结核分枝杆菌快速培养两种前处理方法分析比较

王志英　李全忠

摘要：目的 分析比较结核分枝杆菌快速培养两种前处理方法，从而大大减少了操作过程中被污染的几率，也提高了该培养方法的准确性。方法 采用的结核菌快速液体培养方法中使用的前处理方法为N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）-NaOH法，与我院经改良后的结核菌快速液体培养方法为NaOH-生理盐水法相比较。结果 使用N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）-NaOH法进行前处理的培养阳性结果为92例。使用NaOH-生理盐水法进行前处理的培养阳性结果为90例。结论 使用NaOH-生理盐水法进行前处理可以减少前处理过程中的许多环节，减少被污染，降低了实验成本。

关键词：结核分枝杆菌； 快速液体培养；培养方法

Abstract：Objective Comparison of mycobacterium tuberculosis fast develop two kinds of pretreatment method， thus greatly reducing the chance of contamination in the process of operation， and also improve the accuracy of the training methods. Methods N/med tuberculosis bacterium rapid liquid culture method used in the pretreatment method for n-acetyl - L - cysteine （NALC） - NaOH method，with our improved n/med tuberculosis bacterium rapid liquid culture method for NaOH - saline method comparison. Results Use n-acetyl - L - cysteine （NALC） - NaOH method for pretreatment of the positive results of 92 cases. Using NaOH - saline method for pretreatment of the positive results of 90 cases. Conclusion Using NaOH - saline method for pretreatment can reduce many links in the process of pretreatment， reduce the pollution， reduce the experiment cost.

Key words：Mycobacterium tuberculosis； Rapid liquid culture； Training method

结核分枝杆菌的快速液体培养方法在结核分枝杆菌检测阳性率方面显著高于涂片法，也高于罗氏培养法。在检测时间上远远短于罗氏培养法。因此能达到快速诊断的目的。但是，目前用于快速培养的标本前处理方法因其使用的处理试剂繁多，而且程序繁琐容易在前处理过程中产生污染。本方法采用的前处理方法只需使用无菌生理盐水代替前处理过程中的繁多试剂，从而大大减少了操作过程中被污染的几率，也提高了该培养方法的准确性。

1资料与方法

目前国际和我国采用的结核菌快速液体培养方法中使用的前处理方法为N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）-NaOH法。具体操作过程如下：

试剂配制： ①2.94%（0.1mol/L）枸橼酸钠溶液50ml，加4%NaOH溶液50ml混匀。临用前加入0.5NALC，混匀后置室温24～48h内使用，此溶液不稳定，应密闭冷藏。②处理方法：取被检标本2ml左右，加等量的上述试剂进行消化处理，振荡30s，如果标本粘稠，可适当延长时间，室温（20℃～25℃）放置15min，加入0.067mol/LPB缓冲液20ml，混匀，以10000rmp离心10min，倒掉上清液。加入0.067mol/LPB缓冲液20ml，洗涤2次后，加入0.5ml0.067mol/LPB缓冲液，混匀后接种于快速液体培养基中。

我院经改良后的结核菌快速液体培养方法为NaOH-生理盐水法。具体操作过程如下：试剂配制：4%NaOH溶液，0.9%灭菌生理盐水。

处理方法：取被检标本2ml左右，加等量的4%NaOH溶液，振荡30s室温放置15min，如果标本粘稠，可适当延长放置时间，混匀，以10000rmp离心沉淀10min，去掉上清液。加入0.9%灭菌生理盐水20ml充分混匀洗涤，再次以10000rmp离心沉淀10min，如此反复两次，去掉上清液，，加入0.9%灭菌生理盐水0.5ml，混匀后接种于快速液体培养基中。实验结果：自2013年1月～12月，我院共收集痰菌阳性结核病患者痰标本200例进行结核菌快速液体培养，并将每个痰标本分为两组，分别使用两种前处理方法对两组标本进行前处理然后进行快速液体培养。得出结果为使用N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）-NaOH法进行前处理的培养阳性结果为92例。使用NaOH-生理盐水法进行前处理的培养阳性结果为90例。其培养阳性检出率分别为46%和45%。两 种前 处理 法培 养阳 性率 比较：？字2=0.5，0.5>P>0即：N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）-NaOH法和NaOH-生理盐水法的前处理标本培养阳性率无显著差异。

2讨论

目前进行结核菌快速液体培养的前处理方法由于使用处理的试剂种类繁多，而且操作程序繁琐，所以容易在前处理的过程中产生污染。使用NaOH-生理盐水法进行前处理不仅可以减少前处理过程中的许多环节，减少被污染的几率。而且，减少许多试剂，从而降低了实验成本。为患者减少了就诊中的费用。

参考文献：

[1]传染性肺结核诊断标准及处理原则[S].中华人民共和国国家标准，GB15987-1995.

[2]卫生部疾病控制司、卫生部医政司.全国结核病防治工作手册[S].1999. 编辑/孙杰