正交试验法优选香元消痔巴布贴提取工艺

李文兵　王洛临　李智勇　张诚光　范宋玲

【摘 要】 目的：优选香元消痔巴布贴的最佳水提工艺。方法：采用正交试验法，以浸膏质量和小檗碱的含量为指标，对加水用量、提取时间、提取次数进行优选。结果：香元消痔巴布贴水提的最佳提取工艺为每次加10倍量水，提取2次，每次1.5h。结论：优选的水提取工艺方法可行、工艺稳定、重现性好。

【关键词】 香元消痔巴布贴；提取工艺；小檗碱；正交试验

【中图分类号】R283.6 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）04-0017-03

Optimization of Extract Technology for Xiangyuan xiaozhi cataplasm by Orthogonel Design

LI Wen-bing WANG Luo-lin LI Zhi-yong ZHANG Cheng-guang FAN Song-ling

Guangdong Second Provincial Traditional Medicine Hospital，Guangzhou 510095，China

Abstract：Objective To optimize the extract process of Xiangyuan xiaozhi cataplasm. Methods The optimum conditions of Xiangyuan xiaozhi cataplasm were selected with the extractum and the active components berberine hydrochloride as the indicators. Results The optimal process was 10 times water adding into herbal pieces， then reflux extracting 2 times and 1.5 hours for each time. Conclusion The optimal extration process is stable and reasonable， which can effectively extract the active ingredients of Xiangyuan xiaozhi cataplasm.

Keywords：Xiangyuan xiaozhi cataplasm；Orthogonel Design； berberine hydrochloride

香元消痔巴布贴处方是广东省第二中医院的经验处方，由黄柏、地榆、元胡等八味中药材组成，具有清热解毒、散寒除湿、凉血止血的功效，主要用于湿热所致的内外痔、混合痔疮。黄柏为本方的君药。现代研究表明，黄柏中的生物碱为有效成分，试验选择小檗碱含量和水溶性固形物质量为评价指标，对影响提取效果的提取次数、加水量和提取时间进行优化，以确定其最佳提取工艺[1-3]。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 安捷伦1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）； DHG9203A型电热鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；HWS26型电热恒温水浴锅（上海梅香仪器有限公司）；XS205DU型分析天平（瑞士梅特勒托利多）。

1.2 试药 小檗碱对照品（批号110713-200301，中国食品药品检定研究院）；黄柏、槐花、地榆、元胡等购于广州市药材公司，经广东省第二中医院李庆勇副主任中药师鉴定，均为《中华人民共和国药典》2010年版收载的正品；水为超纯水；甲醇为色谱纯；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 正交试验因素水平的确定 采用正交试验法，在预试验结果的基础上，以提取液中总浸膏得量和小檗碱的含量为评价指标，对影响提取工艺的主要因素有加水倍量、提取时间、提取次数进行优选，因素水平设计见表1。

2.2 药材提取

2.2.1 样品的制备 按处方比例，称取药材共9份，按照L9（3）4正交表安排分别进行各实验提取，过滤，合并，提取液浓缩并定容至500ml，即得；分别测定固形物得量和小檗碱含量。

2.2.2 阴性对照溶液制备 按处方比例称取除黄柏外的其余药材，按“2.2.1”项下方法制备阴性样品溶液。

2.3 总固形物得量的测定 精密量取各正交试验样品25ml，置已知恒重的蒸发皿内，水浴蒸干，置105℃烘箱中，干燥3h，取出置干燥器中冷却0.5h，称重，计算总固体得量。计算公式：

总固体物得量（g）= 25ml浓缩液干浸膏质量×50025

2.4 小檗碱的含量测定

2.4.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；柱温： 25℃；流动相：乙腈-0.1 %磷酸（50∶50）（每100ml流动相加入十二烷基硫酸钠0.1g）；流速：1ml/min；检测波长：265nm；进样量：10μl，理论塔板数以盐酸小檗碱计不低于4000。

2.4.2 对照品溶液的制备 精密称取小檗碱对照品适量，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含1.005mg小檗碱的对照品溶液。

2.4.3 供试品溶液的制备 分别精密吸取正交试验所得各样品溶液2ml，置25ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4.4 系统性试验 按“2.4.1”项下色谱条件，分别取上述对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10μl进样，进行系统性试验，结果见图1-3，小檗碱分离度良好，阴性无干扰，理论塔板数按小檗碱峰计算不低于4000。

2.4.5 线性关系考察 精密取上述对照品溶液2、5、10、15、20 μl注入高级液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积对数为纵坐标，进样量为横坐标进行线性回归，得回归方程为Y=2.53X-33.44，r=0.9998，结果表明，小檗碱在浓度范围2.01～20.1μg内线性关系良好。

2.4.6 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液10μl，重复进样6次，按“2.4.1”项下色谱条件测定。结果小檗碱峰面积的RSD为1.26%，表明仪器精密度良好。

2.4.7 稳定性试验 取同一份样品，分别于0、1、2、4、8、12h，进样10μl，按“2.4.1”项下色谱条件测定。结果小檗碱峰面积积分值RSD为1.58%，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。

2.4.8 重复性试验 取同一批样品5份，按“2.4.3”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积并计算含量。结果测得小檗碱平均含量的RSD为0.55%，表明该方法重复性良好。

2.4.9 加样回收率试验 精密吸取已知含量的样品6份，分别精密加入小檗碱对照品1.005 mg，按2.4.1项下方法测定，计算加样回收率，结果小檗碱平均回收率为98.86%，RSD为1.76%，表明此方法可行。

2.5 数据处理与工艺优选 用综合加权评分法，总固形物量和小檗碱含量9次试验的最大值为100分，将各指标成分的总量分别转换为评分值，总固体得率的加权系数为0.4，小檗碱含量的加权系数为0.6，将每次试验的各指标成分的评分值乘以相应的加权系数后求和，得综合评分值，以综合评分值计算正交试验结果，并进行方差分析，结果见表2、3。

结果表明，由直观分析可知因素主次为提取次数（A）>提取时间（C）>水用量（B）。方差分析表明，三个因素对试验结果均有显著的影响，确定最佳提取工艺为：每次分别加10倍量水，提取1.5K，回流提取2次，即A2B2C3。

2.6 最佳工艺验证 按正交试验结果的最佳工艺验证试验3次，结果见表4。

验证试验结果表明，三个平行试验的综合评分结果与正交试验结果之间差异不大，提示所优选的提取工艺条件基本稳定。

3 讨论

本文选择将香元消痔巴布贴中黄柏、槐花、地榆、元胡等水提取进行工艺研究，根据各药材化学成份性质分析，黄柏中的主要有效成分盐酸小檗碱为季铵盐易溶于水，课题组经过多次试验显示，盐酸小檗碱转移率较高，最后确定以提取液中总固形物含量和小檗碱的含量为评价指标，对提取工艺进行优选，最佳提取工艺为：每次分别加10倍量水，提取1.5h，回流提取2次，即A2B2C3。

通过验证该提取工艺，用高效液相色谱法测定小檗碱的含量，数据准确、方法简便、重复性好，能有效地控制该制剂的质量，而且该工艺生产成本低、生产工艺稳定、有效成分提取率高，适合于医院制剂小规模的生产。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010： 286-287.

[2]杨明艳，马相锋，李洪玉，等.正交设计法优选消癖健乳巴布膏水提工艺[J].现代医院，2012，12（1）：60-62.

[3]尹华，章建华，许丛辉，等.三黄散瘀巴布剂中黄柏的提取工艺研究[J].中华中医药学刊，2011，29（2）：235-237.

（收稿日期：2014.11.19）