大叶钩藤总生物碱抗抑郁作用初步研究

李影雄，马 存，刘林生，招丽娟，王定勇*(.佛山市中医院 药剂科，广东 佛山 58000；. 广东药学院 药科学院，广东 广州 50006)



大叶钩藤总生物碱抗抑郁作用初步研究

李影雄1，马 存2，刘林生1，招丽娟1，王定勇2*
(1.佛山市中医院 药剂科，广东 佛山 528000；2. 广东药学院 药科学院，广东 广州 510006)

目的：研究大叶钩藤总生物碱的抗抑郁活性。方法：采用小鼠悬尾实验、小鼠强迫游泳实验和利血平致抑郁小鼠自主活动实验，考察大叶钩藤总生物碱的抗抑郁活性。结果：大叶钩藤总生物碱低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)剂量组均能减少小鼠悬尾和强迫游泳不动时间，并能增加利血平致抑郁小鼠自主活动次数，与空白对照组、模型对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论：大叶钩藤总生物碱具有明显的抗抑郁作用。

大叶钩藤；总生物碱；抗抑郁

抑郁症(Depression)是一种由多种原因引起的复杂情感性精神障碍，主要表现为情绪持续低落、思维迟钝、意志行为减少，严重者还伴有自杀倾向，已成为最常见的心理疾病之一，社会危害性大。据世界卫生组织预测，到2020年抑郁症将成为仅次于心脏病的第二大疾病[1]。目前抑郁症主要采用化学药物治疗，尽管疗效肯定，但都存在着副作用及长期服用易产生耐药性等问题。因此研制副作用小、疗效好、适合长期服用的抗抑郁药日益受到重视。我国天然资源丰富，许多中草药及其有效成分被证明具有较好的抗抑郁活性，从天然资源中寻找新型抗抑郁药大有可为[2]。

大叶钩藤(UncariamacrophyllaWall.)为茜草科钩藤属植物, 为常用中药，可用于治疗头晕目眩、惊痫抽搐、全身麻木等心脑血管和神经系统疾病[3]。作者曾对大叶钩藤的化学成分及其总生物碱的提取方法进行了较详细的研究[4-6]；HPLC法显示大叶钩藤总生物碱主要含钩藤碱、异钩藤碱、柯诺辛碱和柯诺辛碱B，且该4种生物碱占总生物碱的比例达95.6%。作为大叶钩藤深入研究的一部分，本研究报道大叶钩藤总生物碱的抗抑郁作用。利用小鼠悬尾、小鼠强迫游泳和抑郁小鼠自主活动3种实验，初步探讨大叶钩藤总生物碱的抗抑郁活性,现报道如下。

1 材料与仪器

1.1 试验药物

大叶钩藤总生物碱由广州来普达克生物技术有限公司提供，纯度98.6%，用1.5%羧甲基纤维素钠水溶液配成混悬液，冰箱中保存备用，使用前振摇均匀；利血平为广东邦明制药厂有限公司产品，批号H44021892；百优解为礼来苏州制药有限公司产品，批号A070884，临用前用1.5%羧甲基纤维素钠水溶液配成混悬液，备用。1.2 动物

雄性昆明种小鼠，体重18～22g，购于广东省医学实验动物中心，合格证号：SCXK [粤]2008-0002。1.3 仪器

多功能小鼠自主活动记录仪YLS-1A(北京吉安得尔科技有限公司产品)。

2 方法及结果

2.1 小鼠悬尾实验

将100只雄性小鼠随机分为5组，每组20只，分别为空白对照组、百优解组(35mg/kg)、大叶钩藤总生物碱低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)剂量组，各组均按0.2mL/10g体重灌胃给药，每日1次，连续7天。空白对照组灌服同体积的1.5%羧甲基纤维素钠水溶液。末次给药或1.5%羧甲基纤维素钠水溶液60min后，将小鼠尾部距末端1cm处用胶布贴于悬尾箱支架上，使小鼠成倒挂状态，其头部离箱底约5cm。悬挂时间为6min，统计小鼠后4min内悬尾累积不动时间(不动状态即小鼠在空中停止挣扎或仅有细小的肢体运动)[7]。2

.2 小鼠强迫游泳实验

分组及给药方法同“2.1”项，末次给药或1.5%羧甲基纤维素钠水溶液60min后，将小鼠头部朝下放入水深10cm、直径34cm的游泳桶内，水温(25±2)℃，观察6min内小鼠游泳情况，统计小鼠后4min内游泳累积不动时间(不动状态即小鼠停止挣扎或小鼠呈漂浮状态，小鼠四肢有轻微动作以保持头部在水面)[8]。

2.3 小鼠自主活动实验

将120只雄性小鼠随机分为6组，每组20只，分别为空白对照组、模型组、百优解组(35mg/kg)、大叶钩藤总生物碱低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)剂量组，各组均按0.2mL/10g体重灌胃给药，每日1次，连续7天。空白对照组灌服同体积的1.5%羧甲基纤维素钠水溶液。末次给药或1.5%羧甲基纤维素钠水溶液60min后，除空白对照组外各组腹腔注射利血平1mg/kg，1h后将小鼠放入小鼠自主活动测定仪，记录小鼠5min内自主活动次数。

2.4 数据统计处理

2.5.1 大叶钩藤总生物碱对小鼠悬尾不动时间的影响 大叶钩藤总生物碱低、中、高剂量组小鼠悬尾不动时间均短于空白对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。而对照药百优解组小鼠后4min的不动时间明显缩短，差异具有统计学意义(P<0.01)。结果见表1。

