复发缓解型多发性硬化患者脑脊液及血清中非髓鞘神经相关蛋白的检测及临床意义

何 佳，何进宇，宋晓征，张丽雅，黄 睿

(1.成都363医院神经内科，四川 成都 610041；2.四川省人民医院神经内科，四川 成都 610041)

复发缓解型多发性硬化患者脑脊液及血清中非髓鞘神经相关蛋白的检测及临床意义

何 佳1，何进宇1，宋晓征1，张丽雅1，黄 睿2

(1.成都363医院神经内科，四川 成都 610041；2.四川省人民医院神经内科，四川 成都 610041)

目的探讨复发缓解型多发性硬化(RRMS)患者脑脊液及血清中非髓鞘神经相关蛋白的水平及其临床意义。方法选择2010年1月至2014年12月我院收治的70例RRMS患者作为观察组，同期来我院体检的70例健康体检者作为对照组，分别比较两组受试者的脑脊液与血清中的非髓鞘神经相关蛋白水平(包括14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白)。结果观察组患者脑脊液中的14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白水平均较对照组高，两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)；观察组患者血清中的14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白水平分别与对照组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论复发缓解型多发性硬化患者脑脊液中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白非髓鞘神经相关蛋白均有明显升高现象，可以作为该病的检查指标，而血清中非髓鞘神经相关蛋白则无明显变化。

多发性硬化；脑脊液；血清；非髓鞘神经相关蛋白

多发性硬化(Multiple sclerosis，MS)属于自身免疫性疾病，其主要特点为中枢神经系统(Central nervus system，CNS)炎性脱髓鞘[1]。近年来有相关研究显示，MS患者不仅存在脱髓鞘损伤，还会出现非髓鞘神经损伤，其中包括胶质细胞、轴索及神经元的损伤[2]。能够反应胶质细胞、轴索及神经元的损伤的非髓鞘神经相关蛋白主要有神经元内的14-3-3蛋白、轴索内的tau蛋白及胶质细胞内的S100蛋白[3]。为了探讨复发缓解型多发性硬化(Relapsing-remitting multiple sclerosis，RRMS)患者脑脊液及血清中非髓鞘神经相关蛋白的临床意义，本文选择近年来我院收治的RRMS患者和同期健康体检者作为研究对象进行对照研究，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2010年1月至2014年12月我院收治的70例RRMS患者作为观察组，同期来我院体检的70例健康体检者作为对照组，全部RRMS患者均经2005年McDonald诊断标准[4]进行确诊，全部研究对象签署知情同意书。其中对照组男性47例，女性23例，年龄16～59岁，平均(37.13±11.68)岁。观察组男性45例，女性25例，年龄15～60岁，平均(36.91±12.04)岁；病程4个月至10年，平均(3.62±2.11)年，全部研究对象排除感染性疾病及其他自身免疫性疾病，进行第一次检查前3个月内均未使用免疫抑制剂及糖皮质激素。两组受试者的性别、年龄等一般资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。本研究上报医院伦理委员会，研究同意后实施。

1.2 观察指标 两组受试者脑脊液及血清中的14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白。

1.3 检测方法

1.3.1 收集样本 全部研究对象均抽取5ml静脉血，进行离心获取血清样本，且均行腰椎穿刺术，收集脑脊液样本，各2ml，全部样品于-80℃冰箱保存。

1.3.2 脑脊液及血清中非髓鞘神经相关蛋白检测 采用ELISA法分别检测脑脊液及血清中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白，严格按照试剂盒(由武汉华美生物工程公司生产)说明书进行操作，且再反应结束15min之内采用酶联仪测量各孔光密度(OD)值。

1.4 统计学方法 应用SPSS19.0医学统计软件对所得数据进行分析，计数资料采用χ2检验，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组患者脑脊液的非髓鞘神经相关蛋白水平比较 观察组患者脑脊液中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白水平均较对照组高，两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 两组患者脑脊液的非髓鞘神经相关蛋白水平比较(±s,pg/ml)

表1 两组患者脑脊液的非髓鞘神经相关蛋白水平比较(±s,pg/ml)

组别14-3-3蛋白S100蛋白tau蛋白观察组(n=70)对照组(n=70)t值P值113246.5±8634.9 96671.4±8632.8 4.368＜0.05 743.6±33.9 651.7±39.5 5.747＜0.05 114.6±11.7 74.6±12.1 8.255＜0.05

2.2 两组患者血清中的非髓鞘神经相关蛋白水平比较 观察组患者血液中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白水平与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表2。

表2 两组患者血清中的非髓鞘神经相关蛋白水平比较(±s，pg/ml)

