三七总皂甙磷脂复合物制备研究

陈娇婷, 温慧玲, 黄 浩,罗国安，2(.赣南医学院 药学院，江西 赣州34000；2.清华大学分析中心，北京 00084)



三七总皂甙磷脂复合物制备研究

陈娇婷1, 温慧玲1, 黄 浩1,罗国安1，2
(1.赣南医学院 药学院，江西 赣州341000；2.清华大学分析中心，北京 100084)

目的：制备三七总皂甙磷脂复合物，并研究其理化性质。方法：采用溶剂挥发法制备三七总皂甙磷脂复合物，利用紫外光谱法、差示扫描量热分析法对所得的磷脂复合物进行鉴定；测定磷脂复合物中三七总皂甙的含量；测定不同pH体系中三七总皂甙及其磷脂复合物的表观油水分配系数。结果与结论：复合物在不同pH的正辛醇/水系统中，表观油水分配系数与三七总皂甙有较大差异，油水分配性能显著改善。

三七总皂甙：磷脂复合物；含量测定

三七为五加科人参属植物[1]，始载于《本草纲目》，为常用传统中药之一，主产于云南和广西，是传统名贵中药材。

三七性平，味甘，微苦，含有多种类型的化学成分，药理作用广泛，具有化瘀止血、活血定痛之功。三七对中枢神经有镇痛作用，对缺血性脑损伤有保护作用，对心血管系统具有改善心肌缺血状态、止血等作用[2-5]。已有研究表明[6]：三七的主要成分为三七总皂甙，Rb1和Rg1是人参属植物所共有的成分，且含量最高，而Rl是三七特征皂甙成分，但其在三七生药中含量很低，因此本文主要以三七皂甙Rg1和Rb1作为研究对象。三七皂甙Rg1和Rb1单体Caco-2细胞转运透过系数(Papp)极低(1×10-7～1×10-8cm/s)，黏膜透过性差，三七皂苷Rg1和Rb1的大鼠绝对生物利用度分别为0.7l%和3.29%，口服吸收差[7]。因此，其属于口服难吸收成分，而且根据药物溶解性及胃肠道渗透性可将其归为BcsⅢ或Ⅳ类。

药物磷脂复合物是将药物与磷脂在适宜条件下进行复合得到的一类物质。天然活性成分磷脂复合物的理化性质和生物药剂学性质较原化合物均有不同程度的改变,通过与磷脂复合形成载体系统或前体药物,可改善药物经胃肠道或经皮吸收,故可获得较高的血药浓度,且药物在体内消除变慢,生物利用度显著提高[8]。为了提高三七总皂甙的生物利用度,本实验制备了三七总皂甙磷脂复合物,并对其性质进行了研究,为三七总皂甙的综合开发利用建立一定的实验基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器

1200型高效液相色谱仪(Agilent公司)；UV-2550型紫外分光光度计(日本岛津公司)；NETZSCHSTA499综合热分析仪(德国)。

1.2 试药

三七总皂甙(昆明双星科技开发有限公司提供)；乙腈(色谱纯，国药集团化学试剂有限公司)；超纯水(实验室自制)；所用其他试剂均为AR级。

2 方法与结果

2.1 三七总皂甙磷脂复合物制备

利用三七总皂甙脂溶性差，不溶于四氢呋喃,而磷脂和三七总皂甙磷脂复合物均易溶于四氢呋喃的特性, 按摩尔比1∶2的比例将三七总皂甙和磷脂后混匀，磁力搅拌至澄明，减压蒸发除去反应溶剂,加入适量四氢呋喃充分溶解其中的剩余物质,然后进行抽滤, 收集沉淀物。再用少量四氢呋喃洗涤沉淀物,再次减压蒸干，收集沉淀物, 减压干燥24h后称重,即得未与磷脂复合的三七总皂甙。

2.2 三七总皂甙磷脂复合物复合率测定

三七总皂甙初始投药量与沉淀量的差值即为与磷脂复合的三七总皂甙的量,通过下式可计算出三七总皂甙与磷脂的结合百分率(M):

M=(A-B) /A×100%

其中A为三七总皂甙的初始投药量；B为沉淀量。

计算得三七总皂甙磷脂复合物的复合率为98.3%，表明工艺可行。

2.3 三七总皂甙磷脂复合物光谱学分析

取一定量的三七总皂甙、磷脂、三七总皂甙与磷脂的物理混合物及三七总皂甙磷脂复合物,分别对其进行紫外、差示扫描量热分析。

2.3.1 UV扫描 以体积分数为75%乙醇做溶剂进行紫外检测,结果表明, 三七总皂甙、磷脂、三七总皂甙磷脂混合物和三七总皂甙磷脂复合物的紫外图谱相同,最大吸收峰均在197nm处,只是复合物的吸光度明显比前两种小,表明磷脂复合物中三七总皂甙发色基团的结构未发生变化。由于磷脂的极性键与三七总皂甙发生了较强的相互作用,导致其吸光度减小了。

