痛风气雾剂皮肤用药毒性实验研究

刘维超 ,李兆福，万春平，狄朋桃 ，吴晶金 ，彭江云，李自安

(1.云南中医学院第一附属医院,云南 昆明 650021； 2.成都军区昆明总医院,云南 昆明650032)



痛风气雾剂皮肤用药毒性实验研究

刘维超1,李兆福1，万春平1，狄朋桃1，吴晶金1，彭江云1，李自安2*

(1.云南中医学院第一附属医院,云南 昆明 650021； 2.成都军区昆明总医院,云南 昆明650032)

目的：通过对痛风气雾剂的皮肤用药毒性实验，探讨该药治疗急性痛风性关节炎的皮肤用药安全性，为下一步开展临床前研究，开发安全有效、简便易行的痛风外用制剂提供理论依据。方法：观察痛风气雾剂皮肤用药毒性试验，实验采用健康日本大耳白家兔各24只进行皮肤用药急性毒性试验及皮肤刺激性试验,用30只健康豚鼠进行皮肤过敏试验(致敏接触、激发接触)。结果：痛风气雾剂高低两个剂量组用于完整皮肤及破损皮肤家兔观察7天，全部动物均健康存活，未见毒性反应；痛风气雾剂连续7天给予家兔完整皮肤和破损皮肤区，皮肤刺激反应平均分为0，无刺激性；用于豚鼠皮肤未见过敏反应，致敏发生率为0，全部动物健康存活。结论：痛风气雾剂无明显毒副作用，是一种安全有效、方便易行的治疗急性痛风性关节炎的外用药物，具有临床实用价值，值得进一步开发和推广应用。

痛风气雾剂；急性毒性试验；皮肤刺激性；皮肤过敏性

痛风气雾剂处方源于云南两代名中医吴生元教授、彭江云教授长期治疗痛风的临床经验，从痛风外用洗剂、外用贴剂到气雾剂，由云南省药物研究所生产，主要用于治疗急性痛风性关节炎。为考察痛风气雾剂的外用安全性，根据《中药新药研究指南(药学药理学毒理学)》(中华人民共和国卫生部药政管理局发布)的要求，进行皮肤用药急性毒性、皮肤刺激性和皮肤过敏试验，为开发痛风气雾剂提供理论依据，现报道如下。

1 实验材料

1.1 实验药品

痛风气雾剂，由云南省药物研究所提供，每毫升含生药量为10g；赋形剂：65%乙醇；阳性致敏药物：2，4-二硝基氯代苯，上海试剂一厂生产，批号：2002-03。

1.2 实验动物

健康日本大耳白家兔48只，体重(2.18±0.17)kg，雌雄各半，购自成都达硕生物科技有限公司，合格证号：SCXK(川)2008-24；健康豚鼠30只，雌雄各半，体重(265.3±4.6)g，购自成都达硕生物科技有限公司，合格证号：滇实动证第2003044号。

2 实验方法

2.1 皮肤用药急性毒性试验

将健康日本大耳白家兔24只按雌雄各半随机分为六组，每组4只。六组分别为：对照组(完整皮肤)、对照组(破损皮肤)、低剂量组(完整皮肤)、低剂量组(破损皮肤)、高剂量组(完整皮肤)、高剂量组(破损皮肤)。各兔背部用理发剪去毛约50cm×30cm，破损皮肤用手术刀在脱毛消毒皮肤区作“井”字，以渗血为度，备皮后分笼饲养，观察1天开始用药。对照组外用蒸馏水，痛风气雾剂低剂量组1喷(即每亳升含生药量10g)，高剂量组3喷，喷药后自然吹干， 24h后蒸馏水洗去家兔背部受试药物，于1、24、48、72h直至第7日，每日观察各家兔皮肤毛发，眼和黏膜的变化，呼吸、中枢神经系统、四肢活动、食量和粪便等情况。

2.2 皮肤刺激性试验

将健康日本大耳白家兔24只，随机分为六组，每组4只，雌雄各半。六组分别为：对照组(完整皮肤)、对照组(破损皮肤)、低剂量组(完整皮肤)、低剂量组(破损皮肤)、高剂量组(完整皮肤)、高剂量组(破损皮肤)。在家兔背部两侧对称区域用理发剪去毛大小约50cm×30cm。破损皮肤组用手术刀在脱毛消毒皮肤区划两个等大的“井”字，以渗血为度。分笼饲养，观察1天后开始用药。对照组不用药，其余每只家兔背部左侧皮肤外喷痛风气雾剂(低剂量组为1喷；高剂量组为3喷)，背部右侧区外搽65%酒精(赋形剂)，自然吹干。依照上述方法每天用药1次，连续7天，之后停药再观察1周。每日观察记录家兔背部用药部位是否有皮肤红斑、水肿情况，是否有色素沉着、出血点以及皮肤变粗或变薄等情况。根据《中药新药研究指南(药学药理学毒理学)》(中华人民共和国卫生部药政管理局)P210～P211 “Score criterion degree of cutancous stimulus response”“Evaluation criterion cutancous stimulus”进行评分统计。