表2 两组患者血清中的非髓鞘神经相关蛋白水平比较(±s，pg/ml)

组别观察组(n=70)对照组(n=70) 24114.5±4297.6 22964.1±3954.8 622.4±97.2 581.6±86.7 61.3±10.3 54.6±9.4t值P值14-3-3蛋白1.953＞0.05 S100蛋白1.647＞0.05 tau蛋白1.553＞0.05

3 讨 论

多发性硬化是一种主要以中枢神经系统炎性脱髓鞘为特点的疾病，属于自身免疫性疾病。MS患者不仅存在脱髓鞘损伤，同时存在非髓鞘神经损伤，其中包括胶质细胞、轴索、神经元等的损伤。反应胶质细胞、轴索及神经元的损伤的非髓鞘神经相关蛋白主要包括神经元内的14-3-3、轴索内的tau及胶质细胞内的S100等[5-6]。研究提示，非髓鞘神经损害出现于多发性硬化的早期阶段，且为是多发性硬化功能障碍进展的关键因素[7]。

有关神经退行性疾病研究[8]显示，14-3-3蛋白可作为神经元急性损伤的标志物，该蛋白主要存在于在神经元内细胞核及细胞浆内，主要功能为调节蛋白跨膜转运、细胞分裂、细胞凋亡等[9]。本研究结果显示，观察组患者脑脊液中14-3-3蛋白水平较对照组高，两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

S100蛋白属于一种神经营养因子，在中枢神经系统中，其主要存在于少突神经胶质细胞与星形细胞内[10]。脑组织出现损伤时，神经胶质细胞能够自分泌及旁分泌S100蛋白，作用于神经元及神经胶质细胞，进一步促进神经的修复。然而胶质细胞出现坏死现象后，S100蛋白则会释放到脑脊液中提高其在脑脊液中的水平[11]。本研究结果显示，观察组患者脑脊液中S100蛋白水平较对照组高，两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

tau蛋白主要位于神经细胞的轴突内，属于一种微管相关蛋白，其主要参与细胞内物质转运、细胞有丝分裂等多种生命活动，维持轴突的形态及微管的稳定，并促进神经元的生长发育[12]。本研究结果显示，观察组患者脑脊液中tau蛋白水平较对照组高，两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

本研究显示，观察组患者脑脊液中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白水平均较对照组高，但血液中以上非髓鞘神经相关蛋白均无明显差异。此结果表明，与血液相比，脑脊液中非髓鞘神经相关蛋白更能显示中枢神经系统的损害状况，与相关研究[13]结果一致。

综上所述，RRMS患者脑脊液中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白非髓鞘神经相关蛋白均有明显升高现象，可以作为该病的检查指标，而血液中非髓鞘神经相关蛋白则无明显变化。

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Detection and clinical significance of non-myelinated nerve associated proteins in cerebrospinal fluid and serum of patients with relapsing-remitting multiple sclerosis.

HE Jia1,HE Jin-yu1,SONG Xiao-zheng1,ZHANG Li-ya1,HUANG Rui2.1.Department of Neurology,Chengdu 363 Hospital,Chengdu 610041,Sichuan,CHINA;2. Department of Neurology,Sichuan Provincial People's Hospital,Chengdu 610041,Sichuan,CHINA

ObjectiveTo investigate the detection and clinical significance of non-myelinated nerve associated proteins in cerebrospinal fluid(CSF)and serum of patients with relapsing-remitting multiple sclerosis(RRMS).MethodsSeventy patients with RRMS in our hospital from January 2010 to December 2014 were enrolled as the observation group,and 70 healthy people in our hospital for health examination at the same period were considered as the control group.The levels of non-myelinated nerve associated proteins(including 14-3-3 protein,S100 protein and tau protein)were analyzed and compared between the two groups.ResultsThe levels of 14-3-3 protein,S100 protein and tau protein in cerebrospinal fluid in the observation group were significantly higher than those in the control group(P＜0.05),but the levels of the proteins in serum showed no statistically significant difference between the two groups(P＞0.05).ConclusionThe levels of non-myelinated nerve associated proteins in cerebrospinal fluid are significantly increased in patients with relapsing-remitting multiple sclerosis,which can be used as indicators of the disease.However,the levels showed no significant change in serum of the patients.

Multiple sclerosis;Cerebrospinal fluid;Serum;Non-myelinated nerve associated proteins

R744.5+1

A

1003—6350（2015）21—3165—03

2015-05-05)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.21.1151

四川省卫生厅自然基金(编号：110104)

何 佳。E-mail：jiajiabaobei2005@163.com