外阴鳞状上皮增生皮损组织中K17、IFN-γ、PCNA的表达变化及意义

李娟，李宗恒，唐利，李燕，陈庄

(1泸州医学院附属医院，四川泸州 646000；2泸州医学院)

外阴鳞状上皮增生皮损组织中K17、IFN-γ、PCNA的表达变化及意义

李娟1，李宗恒1，唐利2，李燕2，陈庄2

(1泸州医学院附属医院，四川泸州 646000；2泸州医学院)

目的 观察外阴鳞状上皮增生皮损组织中角蛋白17(K17)、干扰素γ(IFN-γ)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达变化，并探讨其意义。方法 外阴鳞状上皮增生患者27例，取其皮损组织作为A组，取病灶周围正常皮肤组织作为B组。采用免疫组化SP法检测两组PCNA、K17和IFN-γ的表达，并分析其相关性。结果 A组增殖指数26.24%±6.60%，B组10.47%±4.77%，P<0.01。A组K17、IFN-γ的光密度值均高于B组(P均<0.01)。B组K17与IFN-γ的表达无相关性(r=0.122，P>0.05)，A组K17与IFN-γ表达呈正相关(r=0.607，P<0.01)。结论 外阴鳞状上皮增生可能与皮损组织中PCNA、K17、IFN-γ表达增加有关。

外阴鳞状上皮增生；角蛋白17；干扰素γ；增殖细胞核抗原；免疫组织化学

外阴鳞状上皮增生属于外阴白色病变的一种类型，迄今发病机制尚未阐明。研究认为，T细胞介导的局部免疫失调在外阴白色病变的发病中可能发挥一定作用[1]。由Th1细胞分泌的细胞因子如白细胞介素12(IL-12)、干扰素γ(IFN-γ)在外阴白色病变组织中表达明显高于正常皮肤组织[2]。研究发现，IFN-γ通过促进角蛋白17(K17)表达及K17和T细胞之间形成互相促进的环路，在银屑病的发病、加重、慢性化及复发过程中发挥关键作用[3]；此外，在表皮角质形成细胞出现异常增殖、分化时，都可出现K17的异常表达[4]。增殖细胞核抗原(PCNA)是细胞周期相关蛋白，参与DNA的合成，是反映细胞增殖活性的常用指标。本研究观察外阴鳞状上皮增生皮损组织PCNA、K17、IFN-γ的表达情况，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2010年3月～2013年9月泸州医学院附属医院收治外阴鳞状上皮增生患者27例，均经临床及病理确诊，年龄40～60岁、平均46岁，2个月内均未接受局部皮损治疗及服用皮质类固醇激素、免疫抑制剂，分别取其外阴鳞状上皮增生皮损组织作为A组，病灶周围正常皮肤组织作为B组。

1.2 方法

1.2.1 病理观察 采用HE染色。将A、B组标本常规用4%甲醛固定、脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡至水，常规HE染色，乙醇梯度脱水后二甲苯透明，中性树胶封片。光镜下观察组织及细胞形态。

1.2.2 皮肤组织PCNA、K17、IFN-γ检测 采用免疫组化SP法。分别将A、B组皮肤组织进行石蜡切片，常规脱蜡至水，放入柠檬酸修复液内修复，3% H2O2封闭阻断内源性过氧化物酶活性，PBS反复清洗，加入PCNA、K17、IFN-γ一抗(工作液浓度均为1∶100)，4 ℃过夜；加入二抗，37 ℃孵育30 min；DAB显色。增殖指数：随机选择5个高倍视野(Olympus显微镜，CX-31型，物镜400倍)，计算PCNA阳性细胞所占百分数，计数3次取平均值即为增殖指数。K17、IFN-γ：采用Motic Med6.0数码医学图像分析系统，在相同的放大倍数下每个切片计数10个视野，以阳性细胞染色的光密度值(OD值)表示表达量。

2 结果

2.1 两组HE染色结果 A组表皮角化过度，棘层肥厚，上皮嵴不同程度向下延伸，真皮浅层有不同程度淋巴细胞和少量浆细胞；B组无上述病理表现，显示正常皮肤组织。

2.2 两组增殖指数比较 A组增殖指数为26.24%±6.60%，B组为10.47%±4.77%，P<0.01。两组PCNA免疫组化染色结果见插页Ⅰ图2。

2.3 两组K17、IFN-γ阳性染色细胞定位及定量结果比较 A组K17、IFN-γ的OD值分别为0.198 9±0.043 9、0.212 3±0.042 7，B组分别为0.115 4±0.038 4、0.069 6±0.058 8，两组比较P均<0.01。两组K17、IFN-γ阳性染色细胞定位见表1，免疫组化染色结果见插页Ⅰ图2。

