HLPC法测定青海不同产区冬虫夏草腺苷含量

尚 林，李建菊，尚 军(.青海省红十字医院，青海 西宁 80008；.青海省黄河水电新能源分公司，青海 西宁 80008；3.青海师范大学 青藏高原环境与资源教育部重点实验室，青海 西宁 80008)



HLPC法测定青海不同产区冬虫夏草腺苷含量

尚 林1，李建菊2，尚 军3*
(1.青海省红十字医院，青海 西宁 810008；2.青海省黄河水电新能源分公司，青海 西宁 810008；3.青海师范大学 青藏高原环境与资源教育部重点实验室，青海 西宁 810008)

目的：评价青海省不同产地冬虫夏草药材的内在质量。方法：以高效液相色谱法测定来源于10个产地的冬虫夏草腺苷的含量。结果：10个产地冬虫夏草的腺苷含量范围在0.011%～0.065%，其中玉树冬虫夏草腺苷含量最高为0.065%，其次是果洛为0.041%，化隆、民和及互助三地产冬虫夏草腺苷含量稍高于2010版《中国药典》标准。结论：不同产地冬虫夏草的腺苷含量不同，以玉树、果洛两地冬虫夏草品质较优。

冬虫夏草；腺苷；HLPC

冬虫夏草(Cordycepssinensis)又名中华虫草，简称虫草，是麦角菌科真菌冬虫夏草寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，是一种传统的名贵滋补中药材，有调节免疫系统功能、抗肿瘤、抗疲劳等多种功效[1-3]。腺苷是一种遍布人体细胞的内源性核苷，可直接进入心肌经磷酸化为腺苷酸，参与心肌能量代谢，同时还参与扩张冠脉血管，增加血流量。腺苷对心血管系统和机体的许多其他系统及组织均有生理作用。腺苷是冬虫夏草主要有效成分之一，也是虫草中功效成分的重要指标，2010年版《中国药典》将其作为指标成分应用于冬虫夏草的质量控制，规定腺苷含量不得少于0.010%。

青海省冬虫夏草数量和质量居全国之冠，其中玉树、果洛占青海省总产量的85%以上，以玉树产量为最高；此外，海南藏族自治州所属的兴海县、同德县、贵德县，黄南藏族自治州所属的同仁县、河南县，海东地区的化隆县、互助县、民和县脑山地区也有分布，但数量较少[4,5]。近年来由于冬虫夏草价格涨势迅猛，人们为追求经济利益，每年几乎在全省冬虫夏草分布区都有采挖，为了阐明青海省不同产地冬虫夏草的药材道地性及其品质特点，本文采用HPLC 法分析了10个产地的冬虫夏草中主要有效成分腺苷的含量。

1 仪器与药品

1.1 仪器

Waters600 高效液相色谱仪系列(Waters公司)；Pl202-L梅特勒-托利多分析天平。

1.2 药品

腺苷标准品(纯度≥99%，美国进口)，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯；实验水均为三级去离子水。冬虫夏草在2013年5月收购于产地农民，新鲜冬虫夏草去泥沙后于-86℃保存。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

以SunfireTM C18柱(250mm×4.6mm，5μm) 为固定相，磷酸盐缓冲液(pH6.5) (取0.01moL·L-1磷酸二氢钠68.5mL与0.01moL·L-1磷酸氢二钠31.5 mL混合)-甲醇(85∶15)为流动相，流速1.0mL·min-1，检测波长为260nm。理论塔板数按对照品峰计算，应不低于2 000[1]。在以上条件下，样品分离状况良好，见图1、图 2。

2.2 样品前处理

取1～10号冬虫夏草样品，分别粉碎，过三号筛，精密称取1.00g，置于25mL具塞比色管中，加入90%甲醇约20mL，密塞超声30min，放至室温后90%甲醇定容至25mL，经0.45μm滤膜过滤，滤液吸入进样小瓶作为待测样液。

2.3 线性关系考察

准确称取腺苷样品10mg于10mL比色管中，用水—甲醇(85∶15)溶解并定容于10mL，即为1mg/mL的储备液。精密吸取标准储备液，将其分别稀释为0.0、10.0、20.0、30.0、50.0μg/mL不同浓度的溶液，每个浓度进样2次，进样体积为10μL，取平均峰面积得到不同的响应值，如图3所示；以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为y=32 561x+6 929.8，R2=0.999 8，腺苷在10～50μg范围内呈良好线性关系。

图1 冬虫夏草腺苷标准品高效液相色谱

2.4 精密度试验

取对照品溶液，重复进样5次，每次10μL，对照品峰面积RSD 为0.11%，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