2.3.2 差示扫描量热(DSC)分析 分别称取三七总皂苷、磷脂、三七总皂苷与磷脂物理混合物及三七总皂甙磷脂复合物适量，置浅铝皿中，程序升温，升温速度10℃/min，20～500℃进行扫描，N2流速0.2mL/min，差示扫描量热结果见图1，可见三七总皂甙与磷脂物理混合物相变温度图为两种物质的叠加。形成复合物后,相变温度降低,出现此现象可能是三七总皂甙的极性基团与磷脂的极性基团部分发生分子间相互作用，磷脂的两条长脂肪酸链对三七总皂甙进行包裹，使其高度分散于磷脂中，进而改变了药物相变温度，使其特征峰明显改变，这也证明形成了复合物，三七总皂甙磷脂复合物不同于其物理混合物。

2.4 三七总皂甙磷脂复合物中三七总皂甙含量测定

色谱条件：色谱柱：Kromasil C18(4.6mm×250mm，5μm)；流速：1.00mL/min；检测波长：197nm；柱温：室温；进样量：20μL。采用二元梯度洗脱：A相为乙腈，B相为水，梯度洗脱:0min→5min→20min→45min→67min→82min；流动相A∶B比例为10∶90，20∶80，35∶65，43∶57，58∶42，75∶25。

图1 三七总皂苷(A)、磷脂(B)、三七总皂苷与磷脂物理混合物(C)、三七总皂甙磷脂复合物(D)的DSC扫描

2.5 三七总皂甙磷脂复合物油水分配系数的测定

药物的脂溶性与其在胃肠道的渗透性密切相关，因此通过测定药物及其磷脂复合物在不同体系中的油水分配系数，可以描述药物脂溶性大小。

采用摇瓶法测定，分别量取pH为2、3、4、5、6的水20mL，置磨口三角瓶中，各2份，分别加入适量的三七总皂甙及其磷脂复合物，25℃振摇12h至溶解平衡，移至离心管中，3 000r·min-1离心20min。取上层液10mL，置磨口三角瓶中，分别加入正辛醇10mL，25℃振摇至溶解平衡(预试验表明平衡时间为24h)，3 000r·min-1离心20min。分别量取水相和正辛醇相2mL置10mL量瓶中，甲醇定容后测定，三七总皂甙及其磷脂复合物正辛醇/水分配系数测定结果见表1。

表1 三七总皂甙及其磷脂复合物正辛醇/水分配系数测定

从表1可以看出，复合物对于三七总皂甙在正辛醇中的溶解度提高了50多倍，在水中的溶解度提高了4倍多，P值提高10倍多。结果表明，磷脂能有效地提高三七总皂甙的正辛醇/水表观分配系数，提高了三七总皂甙的溶解性能。

3 讨论

三七总皂甙磷脂复合物在正辛醇/水系统中进行表观油水分配系数的测定，结果显示药物形成磷脂复合物后使药物的脂溶性得到了显著性提高。这可能是因为：三七总皂甙与磷脂的极性基团发生了较强的相互作用，而磷脂的两个长链脂肪酸不参与复合反应，可以自由移动，包裹磷脂的极性部分形成一个亲脂性的表面，使复合物的脂溶性较原料药显著提高。

本文制备的三七总皂甙磷脂复合物很好地解决了该药物脂溶性差的问题，同时该复合物还可以作为制剂中间体制备微丸等固体、液体制剂，为三七总皂甙制剂的开发提供了新的思路。

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[6] 郑光植，杨崇仁.三七生物学及其应用[M].北京：科学出版社，1994：78．

[7] 潘素静，龙晓英，林婉婷,等.复方丹参制剂口服吸收研究新进展[J].中成药，2013，35(7)：1526-1529.

[8] 翟光喜，娄红祥，邹立家,等.药物磷脂复合物的研究进展[J].中国药学杂志，2001,36(12):800-803.

(责任编辑：魏 晓)

Preparation of Total Saponins of Panax notogieng Phospholipid Complex

Chen Jiaoting1,Wen Huiling1,Huang Hao1,Luo Guoan1，2
(1.Gannan Medical University, Ganzhou 341000，China;2.Analysis Center,Tsinghua University, Beijing 100084，China)

Objective:To prepare a total saponins of panax notogieng phospholipid complex. Methods:Total saponins of panax notogieng phospholipid complex was prepared by solvent evaporation. It was analyzed by ultraviolet spectroscopy (UVS)，differential scanning calorimetry (DSC)．The content of total saponins of panax notogieng in the phospholipid complex was determined and the apparent oil-waterpartition coefficients of phospholipid complex were also examined in different systems．Results and Conclusions:The apparent partition coefficients in different systems were significantly different among the complex and bulk drug．

Total Saponins of Panax Notogieng; Phospholipid Complex; Content Determination

2015-03-17

陈娇婷(1980-)，女，赣南医学院讲师，研究方向为药物新剂型与新技术。

R284

A

1673-2197(2015)15-0023-03

10.11954/ytctyy.201515009