2.4 相关性分析结果 B组K17与IFN-γ无相关性(r=0.122，P>0.05)。A组K17和IFN-γ呈正相关(r=0.607，P<0.01)。

3 讨论

外阴鳞状上皮增生是以外阴鳞状上皮细胞良性增生为主要病理改变的外阴疾病，并出现外阴皮肤和黏膜色素改变和变性，是常见女性外阴慢性疾病[1]。

PCNA是细胞周期相关蛋白，从G1后期PCNA表达就开始增加，S期持续在高水平[5,6]，其表达水平能够较准确地反映细胞的生长速度，与细胞增殖状态密切相关，是反映细胞增殖活性的常用指标。本研究结果显示，外阴鳞状上皮增生皮损组织增殖指数明显高于正常皮肤组织；说明外阴鳞状上皮增生皮损组织的细胞增殖活性强，处于增殖状态。

角蛋白是一种广泛存在于表皮角质形成细胞内的蛋白，具有显著多样性[7]，具有维持细胞分化、参与细胞定位等功能[8]。角蛋白的特异性表达依赖于细胞类型、组织类型、发展阶段、分化状况及疾病的影响等[9,10]。在生理情况下，K17主要在汗腺基底细胞、外毛根鞘及皮肤基底细胞表达[11]；在病理情况下，如创面愈合的表皮、炎症性皮肤病、某些皮肤肿瘤及病理性或转化型增生组织K17常过度表达[12]。在本研究中，K17主要表达于正常皮肤组织的基底层、外阴鳞状上皮增生皮损组织的全层，且外阴鳞状上皮增生皮损组织中K17表达较正常皮肤组织明显增多；说明K17异常过多表达可能是表皮增殖过度、生长速度明显快于正常皮肤的原因之一。

研究发现，外阴鳞状上皮增生皮损组织IL-12、IFN-γ的表达明显高于正常对照皮肤组织[2]。本研究发现，IFN-γ主要表达于外阴鳞状上皮增生皮损组织的全层，表达强度明显高于正常皮肤组织；说明IFN-γ参与外阴鳞状上皮增生的发病，其异常增多可能是表皮从正常发展为外阴鳞状上皮增生的重要原因之一。

本研究相关性分析结果显示，正常皮肤组织中IFN-γ和K17无相关性，外阴鳞状上皮增生皮损组织中IFN-γ与K17呈正相关。机制可能为，病理情况下角质形成细胞主要对淋巴细胞产生的细胞因子起反应，细胞因子IFN-γ可以激活STAT1特异的转录因子，进而促进表皮细胞K17基因表达[13]。体外研究证实，IFN-γ可以诱导K17表达，K17是迄今为止报道的IFN-γ能惟一诱导表达的一种角蛋白[14]。

综上推测，各种内外因素刺激外阴皮肤，使外阴真皮中的慢性炎细胞释放以Th1型细胞为主的细胞因子，其中 IFN-γ为主的细胞因子被激活，使STAT1诱导K17基因大量表达，导致表皮组织中K17大量表达[15]，角质形成细胞大量增生，促进棘层肥厚、表皮增生[16]、过度角化等改变，导致炎因子持续存在，最终导致外阴鳞状上皮增生的发生、发展。

文中针对传统空时结构对时变干扰应对能力较差的问题，提出了空时频抗干扰结构，不仅能够有效地抑制大量宽带干扰和窄带干扰[19-20]，同时改进的子空间估计算法能快速的估计时变的干扰子空间以及信号子空间，估计误差大大降低，从而提高了PASTd算法的鲁棒性，对于干扰源实时变化和高动态环境下的抗干扰技术研究，有着较高的实际应用价值和意义。

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Expression and significance of K17, IFN-γ and PCNA in skin lesions of patients with squamous hyperplasia of vulva

LIJuan1,LIZong-heng,TANGLi,LIYan,CHENZhuang

( 1TheAffiliatedHospitalofLuzhouMedicalCollege,Luzhou646000,China)

Objective To observe the expression levels of the keratin 17 (K17), interferon-γ (IFN-γ) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in skin lesions of patients with squamous hyperplasia of vulva, and to explore their significance. Methods Twenty-seven patients with squamous hyperplasia of vulva, the lesions were taken as group A and the normal epidermis surrounding the lesions as the group B. The expression levels of PCNA, K17 and IFN- γ were detected by the immunohistochemical SP method, and the correlations with the squamous hyperplasia of vulva were analyzed. Results The proliferation indexes of group A and group B were 26.24%±6.60% and 10.47%±4.77%, respectively (P<0.01). The average optical density of K17 and IFN- γ in the group A was significantly higher than that in the group B (allP<0.01). In the group B, the expression of K17 was not related with the IFN-γ expression (r=0.122，P>0.05). In the group A, the expression of K17 was positively correlated with the IFN-γ expression (r=0.607，P<0.01). Conclusion The increased expression levels of K17, IFN-γ and PNCA in the skin lesions of patients with squamous hyperplasia of vulva has significantly relevance to its pathogenesis.

squamous hyperplasia of vulva; keratin 17; interferon-γ; proliferating cell nuclear antigen; immunohistochemistry

泸州医学院附属医院研究项目(09053)。

李娟(1984-)，女，硕士研究生，主要从事皮肤免疫病理学及小儿疾病研究。E-mail: lijuanyoyo@foxmail.com

陈庄(1954-)，男，博士，研究员，主要从事免疫病理学研究。E-mail: 917744799@qq.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.12.007

R751；R36

A

1002-266X(2015)12-0024-03

2014-05-16)