表1 皮肤刺激反应程度评分标准

表2 皮肤刺激性评价标准

2.3 皮肤过敏试验

将30只健康豚鼠随机分为三组，雌雄各半，三组分别为：痛风气雾剂组、蒸馏水组、阳性对照组。将豚鼠背部左侧区域去毛，面积约9cm2，分笼饲养，观察1天后开始用药。

2.3.1 致敏接触 气雾剂组外喷药物1喷(每毫升含生药10g)，蒸馏水组外搽蒸馏水0.2mL/只，阳性对照组外搽1% 2，4-二硝基氯代苯0.2mL/只。自然吹干，6h后用温水洗去背部药物。用同样方法在第7天及第14天给药1次，观察豚鼠左侧脱毛区是否有水肿、红斑情况，并做记录。

2.3.2 激发接触 致敏接触试验后第14天，在同一批豚鼠背部右侧进行脱毛，面积约9cm2，之后用同样的方法再给药1次，6h后用温水洗去背部药物。观察当时、24h、48h、72h皮肤是否出现红斑、水肿，以及有无全身过敏情况。根据《中药新药研究指南(药学药理学毒理学)》(中华人民共和国卫生部药政管理局)P212表3、表4“皮肤过敏反应程度的评分标准”和“皮肤致敏性评价标准”进行评价分析。

表3 皮肤过敏反应程度评分标准

表4 皮肤致敏性评价标准

3 实验结果

3.1 皮肤用药急性毒性试验

试验结果表明，痛风气雾剂高剂量组(完整皮肤)、高剂量组(破损皮肤)、低剂量组(完整皮肤)、低剂量组(破损皮肤)，用药后1周，家兔的饮食、行为活动、眼和黏膜、肤色、皮毛、体重、呼吸及精神状态、粪便及分泌物均正常，所有家兔健康存活，未发生任何毒性反应。破损皮肤1周均已脱痂痊愈。详见表5。

3.2 皮肤刺激性试验

试验结果表明，痛风气雾剂低剂量组、高剂量组和对照组的完整皮肤和破损皮肤区，14天内均未出现明显的红斑和水肿、色素沉着、出血点或皮肤粗糙、变薄等情况，刺激反应平均分值均为零，说明痛风气雾剂对家兔的皮肤无刺激性。详见表6。

表5 痛风气雾剂对家兔皮肤的急性毒性试验结果

表6 痛风气雾剂对家兔皮肤刺激性试验结果

3.3 皮肤过敏试验

试验结果表明，痛风气雾剂组及蒸馏水组，外用于豚鼠皮肤，均未见局部和全身过敏反应。详见表7、表8。

4 讨论

痛风患病率逐渐升高，无论中医西医都在寻找一种安全、有效、毒副作用小的药物及治疗方法。痛风气雾剂的前身痛风清洗剂、痛风贴在临床应用多年，疗效颇佳，为方便患者携带、使用，保证药物疗效，本课题组改剂型为气雾剂。将药液以雾状形式喷射出来，直达病灶或局部吸收而发挥疗效。其优点[1]：①使用方便，起效迅速；②能保持药物清洁和无菌，并能提高药物稳定性；③可减少局部涂药的刺激和感染；④给药剂量小，副作用少。通过查阅文献资料，临床上常用的气雾剂主要是吸入气雾剂，如治疗心绞痛的宽胸气雾剂，治疗慢支炎、哮喘的艾叶油气雾剂等[2]，但专治痛风性关节炎的气雾剂尚未见报道，因此该药的研究将填补痛风外治气雾剂的空缺。

表7 痛风气雾剂对豚鼠皮肤的致敏接触实验结果

表8 痛风气雾剂对豚鼠皮肤的激发接触实验结果

注：平均分值=(红斑形成总分+水肿形成总分)/合计动物数

通过痛风气雾剂对家兔皮肤用药急性毒性试验，皮肤刺激性试验及豚鼠皮肤过敏试验(致敏接触及激发接触)，结果显示，痛风气雾剂用于家兔皮肤无刺激性，未见毒性反应；用于豚鼠皮肤未见过敏反应，因此痛风气雾剂是一种安全的皮肤外用药。

[1] 吴震西,吴自强.中医内病外治[M].第1版.北京：人民卫生出版社，2007:30.

[2] 丁立,洪醒华.中药气雾剂产品的现状与前景[J].中国中西医结合杂志,2007,27(10):957-958.

(责任编辑：宋勇刚)

2014-11-13

云南省卫生科技内设研究机构项目(2011WS0026)；云南省中医医院院级科研项目(2011yj014)

刘维超(1980-)，女，云南中医学院第一附属医院主治医师,研究方向为中西医结合诊治风湿免疫系统疾病。

李自安(1973-)，男， 成都军区昆明总医院实验师，研究方向为动物医学实验。

R285.5

A

1673-2197(2015)07-0008-03

10.11954/ytctyy.201507004