钒钼黄比色法测定食品中磷的研究

向晓黎，王 静，王国红

（1.新疆农垦科学院分析测试中心，新疆 石河子832000；2.农业部食品质量监督检验测试中心，新疆 石河子832000）

1 引言

磷是人体含量较多元素之一，是构成人体骨骼主要元素，钙磷比值是判断软骨症的重要指标［1］，是细胞膜和核酸的构成成分，还参与生命活动的很多代谢过程［2］，因此检测食品中磷的含量很有意义。实际工作中发现，GB/T5009.87—2003钼蓝分光光度法测定食品中磷含量显色时间长，所用试剂不够稳定，方法不够灵敏［3］，为此，本方法通过对消解液酸度的调节，显色剂进行了改进，简化了操作过程，得到了较好的精密度和准确度，满足日常检测的需要，大大提高了工作效率。

2 材料与方法

2.1 仪器

紫外可见分光光度计（TU－1901型，北京普析通用仪器有限责任公司）；数控电热板（Lab tech EG－35A型，昆山恒仪电子科技有限公司）等实验室常用设备。

2.2 试剂

（1）氢氧化钠溶液（2mol/L）：80.0g氢氧化钠（分析纯）溶于水，用水定容到1L。

（2）硫酸溶液（4.52mol/L）：吸取28.0mL浓硫酸（分析纯），缓缓注入水中，并用水定容到1L。

（3）2，4—二硝基酚（或2，6—二硝基酚）指示剂：溶解0.20g 2，4—二硝基酚溶于100mL水中。

（4）钒钼酸铵溶液：

A：称取25.0g钼酸铵溶于400mL水中。

B：称取1.25g偏钒酸胺溶于300mL沸水中，冷却后加250mL硝酸，冷却。

再搅拌下将A液缓缓注入B液中，用水稀释至1L，混匀，贮于棕色瓶中。

（5）磷（P）标准 储备溶液（100μg/mL）：精确称取0.4390g在105℃烘干2h的磷酸二氢钾（优级纯），用水溶解后，转入1L容量瓶中，加入5mL浓硫酸（防腐，分析纯），用水定容到1L，该溶液1mL含磷（P）100μg。此溶液可以长期保存。

（6）磷（P）标准使用溶液（50μg/mL）：吸取100μg/mL（P）标准贮备溶液50mL于100mL容量瓶中，加水定容，此溶液1mL含磷（P）50μg。

2.3 测定方法

2.3.1 方法原理

待测液在一定酸度下，其中的磷酸根离子与偏钒酸和钼酸反应形成黄色三元杂多酸。在一定浓度范围［1mg/L～20mg/L］内，黄色溶液的吸光度与含磷量成正比例关系，用分光光度法定量分析磷含量［4］。

2.3.2 标准曲线绘制

分别移取磷标准使用溶液（每毫升相当于50μg磷）0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0 mL，置于50mL容量瓶中，加水至15～20ml，依次加入2，4—二硝基酚指示剂2滴，用前述稀氢氧化钠溶液和稀硫酸（1.2.2）溶液调节pH值至溶液刚呈微黄色，以标准曲线零管为参照。加入10.00mL钒钼酸铵溶液，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静止30min后，在分光光度计波长440nm处用2cm光径比色皿，以零管溶液作参比调节仪器零点，进行比色，测定各标准溶液的吸光度，并绘制标准曲线。

2.3.3 未知样品中磷的测定法

将瓷蒸发器在火上加热灼烧、冷却，准确称取均匀样品0.3（精确0.0001）g，在火上灼烧成炭分，再于550℃下成灰分。直至灰分呈白色为止（必要时，可在加入浓硝酸湿润后再灰化，有促进样品灰化至白色的作用），加稀盐酸（1＋1）10mL及硝酸2滴，在水浴上蒸干，再加稀盐酸（1＋1）2mL，用水分数次将残渣完全洗入100mL容量瓶中，并用水稀释至刻度，摇匀，过滤（如无沉淀则不须过滤）。取滤液5mL（视磷量多少定）置于50mL容量瓶中，以空白试验溶液作参比调零，以下同标准曲线绘制。

同时做样品空白试验。

3 结果与讨论

3.1 标准曲线及线性关系

用本法和国标法同时做磷标准曲线系列，其比对测定结果见表1。

表1 两种方法所测的标准系列比对

由表1可以发现，国标法磷含量在磷0～10μg的标准系列得到的吸光值低，而且不时出现“跳管”现象，线性关系差，不能满足测量需要［5，6］；本法磷含量在0～450μg范围时符合比尔定律，具有良好的线性关系，其相关系数r＝1.000，回归方程为改进后的方法标准曲线显色明显，吸光度大，灵敏度高。

3.2 准确度试验

分别称取国家标准参考物质奶粉（GWB10017），鸡肉（GWB10018），按照本法进行样品检测，6次测定的平均值均与标准参考值相符，结果见表2。

表2 标准物质中磷元素的测定结果 （n＝6）

由表2可以看出用改进法测定食品中磷的含量，2种国家标准物质的测定平均值均在其标准参考值范围内，测定值的相对标准偏差在2.41%～2.61%之间。这表明本方法具有良好的准确度，样品分析结果准确可靠。

3.3 加标回收实验

选择上述2个已知本底的标准物质作为样品，每份样品中添加低、高2个不同含量的磷标准溶液，按本法分别测定2次其含量并计算回收率，结果见表3。由此表看出平均回收率在94%～97%之间，符合分析方法要求。

表3 样品加标回收率试验

4 结论

建立钒钼黄比色法测定食品中磷的检测技术具有在显色前预先调节消解液酸度，加入较稳定显色剂和曲线线性较好的优点，与国标法［7］相比，操作方便，重现性和准确度较好，避免了有毒试剂对试验人员的危害及对环境的污染，故而适用于食品中磷的测定。

［1］郭经燕.食品卫生手册［M］.郑州：河南科学技术出版社，1984：47.

［2］孙梦里.临床营养学［M］.北京：北京大学医学出版社，2005：19.

［3］卫 敏，LIURuihai，DINGLiang.食品中磷的检测方法［J］.中国科学：化学，2010，40（7）：914～921.

［4］中华人民共和国农业部.NY/T 2017－2011植物中氮、磷、钾的测定［S］.北京：中华人民共和国农业部，2011.

［5］陈 澍，向仕学，宋建莉.食物中磷测定方法的改进［J］.现代预防医学，2004，31（5）：796～797.

［6］罗颂华.分光光度法测定食品中磷酸盐的标准曲线选择［J］.计量与测试技术，2007，34（10）：54～55.

［7］中华人民共和国卫生部.GB/T5009.87—2003食品中磷的测定［S］.北京：中华人民共和国卫生部，2003.