表1 大叶钩藤总生物碱对小鼠悬尾不动时间的影响 (n=20)

注：与空白对照组比较，*P<0.05,**P<0.01。

2.5.2 大叶钩藤总生物碱对小鼠强迫游泳不动时间的影响 大叶钩藤总生物碱低、中、高剂量组小鼠强迫游泳的不动时间均短于空白对照组，差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。而对照药百优解组小鼠后4min的不动时间明显缩短，差异具有统计学意义(P<0.01)。详见表2。

表2 大叶钩藤总生物碱对小鼠强迫游泳不动时间的影响 (n=20)

注：与空白对照组比较，*P<0.05,**P<0.01。

2.5.3 大叶钩藤总生物碱对小鼠自主活动的影响 大叶钩藤总生物碱低、中、高剂量组小鼠自主活动次数明显多于模型对照组，差异具有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。并与剂量呈正相关性。详见表3。

表3 大叶钩藤总生物碱对小鼠自主活动的影响 (n=20)

注：与模型对照组比较，#P<0.05,##P<0.01。

3 讨论

小鼠强迫游泳(Forced Swimming Test, FST)和悬尾(Tail Suspension Test, TST)实验是目前广泛应用的2种抗抑郁药评价动物模型实验，其基本原理是：在强迫游泳或悬尾的应激条件下，小鼠经挣扎后出现绝望表现，即不动状态，而抗抑郁药能缩短小鼠的不动时间。

本实验采用上述2种经典抗抑郁模型对大叶钩藤总生物碱进行了初步抗抑郁活性测试，实验结果表明：大叶钩藤总生物碱能明显缩短强迫游泳小鼠和悬尾小鼠后4min内的不动时间，且与给药剂量有一定相关性。此外，大叶钩藤总生物碱能增加利血平致抑郁小鼠自主活动次数，提示大叶钩藤总生物碱抗抑郁机制可能与单胺递质有关。本实验结果表明大叶钩藤总生物碱能够增强实验小鼠的应激耐受性，减少绝望小鼠的不动时间，具有明显的抗小鼠实验性抑郁作用。

大叶钩藤资源丰富，其总生物碱提取方法简单且成分与含量清楚，具有潜在开发前景。本研究结果对于促进大叶钩藤资源合理利用有一定参考价值。但大叶钩藤总生物碱抗抑郁活性是其中4种成分协同作用还是某一种成分起作用,具体机制如何,还有待进一步研究和证实。

[1] MALA A, KARKOU V, MEEKUMS B, et al. Dance/Movement Therapy (D / MT) for depression: A scoping review [J]. The Arts in Psychotherapy, 2012(39): 287-295.

[2] 杨小莹, 陈杰, 杨新明, 等. 抗抑郁药物及其研究方法的进展[J]. 中国中药杂志, 2007, 32(9):770-773.

[3] 国家药典委员会. 中国药典[S]. 北京: 化学工业出版社, 2000: 211.

[4] 郑嘉宁, 王定勇. 大叶钩藤生物碱类化学成分研究[J]. 中医药导报, 2009, 15 (1): 80-81.

[5] 伍俊妍, 李国成, 王定勇. 大叶钩藤非生物碱部分的化学成分研究[J]. 南方医科大学学报, 2007, 27(2): 226-227.

[6] 李维锋, 姜建国, 王定勇, 等. 大叶钩藤总生物碱提取溶剂的研究及钩藤碱的纯度测定[J], 食品科技, 2007(8): 156-158.

[7] STERU L, CHERMAT R, THIERRY B, et al. The tail suspension test: a new method for screening antidepressants in mice [J]. Psychopharmacology, 1985(85): 367-369.

[8] PORSOLT RD, BERTIN A, JALFRE M. Behavioural despair in mice: a primary screening test for anti-depressants [J]. Arch Inc Pharmacodyn Ther, 1977(229): 327-329.

(责任编辑：宋勇刚)

Preliminary Study on Antidepressant Effect of Total Alkaloids fromUncariamacrophylla

Li Yingxiong1, Ma Cun2, Liu Linsheng1, Zhao Lijuan1，Wang Dingyong2*
(1.Department of Pharmacy, Foshan Hospital of Traditional Chinese Medicine, Foshan 528000, China;2.College of Pharmacy, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China)

Objective:To study the antidepressant effect of total alkaloids fromUncariamacrophyllaWall. in mice. Methods:To investigate the antidepressant activities of total alkaloids fromU.macrophyllaby the mice tail suspension test, the mice forced swimming test and the freely active test in depressant mice caused by reserpine. Results:The different dose groups (50mg/kg, 100mg/kg, 200mg/kg) of total alkaloids from U. macrophylla could reduce the immobility time of mice in the tail suspension test and the forced swimming test, and also increase the times of free activities in the freely active test, compared with that of the control group or model group (P<0.05 orP<0.01). Conclusion:The total alkaloids fromU.macrophyllapossessed the significant antidepressant effect.

Uncariamacrophylla; Total Alkaloids; Antidepressant Effect

2015-04-27

广东省中医药局科研课题(20132030)

李影雄(1967-)，男，广东省佛山市中医院副主任药师，研究方向为医院药学。E-mail：fsliyi2007@21cn.com

王定勇(1967-)，男，博士，广东药学院教授，硕士生导师，研究方向为天然药物活性成分。E-mail：wdingyong@163.com

R285.5

A

1673-2197(2015)15-0015-02

10.11954/ytctyy.201515005