马牙七提取物体外抗菌研究＊

姜 祎 徐 虹 李稳柱 董桂颖 魏引平 张 明 王红云 邓 翀

陕西中医药大学 （咸阳712046）

马牙七为兰科虾脊兰（Calanthe fimbriata Franch.）和剑叶虾脊兰（Calanthe davidii Franch.）的假鳞茎和根，具有清热解毒的作用，民间用于慢性咽炎、肝炎、胃溃疡的治疗［1］，尚未见其抑菌作用的详细研究。本研究以马牙七为研究对象，采用琼脂扩散法［2－5］测定马牙七提取物对金黄色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌、肠炎沙门菌、肺炎克雷伯氏菌、普通变形杆菌、生孢梭菌、大肠埃希氏菌、乙型溶血性链球菌的抑菌作用，为其开发利用提供实验依据。

1 材料与仪器 马牙七，2013年8月采自陕西省汉中市城固县，经陕西中医学院药学院，杨新杰（博士）鉴定为流苏虾脊兰，取地下部分用于实验。罗红霉素、阿莫西林购自联邦制药；金黄色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌、肠炎沙门菌、肺炎克雷伯氏菌、普通变形杆菌、生孢梭菌、大肠埃希氏菌、乙型溶血性链球菌购自上海慧耘生物科技有限公司。

1.1 马牙七提取物的制备 1.1.1 马牙七水提液的制备：称取一定量的马牙七，粉碎，取粗粉20g，加蒸馏水80mL，煎煮2h，过滤，滤液浓缩至4mL，滤膜过滤除菌，得到马牙七水提液（5g／mL），装入无菌试管中备用。

1.1.2 马牙七正丁醇部位的制备：称取一定量的马牙七，粉碎，取粗粉20g，加60%乙醇80mL，回流提取2h，过滤，滤液浓缩至无醇味，加正丁醇萃取3次，回收正丁醇干燥，加蒸馏水得马牙七正丁醇部位（5g／mL），装入无菌试管中备用。

1.1.3 供试菌浓度测定：供试菌种经传代培养后，接种于（MH）肉汤培养基中，37℃恒温箱培养6h，经比浊法判定菌量后，再用MH肉汤稀释至含菌量为105CFU／mL的菌悬液。

1.2 方 法 1.2.1 抑菌浓度：取MH肉汤培养基分装于试管中，每只9mL，常压灭菌后加入马牙七水提取物、正丁醇部位、阿莫西林、罗红霉素使MH肉汤培养基含药浓度分别为0.4，0.2，0.1，0.05，0.02，0.01g／mL，接种痢疾志贺氏菌实验菌液0.05mL（105CFU／mL），接种3皿；MH肉汤培养基接种痢疾志贺氏菌作为空白对照，于37℃恒温箱培养18h，结果见表1。

表1 不同浓度马牙七提取物对痢疾志贺氏菌的抑菌作用

1.2.2 马牙七提取物抑菌作用的测定：取 MH肉汤培养基分装于试管中，每只9mL，常压灭菌后加入马牙七水提取物、正丁醇部位使MH肉汤培养基含药浓度为0.2g／mL；加入阿莫西林、罗红霉素使MH肉汤培养基含药浓度分别为0.05g／mL。然后接种金黄色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌、肠炎沙门菌、肺炎克雷伯氏菌、普通变形杆菌、生孢梭菌、大肠埃希氏菌、乙型溶血性链球菌实验菌液0.05mL（105CFU／mL），接种3皿，并以空白 MH 肉汤培养基，接种相同菌种作为对照。于37℃恒温箱培养18 h，结果见表2。

表2 马牙七提取物对细菌的抑菌作用

2 结 果 马牙七提取物对痢疾志贺氏菌相对生长率的影响见表1。从表1可看出，随着提取物浓度的增加，细菌的生长受到抑制，浓度为0.2g／mL时，马牙七水提物、正丁醇部位对痢疾志贺氏菌完全抑制，抑菌效果与0.05g／mL的阿莫西林和罗红霉素相当。马牙七提取物对金黄色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌、肠炎沙门菌、肺炎克雷伯氏菌、普通变形杆菌、生孢梭菌、大肠埃希氏菌、乙型溶血性链球菌的抑菌作用见表2。浓度为0.2g／mL时，从表2可看出，马牙七水提取物对痢疾志贺氏菌、乙型溶血链球菌有抑菌作用，抑菌作用与0.05g／mL的阿莫西林相当；马牙七正丁醇提取物对痢疾志贺氏菌、乙型溶血链球菌和金黄色葡萄球菌有抑菌作用，抑菌作用与0.05g／mL的阿莫西林相当。马牙七水提物对痢疾志贺氏菌抑制效果优于正丁醇部位，而正丁醇部位具有明显的抗金黄色葡萄球菌效果，其抗金黄色葡萄球菌的有效成分集中在正丁醇部位。

实验结果表明马牙七不同溶剂的提取物对痢疾志贺氏菌、乙型溶血链球菌和金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用。

3 讨 论 本实验采用体外抗菌试验测定马牙七的抗菌作用，该方法简便经济，广泛用于初步筛选。马牙七不同溶剂的提取物对痢疾志贺氏菌、乙型溶血链球菌和金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用，而链球菌、葡萄球菌感染是引起咽炎的主要病因之一，且多出现耐药性［4］，马牙七民间用于咽炎的治疗［1］，本实验结果与民间用药吻合。体外实验证明马牙七不同溶剂的提取物对痢疾志贺氏菌、乙型溶血链球菌和金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用，需动物实验进一步验证，其抗菌有效成分不明有待进一步研究。

［1］ 宋小妹，刘海静.太白七药研究与应用［M］.人民卫生出版社，2011：28－29.

［2］ 王艺宙，方 凯，王 慧，等.嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌协同抑制痢疾杆菌的活性研究［J］.中国药科大学学报，2015，46（1）：117－122.

［3］ 董开忠，傅思武，杨世英，等.铁棒锤提取物对常见肠道致病菌体外抑制作用［J］.中成药，2015，37（1）：213－216.

［4］ 郑申健，左满凤，舒琼璋，等.新生儿感染性肺炎痰培养病原菌分布及耐药性分析［J］.儿科药学杂志，2015，21（2）：44－48.

［5］ 黄维真，宁小清，梁 红，等.白花九里明抗菌和抗炎作用研究［J］.中药药理与临床，2015，31（1）：158－161.