浅析药品依诺肝素钠的生产工艺

薛发珍

摘 要：这项生产工艺是本课题大量实验的相关成果，借鉴法国公司依诺肝素钠生产情况，采用一种原材料，经过科学、严谨的生产过程，所研制的依诺肝素钠样品符合欧洲药典标准。根据实验情况，文章总结了生产过程中需要重视的环节，使这种药品国产化成为可能。

关键词：依诺肝素钠；生产；酯化率；成环率；纯化

药品依诺肝素钠（enoxaparin sodium）是一种低分子肝素药物，这种药品是治疗预防与脑血栓的最佳药品之一，具有抗血栓作用强、出血危险性小等特征，经临床试验表明，依诺肝素钠能达到抗凝血、抗血栓形成的显著疗效，故此，这种药品具有重要的医疗价值，对生物制药企业而言，大面积生产这种药品，能带来大量的经济效益，同时也能满足我国的医疗需求。

1 依诺肝素钠的生产工艺

1.1 依诺肝素钠现行的生产工艺

依诺肝素钠主要特征为分子中有一个4-烯吡喃糖醛酸结构（图1）。目前，医疗上使用的依诺肝素钠都由法国Aventis公司研发，并由这家公司在1993年申请专利。由于这项专利未涉及生产过程中酯化率、成环率及产物纯化等关键工艺，因此存在一定的缺陷，这就使得法国这家公司运用该专利生产的药物样品时，距离欧洲药典4.0版规定的标准尚有一定的距离。

1.2 这项生产工艺的研究目的

这项研究主要是通过对相关反应条件的控制，研制出可以实现流水线生产依诺肝素钠的生产工艺，生产出来的样品，经过多次实验，表明这些样品的溶液颜色符合欧洲药典4.0版要求，其余质量指標均符合欧洲药典5.3版。

1.3 这项工艺所需的仪器与试剂

根据生产过程的相关要求，结合前期的研究情况，这项工艺所需的仪器、设备和试剂，有如下几种：1100型高效液相色谱仪、TSK-GEL 凝胶色谱柱及1100型示差检测仪均为Agilent产品；UV-2101PC型紫外检测仪（日本岛津）。肝素钠（南京健友公司）；苄索氯铵[benz e thoniumchloride，化学名为苄基二甲基[2-[2-[4-（1，1，3，3-四甲基丁基）苯氧基]乙氧基]乙基]氯化铵，Sigma公司]；二氯甲烷、氯苄（上海三爱思试剂有限公司）；H103型非极性大孔聚苯乙烯吸附树脂（南开大学化工厂，柱径3.6cm，柱床体积550ml）；依诺肝素钠标准品（欧洲药典标准品）；其他试剂均为分析纯。

2 依诺肝素钠的生产过程

根据课题组的大量实验，依诺肝素钠的生产过程包括如下几个步骤。

2.1 合成肝素苄索氯铵盐

取肝素钠10g，加水50ml溶解；取苄索氯铵25g溶于水100ml中，搅拌下将其缓慢加至肝素钠溶液中，过滤。滤饼用水洗涤，烘干，得肝素苄索氯铵盐31.2g。

2.2 合成肝素苄基酯

取肝素苄索氯铵盐30g，加二氯甲烷150ml搅拌溶解后，缓慢滴加氯苄31.5ml，35℃反应25h。反应完毕加入溶有醋酸钠18g的甲醇180ml，待沉淀析出后，过滤。滤饼用甲醇洗涤，干燥，得肝素苄基酯10.5g。

2.3 配制碱性溶液，解聚制成品

取肝素苄基酯30g，溶于水900ml中，加热至62℃，加入氢氧化钠4.5g，搅拌解聚1h。反应完毕，冷却，用盐酸调至pH 6.0，加氯化钠90g使其终浓度为10%。边搅拌边加甲醇2.7L，析出沉淀过滤。滤饼用甲醇洗涤，减压干燥，得黄褐色依诺肝素钠粗品20g。

2.4 对粗品进行纯化

取依诺肝素钠的粗品23g，加水溶解得5%溶液，加入活性炭，搅拌，过滤，滤液减压浓缩至浓度为25%（w/v）。将依诺肝素钠浓缩液上非极性大孔聚苯乙烯吸附树脂柱，用水洗脱，收集目标峰。收集液（约460ml）中加入3倍体积乙醇沉淀依诺肝素钠，过滤，滤饼加适量水溶解后冷冻干燥，得依诺肝素钠成品18.8g。总收率为60%。

2.5 检测制成品

首先，精密称取依诺肝素钠标准品5mg，溶于0.2mol/L硫酸钠溶液（pH5.0）0.5ml，配制成标准品溶液；其次，精密称取依诺肝素钠 10mg，溶于0.2mol/L硫酸钠（pH5.0）溶液1ml，配制成供试品溶液。样品检测需要的色谱条件是：色谱柱TSK-GEL凝胶色谱柱（7.8mm×300mm，5μm），流动相 0.2mol/L硫酸钠溶液（用稀硫酸调至pH5.0），流速0.5ml/min，检测波长234nm进样量25μl。所得数据用高效液相色谱仪自带的Excel软件计算。然后，开始检测，取依诺肝素钠和依诺肝素钠标准品进行红外和核磁共振研究。依诺肝素钠样品的红外特征吸收峰和核磁共振图谱均和标准品一致。依诺肝素钠按欧洲药典5.3版下方法检测，结果见表1。另精密称取依诺肝素钠，按欧洲药典5.3版下方法进行溶液比色，结果略深于6号色，但浅于欧洲药典4.0版规定的5号色。

3 研究结论

根据课题组大量的前期实验，根据这项生产工艺和生产方法，制造出来的依诺肝素钠制品，完全达到欧洲药典4.0版的标准要求，而且比法国公司的制成品要稍胜一筹，这就意味着这种药品的国产化已经成为现实可能，必将降低消费者的相关医疗开支，给消费者带来了福利，同时也会为我国相关生物制药企业带来潜在的商机。

根据前期的相关实验，依诺肝素钠制成样品的质量情况和临床疗效，根据控制酯化率、控制成环率、样品的纯化有着直接的关系，生产过程中，如果着重注意上述三个环节，制成样品一定能达到满意的情况。控制酯化率的过程中，酯化率越高，解聚产物的平均分子量越低，只有当酯化率为12%～13%时，产物的分子量符合欧洲药典5.3版的标准。因此，必须通过一些程序来降低制成品的酯化率。一些实验数据表明，酯化率一般通过反应温度和时间来控制。反应温度越高，时间越长，酯化率越高。其次，根据实验，制成品成环率的控制，主要在于聚集时间的控制，解聚时间为1小时左右，可使最终产物中1，6-脱水结构单元的含量符合欧洲药典5.3版的标准。对于制成品中出现的一些有色杂质，利用活性炭和大孔吸附树脂组合法对制成品进行脱色，可有效分离有色杂质，使得成品大部分指标符合欧洲药典5.3版的标准。只要我国医药企业积极采用这项生产工艺，在生产过程中重视这三个环节的实时控制，一定能大批量生产出满足临床要求的依诺肝素钠药品。

参考文献

[1]石峰，姬胜利，迟延青，等.低分子肝素的制备方法及其结构与生物活性的关系[J].中国生化药物杂志，2003，24（2）.

[2]Rieux RD. Mixtures of particular LMWH heparinicpolysacchrides for the prophylaxis/treatment of acutethrombotic events：US，5389618[P].1995-02-14；DE，4121115[P].1992-01-02.（CA1992，116：108670）.