取对照品溶液在0、2、4、6、8h分别进样10μL，记录峰面积，结果5次进样腺苷峰面积RSD为1.75%，表明对照品溶液在8h内较稳定。

图2 冬虫夏草1号样品腺苷高效液相色谱

图3 腺苷标准曲线

2.6 重复性试验

取冬虫夏草1号样品，精密称定1.21g，按“2.2”样品制备方法，平行操作制备6份，以上述色谱条件测定，根据外标法以峰面积进行定量，RSD为0.46%。

2.7 加样回收率试验

精密称定已知腺苷含量的样品0.5g，添加腺苷对照品适量，按含量测定项下方法测定，5次测定的结果为(98.12±2.05)%。

2.8 含量测定

精密吸取“2.2”制备的1～10号冬虫夏草样本待测液10μL，按上述色谱条件测定，外标法计算含量，结果见表1。

表1 青海省不同产地冬虫夏草中腺苷含量

3 讨论

由表1 可见，产区不同，冬虫夏草的腺苷含量不同。玉树产冬虫夏草中腺苷含量要高于青海其他地区产冬虫夏草中腺苷含量；以腺苷含量为指标评价冬虫夏草药材的内在质量，玉树和果洛产冬虫夏草质量要优于青海其他产区冬虫夏草。这与传统认为玉树和果洛冬虫夏草品质优于青海其他地区的观点一致[6]。上述10个产地的冬虫夏草腺苷含量均大于0.010%，符合 2010 年《中国药典》冬虫夏草项下要求。但对冬虫夏草还需要考虑与冬虫夏草品质相关的其他成分，如虫草多糖、氨基酸、核苷类物质、甾醇类物质、脂肪酸、维生素以及矿质元素等的含量[7,8]。

[1] 国家药典委员会，中华人民共和国药典[M].一部.北京:中国医药科技出版社,2010:27.

[2] 漆伟,雷伟,严亚波,等.冬虫夏草药理学作用的研究进展[J].环球中医药,2014,7(3):227-230.

[3] 许国彩.青海冬虫夏草及有效成分对免疫调节作用的研究进展[J].高原医学杂志,2012,22(4):62-64.

[4] 于斌,梁留科,李湘豫,等.青海省冬虫夏草资源特征分析[J].植物分类与资源学报,2012,34(5):478-482.

[5] 李芬,吴志丰,徐翠,等.三江源区冬虫夏草资源适宜性空间分布[J].生态学报,2014,35(5):1318-1325.

[6] 尹定华,陈仕江,马开森.冬虫夏草资源保护、再生及持续利用的思考[J].中国中药杂志,2011,36(6):814-816.

[7] 张志红,杨璐敏,邰丽梅,等.冬虫夏草生理活性成分的研究进展[J].中国食用菌,2014,33 (4):1-4.

[8] 肖远灿,胡风祖,董琦,等.青海玉树不同产地冬虫夏草中 15 种核苷类成分比较研究[J].中国药学杂志,2014,49(22):1983-1988.

(责任编辑：魏 晓)

Contents Determination of Adenosine in Different Origins Cordyceps Sinensis by HPLC

Shang Lin1，Li Jianju2，Shang Jun3*
(1.Qinghai Red Cross hospital，Xining 810008, China 2.Qinghai Huanghe Hydropower Development Co. Ltd. New Energy Branch，Xining 810008,China；3.Key Laboratory of Education Ministry on Environment and Resources in Qinghai and Tibet Plateau,Qinghai Normal University，Xining 810008,China)

Objective:In order to evaluate ten different origin cordycepssinensis’ immanent quality in Qinghai.Methods:we took HPLC as the detection.Results:the ten different origin cordyceps adenosine’s content were in the range of 0.011 ～ 0.065%, and Yu Shu cordyceps adenosine’s content were up to 0.065%, and the second was Guo-Luo which cordyceps adenosine’s content were 0.041%, while Hua-Long, Min-He and Hu-Zhu，these three place’scordyceps adenosine content are slightly higher than the "Chinese pharmacopoeia(2010)" regulation. This article implied that cordyceps adenosine’s content is different in different producing areas,Yu-Shu and Guo-Luo’scordycepssinensis quality better than the other place in Qing-Hai.

Cordyceps Sinensis；Adenosine；HLPC

2015-03-12

青海省药用动植物资源研究重点实验室项目(2013-Z-Y10)

尚林(1963-)，男，青海省红十字医院主管药师，研究方向为天然药物研究。

尚军(1975-)，男，青海师范大学副教授，研究方向为天然药物化学。E-mail：shjun2004@126.com

R284

A

1673-2197(2015)15-0029-02

10.11954/ytctyy.201515011