法的一个重要分支。该方法主要采用高压输液系统将不同极性的单一溶剂或缓冲液等流动相泵装入固定相色谱柱，各成分在柱内被分离后进入检测器检测，分析试样[3-4]。高效液相色谱法主要特点为：①高速：载液速度快，分析速度快，快于传统色谱法速度，1个样品可在15～30min内完成测量，有些样品仅需5min即可完成；②高压：流动相为液体，流经色谱柱时受到较大阻力，故对载液加高压才能迅速通过色谱柱；③高灵敏度：进样量为10-9数量级，紫外检测器可达0.01ng；④应用范围广：高效液相色谱可分析70%以上的有机化合物，尤其对大分子、高沸点及热稳定性化合物优势最为明显。

近年来，高效液相色谱法已成为药物研制开发、药品检验部门及医院临床检验等各个领域药物质量控制中的重要技术和方法。采用该方法测定药物含量可消除药物制剂中附加剂、共存药物或杂质对测定的干扰，因此高效液相色谱法广泛应用于药物成分含量的测定[5]。注射用炎琥宁化学名称为19-二琥珀酸半酯钾钠盐一水物,14-脱羟-11,12-二脱氢穿心莲内酯-3，化学结构式为C28H34KNaO10·H2O，辅料为甘露醇和碳酸氢钠，主要用于治疗病毒性肺炎和病毒性上呼吸道感染疾病。本文采用高效液相色谱法测定注射用炎琥宁，炎琥宁保留时间约为6.65min，有较好的主峰对称，具有准确、简便等特点，适用于炎琥宁及其制剂的生产及临床质量控制。

综上所述，采用高效液相色谱法测定注射用炎琥宁含量方法准确，简便快速，重现性好，值得在测定注射用炎琥宁制剂中推广应用。

[1] 韦曦,欧阳小琳,许盈,等.炎琥宁的含量测定及其与常用输液和药物的配伍变化[J].儿科药学杂志,2012,18(8):28-31.

[2] 史明,郑芳,李鹏,等.注射用头孢尼西钠与注射用炎琥宁配伍稳定性考察[J].医药导报,2011,30(2):254-256.

[3] 赵敏.反相高效液相色谱法测定注射用炎琥宁与注射用更昔洛韦的配伍使用[J].中外健康文摘,2012,09(22):135-136.

[4] 林恒宽,林恒道.氯霉素注射液与注射用炎琥宁的配伍稳定性[J].临床医学,2013,33(3):102-104.

[5] 杨胜利.注射用炎琥宁与注射用头孢拉定的配伍稳定性分析[J].中西医结合心血管病电子杂志,2014(5):48-48.

(责任编辑：李岚春)

2014-10-30

钱永健(1980-)，男，广州市妇女儿童医疗中心主管药师，研究方向为临床药理。

R284.2

A

1673-2197(2015)04-0043-02

10.11954/ytctyy.201504019